本發(fā)明涉及免疫學(xué)相關(guān)。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種貓saa蛋白的雙特異性抗體及其用途。

背景技術(shù)：

1、急性時(shí)相反應(yīng)(acute-phase?response,apr)是由局部炎癥所觸發(fā)的系統(tǒng)性反應(yīng)，在急性和慢性炎癥中都能見(jiàn)到。血清淀粉樣蛋白(saa)是apr期間大量產(chǎn)生的主要急性期蛋白質(zhì)。目前，saa濃度的升高已成為炎癥的臨床敏感標(biāo)志物。saa除了表征的炎性因子之外，它可能在炎癥過(guò)程中起穩(wěn)態(tài)作用。

2、saa是組織淀粉樣蛋白a的前體物質(zhì)，是一種由肝臟細(xì)胞產(chǎn)生的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。在正常貓的血清中saa以恒量存在，但在炎癥或感染急性期的6-8h內(nèi)saa可增加數(shù)百至上千倍，血液中saa含量在24-48h達(dá)到峰值，清除病原體后又可迅速的降低至正常水平，是反映機(jī)體感染情況和炎癥恢復(fù)的靈敏指標(biāo)，是一種靈敏的診斷細(xì)菌或病毒感染的標(biāo)志物。saa升高見(jiàn)于病毒、支原體、細(xì)菌感染，且敏感性高于crp；貓crp在細(xì)菌感染，病毒及支原體等病原體感染不升高或僅輕微升高，可為臨床提供更好的參考價(jià)值。

3、一般來(lái)說(shuō)，高密度脂蛋白(hdls)被認(rèn)為是抗動(dòng)脈粥樣硬化的。在研究hdl蛋白質(zhì)組成的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，急性期蛋白血清淀粉樣蛋白a可能摻入到hdl顆粒中。有研究表明saa是心血管死亡率的強(qiáng)有力標(biāo)志物。

4、在獸醫(yī)學(xué)中，血液中的saa測(cè)量可用于亞臨床炎癥的診斷，監(jiān)測(cè)有感染或炎癥條件下的動(dòng)物的治療效果，以及監(jiān)測(cè)正在接受手術(shù)的患者。目前市面上用于檢測(cè)saa濃度的工具，主要還是利用酶聯(lián)免疫分析法(elisa)進(jìn)行定量。上述監(jiān)測(cè)方法的問(wèn)題是耗時(shí)較長(zhǎng)，或者測(cè)定結(jié)果不太精確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題和/或缺陷，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。

2、本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段及其用途。

3、為此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

4、第一方面，貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，包括：

5、特異性識(shí)別和結(jié)合貓saa蛋白的第一功能域，所述第一功能域包括抗貓saa雙特異性抗體的scfv1，所述scfv1的重鏈可變區(qū)vh?cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seq?idno:1、2和3所示，所述scfv1的輕鏈可變區(qū)vl?cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seq?idno:4、5和6所示；以及

6、特異性識(shí)別和結(jié)合貓saa蛋白的第二功能域，所述第二功能域包括抗貓saa雙特異性抗體的scfv2區(qū)，所述scfv2的重鏈可變區(qū)vh?cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seqid?no:7、8和9所示，所述scfv2的輕鏈可變區(qū)vl?cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seqid?no:10、11和12所示。

7、優(yōu)選的是，所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段中，所述scfv1的重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:13所示，所述scfv1的輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?id?no:14所示。

8、優(yōu)選的是，所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段中，所述scfv2的重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:15所示，所述scfv2的輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?id?no:16所示。

9、優(yōu)選的是，所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段中，所述scfv1的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過(guò)linker連接，所述scfv2的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)也通過(guò)linker連接，所述linker為(g4s)n。

10、進(jìn)一步地，所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段中，n為3。

11、第二方面，編碼上述貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段的基因。

12、第三方面，包括上述基因的重組載體。

13、第四方面，用于快速診斷貓炎癥和組織損傷的組合物，其包含上述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段。

14、第五方面，試劑盒，所述試劑盒包括上述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，所述試劑盒是膠乳增強(qiáng)免疫法或化學(xué)發(fā)光免疫法體外快速檢測(cè)貓saa試劑盒。

15、優(yōu)選的是，所述的試劑盒中，所述試劑盒用于檢測(cè)貓血漿中的saa蛋白。

16、第六方面，上述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段于制備貓炎癥和組織損傷程度評(píng)估及預(yù)后評(píng)估的藥物或試劑盒中的用途。

17、本發(fā)明至少包括以下有益效果：

18、本發(fā)明首先篩選出針對(duì)貓saa蛋白高親和力的兩個(gè)單克隆抗體，再通過(guò)基因工程手段得到一種基因重組的貓saa雙特異性抗體，并將其用于leia法檢測(cè)貓saa，該方法的試劑盒靈敏度更高，檢測(cè)范圍更廣，其可用于不同的臨床診斷需求。

19、本發(fā)明能夠快速動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)貓血漿saa濃度，對(duì)貓炎癥和組織損傷盡早診斷和治療具有重要指示意義。

20、本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。

技術(shù)特征：

1.貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，其特征在于，包括：

2.如權(quán)利要求1所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，其特征在于，所述scfv1的重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:13所示，所述scfv1的輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?id?no:14所示。

3.如權(quán)利要求1所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，其特征在于，所述scfv2的重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:15所示，所述scfv2的輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?id?no:16所示。

4.如權(quán)利要求1所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，其特征在于，所述scfv1的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過(guò)linker連接，所述scfv2的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)也通過(guò)linker連接，所述linker為(g4s)n。

5.編碼如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段的基因。

6.包括如權(quán)利要求5所述的基因的重組載體。

7.用于快速診斷貓炎癥和組織損傷的組合物，其特征在于，其包含如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段。

8.試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，所述試劑盒是膠乳增強(qiáng)免疫法或化學(xué)發(fā)光免疫法體外快速檢測(cè)貓saa試劑盒。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒用于檢測(cè)貓血漿中的saa蛋白。

10.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的貓saa蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段于制備貓炎癥和組織損傷程度評(píng)估及預(yù)后評(píng)估的藥物或試劑盒中的用途。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了貓SAA蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段，包括：特異性識(shí)別和結(jié)合貓SAA蛋白的第一功能域和第二功能域，第一功能域的VH?CDR1、CDR2、CDR3，VL?CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:1～6所示，第二功能域的VH?CDR1、CDR2、CDR3，VL?CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:7～12所示。本發(fā)明還公開(kāi)了貓SAA蛋白的雙特異性抗體或其功能性片段于制備貓炎癥和組織損傷程度評(píng)估及預(yù)后評(píng)估的藥物或試劑盒中的用途。本發(fā)明能夠快速動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)貓血漿SAA濃度，對(duì)貓的炎癥和組織損傷盡早診斷和治療具有重要指示意義。

技術(shù)研發(fā)人員：肖秀孝,劉鵬飛,許可,鄭長(zhǎng)龍,趙占勇
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京達(dá)成生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10