本發(fā)明屬于微生物防治，涉及一種煙草花葉病的微生物防治技術，具體涉及一株抑制煙草花葉病毒的空氣芽孢桿菌菌株及其應用煙草種植方法。

背景技術：

1、煙草花葉病毒(tobaco?mosaic?virus,?tmv)作為煙草產(chǎn)業(yè)的主要病原體之一，其傳播途徑簡便且宿主范圍廣泛，能夠侵染包括煙草在內(nèi)的超過?65?個科的?885?種植物。目前，防治?tmv?的措施包括農(nóng)業(yè)管理、化學控制和生物防治等。隨著公眾對健康和環(huán)境的日益關注，化學農(nóng)藥的過度使用造成了環(huán)境農(nóng)藥殘留、病蟲害抗藥性的增強，以及病蟲害復發(fā)等問題。在這樣的背景下，生物農(nóng)藥作為一種新型的農(nóng)藥，因其具有低毒、低殘留、不易產(chǎn)生抗藥性的特點，成為了現(xiàn)代農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)關注的焦點。

2、微生物農(nóng)藥，作為生物農(nóng)藥領域的關鍵分支，涵蓋了活體微生物制劑和農(nóng)業(yè)抗生素兩大類。這些制劑源自自然界的生物資源，經(jīng)過精心的分離和純化過程，不僅能夠直接對病蟲害進行有效防治，還能通過其代謝過程生成具有潛在農(nóng)藥價值的化合物。其中芽孢桿菌（ bacillus?cereus）因其營養(yǎng)需求簡單，繁殖快，代謝產(chǎn)物豐富，成為目前開發(fā)應用最廣泛的生防菌資源。以貝萊斯芽孢桿菌（ bacillus?velezensis）sg11?為例，其對由灰葡萄孢菌（ botrytis?cinerea）引起的番茄灰霉病抑制效果高達?79.81%。此外，解淀粉芽孢桿菌（ bacillus?amyloliquefaciens）f11?的懸浮液對核盤菌（ sclerotinia?sclerotiorum）的相對抑制率均達到了?100%?？諝庋挎邨U菌（ bacillus?aerius）papm-14?菌株對立枯絲核菌（ rhizoctonia?solani）的抑制效果也達到了?81.60%。盡管生物農(nóng)藥在一定時期內(nèi)還不能取代化學農(nóng)藥，但隨著對化學農(nóng)藥危害性的認識和使用條件的限制，芽孢桿菌菌株將成為一類有著廣泛實際用途的微生物資源。

3、自?1926?年?mulvania?首次揭示了細菌抑制植物病毒活性的可能性以來，研究者們便致力于探索微生物及其代謝產(chǎn)物中蘊含的?tmv?抑制活性物質。目前，國內(nèi)已有不少針對煙草花葉病毒生物防治的研究，對生防菌株的篩選亦有不少，大多為細菌少部分真菌。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于至少解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一，為應對化學農(nóng)藥過度使用帶來的危害，挖掘本土優(yōu)質生防菌資源，本發(fā)明提供了一株具有防治煙草花葉病毒效果的空氣芽孢桿菌?a3-5，該菌株具有抗?tmv?高效性、無毒性與非致病性、環(huán)境友好性、抑菌活性穩(wěn)定性。該菌株的發(fā)現(xiàn)，為防治煙草花葉病毒提供了一種新的有效手段，擴充了生防菌菌種資源庫。

2、本發(fā)明的技術解決方案如下：

3、本發(fā)明的第一方面提供一株具有防治煙草花葉病功效的空氣芽孢桿菌a3-5，所述空氣芽孢桿菌菌株（ bacillus?aerius）a3-5已于2024年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctcc?no:?m?20241594，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學校內(nèi)。

4、優(yōu)選地，所述空氣芽孢桿菌a3-5的菌落形態(tài)不規(guī)則，呈淡黃色，易挑起，表明光滑；顯微鏡觀察菌體形態(tài)為革蘭氏陽性菌，桿狀。

5、本發(fā)明的第二方面提供所述的空氣芽孢桿菌a3-5在防治煙草花葉病中的應用。

6、本發(fā)明的第三方面提供所述的空氣芽孢桿菌a3-5防治煙草花葉病的方法，所述方法包括以下步驟：

7、將空氣芽孢桿菌a3-5接種于液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到發(fā)酵液；

8、將所述發(fā)酵液噴施在煙草葉片上。

9、優(yōu)選地，所述煙草葉片為三生煙草葉片。

10、優(yōu)選地，所述液體培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

11、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)條件為：在37℃、200?r/min?條件下恒溫振蕩培養(yǎng)?24h，獲得空氣芽孢桿菌a3-5?發(fā)酵液，放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

12、本發(fā)明的第四方面提供一種防治煙草花葉病的生物制劑，其有效成分包含上述的空氣芽孢桿菌a3-5。

13、本發(fā)明的第五方面提供一種防治煙草花葉病的藥物組合物，其有效成分包含上述的空氣芽孢桿菌a3-5。

14、一種煙草種植方法，包括上述的生物制劑或上述的藥物組合物噴施于煙草葉片上的步驟

15、本發(fā)明至少具有以下有益效果之一：

16、本發(fā)明篩選出的空氣芽孢桿菌（ bacillus?aerius）a3-5具有高效抗?tmv、綠色無污染等特性，不僅豐富了抗?tmv?的生防菌菌種資源庫，也為植物病毒防治策略的多樣化和可持續(xù)發(fā)展提供了有力支持。

17、本發(fā)明的空氣芽孢桿菌a3-5菌株發(fā)酵液對煙草普通花葉病毒的抑制作用顯著，首先是在三生煙枯斑實驗中對?tmv?抑制率較高，a3-5?發(fā)酵液對?tmv?鈍化作用的抑制率可達?91.18%。對?a3-5?發(fā)酵液對?tmv?的抑制作用進一步探究，在k326?煙草內(nèi)病毒表達量以及防御酶的變化情況中可以看出，a3-5?能夠誘導煙草產(chǎn)生抗病性，在接種?tmv后，因其體內(nèi)產(chǎn)生的抗性而使得煙草感染的病毒無法在其體內(nèi)大量繁殖，從而達到比較好的抗病毒效果。將菌株?a3-5?應用于抗花葉病毒生物農(nóng)藥的開發(fā)，能夠開出發(fā)新的、高效、安全的微生物制劑來控制植物病毒病。

技術特征：

1.一株具有防治煙草花葉病功效的空氣芽孢桿菌a3-5，其特征在于，所述空氣芽孢桿菌菌株（bacillus?aerius）a3-5已于2024年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctcc?no:?m?20241594，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學校內(nèi)。

2.根據(jù)權利要求1所述的空氣芽孢桿菌a3-5，其特征在于，所述空氣芽孢桿菌a3-5的菌落形態(tài)不規(guī)則，呈淡黃色，易挑起，表明光滑；顯微鏡觀察菌體形態(tài)為革蘭氏陽性菌，桿狀。

3.如權利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5在防治煙草花葉病中的應用。

4.一種采用如權利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

5.根據(jù)權利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述煙草葉片為三生煙草葉片。

6.根據(jù)權利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)條件為：

8.一種防治煙草花葉病的生物制劑，其特征在于，其有效成分包含權利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5。

9.一種防治煙草花葉病的藥物組合物，其特征在于，其有效成分包含權利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5。

10.一種煙草種植方法，其特征在于：包括將權利要求8所述的生物制劑或權利要求9所述的藥物組合物噴施于煙草葉片上的步驟。

技術總結
本發(fā)明公開了一株具有防治煙草花葉病功效的空氣芽孢桿菌A3?5及其應用，涉及微生物防治技術領域，所述空氣芽孢桿菌（Bacillus?aerius）A3?5已于2024年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:M?20241594；空氣芽孢桿菌A3?5在防治煙草花葉病中的應用；一種具有防治煙草花葉病的制劑，其有效成分包含所述的空氣芽孢桿菌A3?5。本發(fā)明的有益效果是菌株具有高效抗TMV、綠色無污染等特性，豐富了抗TMV的生防菌菌種資源庫，也為植物病毒防治策略的多樣化和可持續(xù)發(fā)展提供了有力支持，能夠誘導煙草產(chǎn)生抗病性，達到較好的抗病毒效果，能夠應用于抗花葉病毒生物農(nóng)藥的開發(fā)。

技術研發(fā)人員：吳麗萍,王建楓,張文鈺,彭月琪,趙微
受保護的技術使用者：南昌大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/19