本發(fā)明屬于糖尿病心血管病變治療領域，特別涉及一種apoa-i抗糖功能突變體及其制備方法和應用。

背景技術：

1、2023年8月，歐洲心臟病協(xié)會(esc)發(fā)布的《2023年歐洲心臟病協(xié)會(esc)關于糖尿病心血管疾病管理的指南》，開創(chuàng)“糖尿病心臟病學”元年。根據(jù)指南，他汀類藥物或者pcsk9抑制劑或抑制ldl-c合成或促進ldl-c降解，是動脈粥樣硬化治療的基石。值得注意的是，無論他汀類或者pcsk9抑制劑，都是以降低ldl-c這個心血管危險因素為出發(fā)點。事實上，除了降低血清總膽固醇(tc)和低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)水平外，還可以通過升高心血管保護因素——高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)來使冠心病患者獲益。一項大規(guī)模薈萃研究顯示，在接受他汀類藥物治療的患者中，即使其低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)水平很低，hdl-c和apoa-i(hdl主要功能蛋白成分)水平依然獨立于ldl-c與心血管風險緊密相關，其中apoa-i水平上升還能夠促使主要心血管事件風險降低。這些發(fā)現(xiàn)表明，升高血漿載脂蛋白a-i水平或可作為他汀或pcsk9的補充療法，通過協(xié)同作用，進一步改善患者血脂。

2、hdl(高密度脂蛋白)是唯一確認的心血管保護因子，載脂蛋白apoa-i占hdl蛋白含量的70％以上，是hdl功能的執(zhí)行者，發(fā)揮了維持膽固醇穩(wěn)態(tài)，促進膽固醇逆轉運，抗炎，抗氧化和抗動脈粥樣硬化等心血管保護功能。但在糖尿病時，hdl中最主要的蛋白成分apoa-i(約占整個hdl蛋白成分的70％以上)會發(fā)生非酶糖基化修飾，不但導致hdl喪失其保護正常功能，甚至表現(xiàn)出促進動脈粥樣硬化的負性效應。目前國內(nèi)外對于apoa-i非酶糖化修飾了解寥寥，以抗糖為目標，針對糖尿病患者心血管病變干預的apoa-i改造更是絕無僅有。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種apoa-i抗糖功能突變體及其制備方法和應用，該突變體具有絕佳的抗糖特性和生物安全性，能顯著改善糖尿病小鼠血脂，降低肝臟異位脂肪沉積和抑制動脈粥樣斑塊的形成，具有良好的市場應用前景。

2、本發(fā)明提供了一種apoa-i抗糖功能突變體，通過構建apoae125c/e136c重組蛋白并交聯(lián)成二聚體而得。

3、進一步的，所述apoae125c/e136c重組蛋白對應于天然apoa-i氨基酸序列中125、136位置的氨基酸并非谷氨酸，而是半胱氨酸，如seq?id?no:1所示。

4、進一步的，所述交聯(lián)是指利用交聯(lián)劑在apoae125c/e136c重組蛋白a的125位半胱氨酸和apoae125c/e136c重組蛋白b的136位半胱氨酸形成硫醚鍵交聯(lián)。

5、進一步的，所述交聯(lián)劑為雙馬來酰亞胺基己烷。

6、本發(fā)明還提供了一種apoa-i抗糖功能突變體的制備方法，包括如下步驟：

7、(1)將含有apoae125c/e136c重組蛋白的質(zhì)粒轉化到感受態(tài)細胞中，隨后進行表達和純化；

8、(2)在apoae125c/e136c重組蛋白溶液加入交聯(lián)劑進行交聯(lián)，得到apoa-i抗糖功能突變體。

9、本發(fā)明還提供了一種如權利要求1所述的apoa-i抗糖功能突變體在制備糖尿病心血管病變治療藥物中的應用。

10、進一步的，所述藥物還包含藥學上可接受的載體和/或輔料。

11、進一步的，所述藥學上可接受的載體和/或輔料包括稀釋劑、粘合劑、表面活性劑、致濕劑、吸附載體、潤滑劑、填充劑、崩解劑中的至少一種。

12、有益效果

13、本發(fā)明的apoa-i抗糖功能突變體具有絕佳的抗糖特性和生物安全性，能顯著改善糖尿病小鼠血脂，降低肝臟異位脂肪沉積和抑制動脈粥樣斑塊的形成，具有良好的市場應用前景。

技術特征：

1.一種apoa-i抗糖功能突變體，其特征在于：通過構建apoae125c/e136c重組蛋白并交聯(lián)成二聚體而得。

2.根據(jù)權利要求1所述的apoa-i抗糖功能突變體，其特征在于：所述apoae125c/e136c重組蛋白對應于天然apoa-i氨基酸序列中125、136位置的氨基酸并非谷氨酸，而是半胱氨酸，如seq?id?no:1所示。

3.根據(jù)權利要求1所述的apoa-i抗糖功能突變體，其特征在于：所述交聯(lián)是指利用交聯(lián)劑在apoae125c/e136c重組蛋白a的125位半胱氨酸和apoae125c/e136c重組蛋白b的136位半胱氨酸形成硫醚鍵交聯(lián)。

4.根據(jù)權利要求3所述的apoa-i抗糖功能突變體，其特征在于：所述交聯(lián)劑為雙馬來酰亞胺基己烷。

5.一種apoa-i抗糖功能突變體的制備方法，包括如下步驟：

6.一種如權利要求1所述的apoa-i抗糖功能突變體在制備糖尿病心血管病變治療藥物中的應用。

7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于：所述藥物還包含藥學上可接受的載體和/或輔料。

8.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于：所述藥學上可接受的載體和/或輔料包括稀釋劑、粘合劑、表面活性劑、致濕劑、吸附載體、潤滑劑、填充劑、崩解劑中的至少一種。

技術總結
本發(fā)明涉及一種apoA?I抗糖功能突變體及其制備方法和應用，所述突變體通過構建apoA<subgt;E125C</subgt;/<subgt;E136C</subgt;重組蛋白并交聯(lián)成二聚體而得。本發(fā)明的apoA?I抗糖功能突變體具有絕佳的抗糖特性和生物安全性，能顯著改善糖尿病小鼠血脂，降低肝臟異位脂肪沉積和抑制動脈粥樣斑塊的形成，具有良好的市場應用前景。

技術研發(fā)人員：代楊,陸林,蒙國宇
受保護的技術使用者：上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/10