本發(fā)明涉及植物分子生物學(xué)領(lǐng)域,特別涉及桂花激素處理下lncrna內(nèi)參基因及其引物和應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、桂花(osmanthus?fragrans)是我國傳統(tǒng)十大名花,具有獨(dú)特的香氣和藥用價(jià)值。在植物生長發(fā)育中,激素扮演著重要的調(diào)控角色,而lncrna作為一類重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,也參與了植物生長發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。因此,研究激素處理?xiàng)l件下桂花內(nèi)參lncrna及其引物和應(yīng)用具有重要的背景意義?,F(xiàn)在關(guān)于桂花aba、meja和乙烯利處理?xiàng)l件下lncrna的研究還未曾有過報(bào)道。探究桂花激素處理?xiàng)l件下lncrna表達(dá)差異的研究過程中,需要穩(wěn)定可靠的內(nèi)參lncrna作為參照來進(jìn)行qrt-pcr檢測和驗(yàn)證基因的表達(dá)水平,因此篩選桂花aba、meja和乙烯利處理?xiàng)l件下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參lncrna對其實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性起著關(guān)鍵作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明的目的在于提供桂花激素處理下的lncrna內(nèi)參,該內(nèi)參能滿足實(shí)時(shí)熒光定量檢測桂花轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的要求,提高桂花基因表達(dá)分析研究的穩(wěn)定性、可靠性和效率。
2、為了達(dá)到以上目的,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
3、桂花激素處理lncrna內(nèi)參基因,所述lncrna內(nèi)參基因包括以下(1)~(4)中的至少一種;
4、(1)脫落酸處理下的lncrna內(nèi)參基因lnc00239991和18s;
5、(2)茉莉酸甲酯處理下的lncrna內(nèi)參基因lnc00265419和lnc00249739;
6、(3)乙烯利處理下的lncrna內(nèi)參基因lnc00229717和lnc00044331;
7、(4)脫落酸、茉莉酸甲酯和乙烯利處理下的lncrna內(nèi)參基因lnc00265419和lnc00239991;
8、其中,lnc00239991的核酸序列如seq?id?no.1所示,18s的核酸序列如seq?idno.2所示,lnc00265419的核酸序列如seq?id?no.3所示,lnc00249739的核酸序列如seq?idno.4所示,lnc00229717的核酸序列如seq?id?no.5所示,lnc00044331的核酸序列如seq?idno.6所示。
9、本發(fā)明還進(jìn)一步提供了用于檢測所述lnc00239991的專有引物,其序列為:
10、正向引物:5’-tttcttggtcgtgtctttagca-3’(seq?id?no.7);反向引物:5’-caagttgcgggagacgttat-3’(seq?id?no.8)。
11、用于檢測所述18s的專有引物,其序列為:正向引物:5’-ccataaacgatgccgaccag-3’(seq?id?no.9);反向引物:5’-gccttgcgaccatactccc-3’(seq?id?no.10)。
12、用于檢測所述lnc00265419的專有引物,其序列為:正向引物:5’-cattattgttacgccgaccac-3’(seq?id?no.11);反向引物:5’-gatcgtttagccgctctttct-3’(seq?id?no.12)。
13、用于檢測所述lnc00249739的專有引物,其序列為:正向引物:5’-tggacttggctgacccttga-3’(seq?id?no.13);反向引物:5’-ttccaatcttgcggactgac-3’(seqid?no.14)。
14、用于檢測所述lnc00229717的專有引物,其序列為:正向引物:5’-cttagccgcccatccca-3’(seq?id?no.15);反向引物:5’-cacccgcattatccgttga-3’(seq?idno.16)。
15、用于檢測所述lnc00044331的專有引物,其序列為:正向引物:5’-gggttgtggcgggtaattcatcttg-3’(seq?id?no.17);反向引物:5’-ggtaagggatgtaataatgtgctga-3’(seq?id?no.18)。
16、進(jìn)一步的,本發(fā)明涉及所述桂花激素處理lncrna內(nèi)參基因或其引物在桂花lncrna熒光定量pcr分析中的應(yīng)用。
17、進(jìn)一步的,本發(fā)明還涉及所述桂花激素處理lncrna內(nèi)參基因的專有引物在桂花lncrna熒光定量pcr分析中的應(yīng)用。所述專有引物如前文所示。
18、與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果是:
19、本發(fā)明通過文獻(xiàn)資料查閱、數(shù)據(jù)庫搜索和分析,篩選了17個(gè)內(nèi)參的基因,通過5種算法(deltact、genorm、normfinder、bestkeeper和reffinder)評估候選內(nèi)參的穩(wěn)定性,獲得了適合于桂花aba處理?xiàng)l件下表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參18s+lnc00239991,桂花meja處理?xiàng)l件下表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參lnc00265419+lnc00249739,桂花乙烯利處理?xiàng)l件下表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參lnc00229717+lnc00044331,桂花激素處理?xiàng)l件下表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因lnc00265419+lnc00239991。揭露了這些內(nèi)參序列,并依次設(shè)計(jì)了內(nèi)參的實(shí)時(shí)熒光定量pcr引物,這些引物特異性強(qiáng),擴(kuò)增效率高,從而大大的提高了采用實(shí)時(shí)熒光定量檢測桂花基因的檢測效率,提高了檢測結(jié)果的可信度。這些結(jié)果為以后進(jìn)行桂花aba、meja、乙烯利處理?xiàng)l件下基因的篩選及l(fā)ncrna表達(dá)分析提供了一些基礎(chǔ)。
1.桂花激素處理lncrna內(nèi)參基因,其特征在于,所述lncrna內(nèi)參基因包括以下(1)~(4)中的至少一種;
2.用于檢測權(quán)利要求1所述lnc00239991的專有引物,其特征在于,正向引物:5’-tttcttggtcgtgtctttagca-3’;反向引物:5’-caagttgcgggagacgttat-3’。
3.用于檢測權(quán)利要求1所述18s的專有引物,其特征在于,正向引物:5’-ccataaacgatgccgaccag-3’;反向引物:5’-gccttgcgaccatactccc-3’。
4.用于檢測權(quán)利要求1所述lnc00265419的專有引物,其特征在于,正向引物:5’-cattattgttacgccgaccac-3’;反向引物:5’-gatcgtttagccgctctttct-3’。
5.用于檢測權(quán)利要求1所述lnc00249739的專有引物,其特征在于,正向引物:5’-tggacttggctgacccttga-3’;反向引物:5’-ttccaatcttgcggactgac-3’。
6.用于檢測權(quán)利要求1所述lnc00229717的專有引物,其特征在于,正向引物:5’-cttagccgcccatccca-3’;反向引物:5’-cacccgcattatccgttga-3’。
7.用于檢測權(quán)利要求1所述lnc00044331的專有引物,其特征在于,正向引物:5’-gggttgtggcgggtaattcatcttg-3’;反向引物:5’-ggtaagggatgtaataatgtgctga-3’。
8.權(quán)利要求1所述桂花激素處理lncrna內(nèi)參基因在桂花lncrna熒光定量pcr分析中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1所述桂花激素處理lncrna內(nèi)參基因的專有引物在桂花lncrna熒光定量pcr分析中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述專有引物如權(quán)利要求2~權(quán)利要求7所示。