本發(fā)明涉及微生物，具體涉及一種凝結魏茨曼氏菌的后生元及其制備方法與應用。

背景技術：

1、2021年5月，國際益生菌和益生元科學協(xié)會(isapp)發(fā)布了后生元共識聲明：后生元是對宿主健康有益的無生命微生物和/或其成分的制劑，包括無生命的菌體、益生菌代謝產物和/或益生菌裂解后的成分。其中，代謝產物主要有胞外多糖、短鏈脂肪酸、細菌素和有機酸等；菌體成分主要有脂磷壁酸、磷壁酸、肽聚糖、衍生多肽和細胞表面蛋白等。近年來的大量研究表明，后生元對人體健康具有重要作用，其中包括調節(jié)局部或全身免疫反應、調節(jié)腸道菌群并增強腸上皮細胞屏障功能和調節(jié)全身代謝活動等。

2、在cn115068510a的專利中公開了一種乳桿菌脂磷壁酸的提取方法及其抗炎活性，其優(yōu)點是提取方法快速高效，并證明多種乳桿菌的脂磷壁酸能夠降低脂多糖(lps)引起的巨噬細胞raw264.7的炎癥反應。目前，關于凝結魏茨曼氏菌的后生元及其相關應用的研究較少。

技術實現思路

1、本發(fā)明要解決的技術問題是：提供一種凝結魏茨曼氏菌的后生元及其制備方法與應用。凝結魏茨曼氏菌的后生元可增強巨噬細胞的吞噬活性、增強巨噬細胞的細胞因子和no分泌能力、增強免疫功能相關基因和蛋白的表達水平，具有免疫增強功能；誘導人pbmc細胞對癌細胞的殺傷作用，可用作治療癌癥的藥物。

2、為了實現上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

3、一方面，本發(fā)明提供一種凝結魏茨曼氏菌(weizmannia?coagulans)的后生元，所述后生元包括滅活菌和/或脂磷壁酸。

4、優(yōu)選地，所述滅活菌的滅活條件包括但不限于121℃下高溫滅活。

5、在一種實施方式中，所述滅活菌包括熱滅活菌體和/或熱滅活孢子。

6、在一種實施方式中，所述脂磷壁酸提取自凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株。

7、本發(fā)明還提供一種食品或保健食品，其包含如上所述的凝結魏茨曼氏菌的后生元。

8、本發(fā)明還提供一種制備凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株的脂磷壁酸的方法，所述方法包括以下步驟：

9、(1)菌體處理：將凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株在液體培養(yǎng)基內擴大培養(yǎng)，收集菌體并干燥；將菌體重懸于乙酸緩沖液中，加入正丁醇振蕩孵育，離心收集下層水相，濃縮后進行辛基瓊脂糖凝膠柱純化，

10、其特征在于，所述乙酸緩沖液的濃度為0.05-0.15m，ph為4.5-4.9，孵化溫度為35-40℃，振蕩速度為150-250rpm，離心速度為9000-12000rpm；

11、(2)樣品純化：將濃縮后的水相液體經辛基瓊脂糖凝膠柱純化，使用正丙醇-乙酸銨淋洗和洗脫后收集濾液，透析后經過干燥得到凝結魏茨曼氏菌hom5301的脂磷壁酸，

12、其特征在于，辛基瓊脂糖凝膠柱導入樣品的體積為柱體積的1/3-1/2，導入樣品的速度為0.5-1.5ml/min，淋洗和洗脫樣品的速度為1.5-3ml/min；淋洗用正丙醇-0.1m乙酸銨緩沖液中正丙醇濃度為12％-18％，洗脫用正丙醇-0.1m乙酸銨緩沖液中正丙醇的濃度為30％-40％；透析袋孔徑為500-1000da。

13、另一方面，本發(fā)明還提供了如上所述的凝結魏茨曼氏菌的后生元在制備用于增強巨噬細胞免疫功能的藥物中的應用。

14、在一種實施方式中，所述后生元用于增強巨噬細胞的吞噬活性。

15、優(yōu)選地，所述滅活菌的濃度為5.0×105tfu/ml至5.0×107tfu/ml，優(yōu)選為5.0×106tfu/ml至5.0×107tfu/ml，更優(yōu)選為1.0×107tfu/ml至5.0×107tfu/ml，最優(yōu)選為5.0×107tfu/ml；所述脂磷壁酸的濃度為25μg/ml至100μg/ml，25μg/ml至50μg/ml，或50μg/ml至100μg/ml，優(yōu)選為100μg/ml。

16、在一種實施方式中，所述后生元用于增強巨噬細胞的細胞因子和no分泌能力。

17、優(yōu)選地，所述細胞因子選自il-6和tnf-α。

18、在一種實施方式中，所述后生元用于增加巨噬細胞中免疫功能相關基因和蛋白的表達水平。

19、優(yōu)選地，所述后生元用于增加myd88和il-1β的表達量。

20、優(yōu)選地，所述脂磷壁酸用于增加tnf、cxcl2、tlr2和cd14的表達量。

21、再一方面，本發(fā)明還提供一種所述的凝結魏茨曼氏菌的后生元在制備用于治療癌癥的藥物中的應用。

22、在一種實施方式中，所述后生元用于誘導pbmc對癌細胞的殺傷效果。

23、優(yōu)選地，所述癌癥選自腸癌、肝癌和肺癌中的一種或多種。

24、優(yōu)選地，所述癌癥選自腸癌和肺癌中的一種或多種。

25、此外，本發(fā)明還提供一株凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株在制備用于治療癌癥的藥物中的應用。其中，所述癌癥選自腸癌、肝癌和肺癌中的一種或多種。優(yōu)選地，所述癌癥選自腸癌和肺癌中的一種或多種。

26、有益效果

27、(1)本發(fā)明的凝結魏茨曼氏菌的后生元可增強小鼠巨噬細胞raw264.7的吞噬能力；促進小鼠巨噬細胞raw264.7產生no、產生tnf-α和il-6細胞因子的能力；可增強小鼠巨噬細胞raw264.7中免疫功能相關基因和蛋白的表達水平，因此具有免疫增強功能。

28、(2)本發(fā)明的凝結魏茨曼氏菌及其后生元具有誘導人pbmc細胞對癌細胞的殺傷作用，因此具有治療癌癥的作用。

29、(5)本發(fā)明的凝結魏茨曼氏菌的后生元在增強免疫藥物、食品或保健食品中具有廣泛的應用前景。

技術特征：

1.一種凝結魏茨曼氏菌(weizmannia?coagulans)的后生元，其特征在于，所述后生元包括滅活菌和/或脂磷壁酸。

2.根據權利要求1所述的后生元，其特征在于，所述滅活菌包括熱滅活菌體和/或熱滅活孢子。

3.根據權利要求1所述的后生元，其特征在于，所述脂磷壁酸提取自凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株。

4.一種食品或保健食品，其包含根據權利要求1至3中任一項所述的凝結魏茨曼氏菌的后生元。

5.一種制備凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株的脂磷壁酸的方法，所述方法包括以下步驟：

6.根據權利要求3所述的凝結魏茨曼氏菌的后生元在制備用于增強巨噬細胞免疫功能的藥物中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述后生元用于增強巨噬細胞的吞噬活性。

8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述后生元用于增強巨噬細胞的細胞因子和no分泌能力，優(yōu)選地，所述細胞因子選自il-6或tnf-α。

9.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述后生元用于增加巨噬細胞中免疫功能相關基因和蛋白的表達水平。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述后生元用于增加myd88和il-1β的表達量；和/或所述脂磷壁酸用于增加tnf、cxcl2、tlr2和cd14的表達量。

11.根據權利要求1至3中任一項所述的凝結魏茨曼氏菌的后生元在制備用于治療癌癥的藥物中的應用。

12.根據權利要求11所述的應用，其特征在于，所述后生元用于誘導pbmc對癌細胞的殺傷效果。

13.根據權利要求11或12所述的應用，其特征在于，所述癌癥選自腸癌、肝癌和肺癌中的一種或多種。

14.一株凝結魏茨曼氏菌hom5301菌株在制備用于治療癌癥的藥物中的應用。

15.根據權利要求14所述的應用，其特征在于，所述癌癥選自腸癌、肝癌和肺癌中的一種或多種。

16.根據權利要求15所述的應用，其特征在于，所述癌癥選自腸癌和肺癌中的一種或多種。

技術總結
本發(fā)明涉及微生物技術領域，公開了一種凝結魏茨曼氏菌的后生元及其制備方法與應用。所述后生元包括滅活菌和/或脂磷壁酸。本發(fā)明的凝結魏茨曼氏菌的后生元可增強巨噬細胞的吞噬活性、增強巨噬細胞的細胞因子和NO分泌能力、增強免疫功能相關基因和蛋白的表達水平，具有免疫增強功能；具有誘導人PBMC細胞對癌細胞的殺傷作用，具有治療癌癥的作用。本發(fā)明的凝結魏茨曼氏菌的后生元可應用于藥物、食品或保健食品領域。

技術研發(fā)人員：張瀟,丁巖,張世奇,王婷婷,曹中華,張崢文,徐英,李守遠,林鐘潤
受保護的技術使用者：科酈有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/10