本發(fā)明涉及一種檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組及應(yīng)用，屬于微生物檢測。

背景技術(shù)：

1、支氣管敗血性波氏桿菌(bordetella?bronchiseptica，b.b)是家貓的主要病原體之一，在高養(yǎng)殖密度條件下，如救援收容所和多貓家庭，發(fā)病率更高。也有過偶發(fā)的人畜共患病例。波氏桿菌是一種革蘭氏陰性菌，定植于哺乳動物的呼吸道，可在受感染貓的口腔和鼻腔分泌物中傳播并在宿主呼吸道的纖毛上皮上定植，可能導(dǎo)致慢性感染?；加泻粑兰膊〉墓穼ω垇碚f也是一種感染風(fēng)險。b.b從感染的貓的口腔和鼻腔分泌物中脫落，故直接或間接接觸可能導(dǎo)致其傳播。與貓杯狀病毒(fcv)和貓皰疹病毒(fhv)一樣，過度擁擠和管理不善容易導(dǎo)致感染和患病。在一項研究中，對多貓(＞5只貓)家庭與呼吸道疾病相關(guān)的病原體進行了流行性病學(xué)調(diào)查，pcr檢測結(jié)果表明有癥狀的貓中b.b有5％陽性率，而無癥狀的貓中有1.3％陽性率。一般認為，養(yǎng)殖群體越大，陽性率有可能越高。另外，某些救援避難所的衛(wèi)生條件較差，也可能導(dǎo)致較高的血清陽性率。

2、b.b引起的臨床癥狀包括發(fā)燒、咳嗽、打噴嚏、眼部分泌物和淋巴結(jié)病，輕癥一般在10天后消失。從上述輕度感染到伴有呼吸困難、發(fā)紺和死亡的嚴重肺炎。肺炎通常見于10周以下的小貓，但年長的貓也會受到影響。咳嗽貓(急性和慢性)應(yīng)考慮支氣管敗血性波氏桿菌感染。針對b.b感染，即使只有輕微的癥狀，也有必要進行抗菌治療。因為其可能發(fā)展到下呼吸道定植。而嚴重感染的貓則需要支持性治療，以解決脫水和電解質(zhì)、酸堿紊亂，病癥最為嚴重的貓還可能需要重癥護理。支氣管敗血性波氏桿菌的防控措施主要是減少和病貓的接觸，盡可能減少飼養(yǎng)密度，并對環(huán)境進行清潔和消毒，以盡量減少傳播的風(fēng)險。對常見其他貓呼吸道病原體，如fcv和fhv，的防控也有助于控制感染。

3、目前，針對支氣管敗血性波氏桿菌的檢測方法主要有病毒分離培養(yǎng)、血清學(xué)診斷方法，分子生物學(xué)檢測方法等。其中，由于鼻腔中還存在其他的常見菌，可能會干擾b.b的分離，導(dǎo)致檢出概率大大降低。另外，病毒分離培養(yǎng)和血清學(xué)診斷的方法在臨床上適用性不高，是更適用于實驗室檢驗的兩種方法。免疫層析法可快速檢測b.b，但由于其靈敏度不夠，該法只能用于貓發(fā)病后機體排毒期間。

4、分子生物學(xué)診斷方法中最常見的是是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(pcr)，pcr是目前大多數(shù)病原體檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其擴增必須的pcr儀較昂貴，反應(yīng)時間較長，一般需要1-2個小時或更長，故pcr技術(shù)在獸醫(yī)基層實驗室推廣應(yīng)用較難。而對于企業(yè)來說，儀器維護及回收成本偏高。因此，根據(jù)獸醫(yī)基層檢驗室的需求，急需開發(fā)了一種靈敏度特異性好，操作方便且能夠迅速獲取檢測結(jié)果的支氣管敗血性波氏桿菌檢測方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組及應(yīng)用，可以有效解決上述問題。

2、本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

3、一種檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組，包括引物組f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及探針p-1，所述引物組f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1的堿基序列分別如seq?id?no:2-7所示，所述探針p-1的堿基序列分別如seq?id?no:8所示。

4、在一些實施例中，所述f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及p-1的摩爾比為1：1：8：8：4：4：1。

5、在一些實施例中，所述lamp引物探針組檢測的靶基因為flaa基因的1140-1465bp段，其堿基序列分別如seq?id?no:1所示。

6、一種上述的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組在制備檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp試劑中的應(yīng)用。

7、一種上述的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組在制備檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp試劑盒中的應(yīng)用。

8、本發(fā)明的有益效果是：

9、本發(fā)明的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組，可以用于檢測支氣管敗血性波氏桿菌，檢測靈敏度高，特異性強。

10、本發(fā)明lamp引物探針組應(yīng)用lamp探針法，相較于傳統(tǒng)的lamp染料法和比色法具有以下優(yōu)勢：更有效的減少了非特異性擴增的干擾；可以通過對不同病原體的特異探針標(biāo)記不同的熒光基團，實現(xiàn)單管多重的檢測。

11、本發(fā)明lamp引物探針組相較于普通探針序列更短，熒光基團淬滅更加完全，從而降低熒光背景，提高信噪比，同時，探針序列短也使得pcr過程中更容易被完全水解，pcr效率高，熒光信號釋放充分。

技術(shù)特征：

1.一種檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組，其特征在于，包括引物組f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及探針p-1，所述引物組f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1的堿基序列分別如seq?id?no:2-7所示，所述探針p-1的堿基序列分別如seq?id?no:8所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組，其特征在于，所述f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及p-1的摩爾比為1：1：8：8：4：4：1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組，其特征在于，所述lamp引物探針組檢測的靶基因為flaa基因的1140-1465bp段，其堿基序列如seq?idno:1所示。

4.一種權(quán)利要求1至3任一項所述的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組在制備檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp試劑中的應(yīng)用。

5.一種權(quán)利要求1至3任一項所述的檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp引物探針組在制備檢測支氣管敗血性波氏桿菌的lamp試劑盒中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種檢測支氣管敗血性波氏桿菌的LAMP引物探針組，包括引物組F3?1、B3?1、FIP?1、BIP?1、LF?1、LB?1及探針P?1，所述引物組F3?1、B3?1、FIP?1、BIP?1、LF?1、LB?1的堿基序列分別如SEQ?ID?NO:2?7所示，所述探針P?1的堿基序列分別如SEQ?ID?NO:8所示。LAMP引物探針組可用于檢測支氣管敗血性波氏桿菌，檢測靈敏度高，特異性強。

技術(shù)研發(fā)人員：王露,段雪昆
受保護的技術(shù)使用者：廈門寶太生物科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10