本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵，具體涉及一種提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法。
背景技術(shù)：
1、鳥(niǎo)苷是嘌呤核苷類物質(zhì)的一種，其用途十分廣泛，是食品和醫(yī)藥產(chǎn)品的重要中間體，可用于合成食品增鮮劑，以及核苷類抗病毒藥物，如利巴韋林、阿昔洛韋等，同時(shí)，也是用于制造無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷、三氮唑核苷、三磷酸鳥(niǎo)苷鈉等藥物的主要原料。此外，鳥(niǎo)苷還可用于生產(chǎn)抗寒食品、減肥食品等功能性食品。由于鳥(niǎo)苷的應(yīng)用范圍廣、需求量大，因此如何提高鳥(niǎo)苷的產(chǎn)量成為了關(guān)鍵。
2、目前，鳥(niǎo)苷的生產(chǎn)方法包括化學(xué)合成法、rna水解法和微生物發(fā)酵法。隨著環(huán)保要求的日益嚴(yán)格，化學(xué)合成法已不占優(yōu)勢(shì)。rna水解法由于工藝復(fù)雜、收率低、成本高等問(wèn)題，如今也很少被采用。因此，微生物發(fā)酵法成為了當(dāng)前工業(yè)化生產(chǎn)鳥(niǎo)苷的主要方法，但其產(chǎn)量和轉(zhuǎn)化率等仍有待提高。
3、現(xiàn)有技術(shù)中，已公開(kāi)了關(guān)于提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的微生物發(fā)酵方法，這些方法主要集中于發(fā)酵前端菌種的改造以及后端提取工藝的改進(jìn)等方面。例如，專利cn118166052a，通過(guò)基因片段重組的方式獲得重組的產(chǎn)鳥(niǎo)苷菌株，使得鳥(niǎo)苷的產(chǎn)量明顯提高；專利cn118086166a，通過(guò)對(duì)產(chǎn)鳥(niǎo)苷菌株進(jìn)行代謝工程改造，使菌株具有良好的鳥(niǎo)苷合成能力，性能穩(wěn)定；專利cn113321691b，通過(guò)對(duì)鳥(niǎo)苷提取工藝的改進(jìn)，提高鳥(niǎo)苷的質(zhì)量和收率。目前，關(guān)于通過(guò)對(duì)菌種發(fā)酵工藝方面的改進(jìn)來(lái)提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法報(bào)道較少，有待進(jìn)一步地研發(fā)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決所述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，通過(guò)在發(fā)酵前期補(bǔ)入部分補(bǔ)糖，稀釋菌體密度、降低菌體耗氧量，從而改善發(fā)酵前期溶氧偏低的現(xiàn)象，有效提高了發(fā)酵液中的鳥(niǎo)苷含量和糖酸轉(zhuǎn)化率。
2、本發(fā)明所要達(dá)到的技術(shù)效果通過(guò)以下技術(shù)方面來(lái)實(shí)現(xiàn)：
3、本發(fā)明提供一種提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，包括以下步驟：
4、s1、將產(chǎn)鳥(niǎo)苷菌種接種至斜面培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)；
5、s2、將活化后的產(chǎn)鳥(niǎo)苷菌種接種至無(wú)菌水中，搖瓶培養(yǎng)，得到一級(jí)種子液；
6、s3、將一級(jí)種子液接種至二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)培，得到二級(jí)種子液；
7、s4、將二級(jí)種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，待發(fā)酵體系的光密度為10～50時(shí)補(bǔ)入占總補(bǔ)糖量15～30％的糖，剩余補(bǔ)糖在發(fā)酵體系的殘?zhí)橇繛?％～7％時(shí)逐漸流加直至補(bǔ)完，待發(fā)酵體系的ph回升時(shí)終止發(fā)酵；
8、s5、對(duì)發(fā)酵完成的發(fā)酵液進(jìn)行加熱滅菌、過(guò)濾、降溫結(jié)晶，析出鳥(niǎo)苷粗品，鳥(niǎo)苷粗品精制后制得鳥(niǎo)苷成品。
9、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述發(fā)酵培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，包括以下組分：葡萄糖25～35％，硫酸鎂0.2～0.5％，硫酸錳0.001～0.003％，硫酸亞鐵0.001～0.003％，高核酸酵母0.3～1.0％，玉米漿干粉0.4～0.8％，玉米漿膏0.4～0.8％，氯化鉀0.1～0.5％，消泡劑0.1～0.5％，余量為水。
10、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述高核酸酵母的rna含量為25±2％。
11、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述產(chǎn)鳥(niǎo)苷菌種為枯草芽孢桿菌cgmccno.4587。
12、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述斜面培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，包括以下組分：可溶性淀粉2～5％，蛋白胨0.3～0.7％，酵母抽提物0.8～1.2％，瓊脂2.5～3.5％，余量為水。
13、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述s2中搖瓶培養(yǎng)的溫度為34±1℃，培養(yǎng)時(shí)間為10～14h。
14、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述二級(jí)種子培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，包括以下組分：葡萄糖1.5～3.0％，酵母膏0.8～1.3％，磷酸二氫鉀0.2～0.5％，消泡劑0.1～0.5％，硫酸鎂0.1～0.3％，硫酸亞鐵0.001～0.003％，余量為水。
15、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述s3中一級(jí)種子液的接種量為0.02～0.05％，所述擴(kuò)培的培養(yǎng)溫度為35±1℃，培養(yǎng)時(shí)間為16～20h。
16、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述s4中二級(jí)種子液的接種量為8～12％，所述發(fā)酵的溫度為35±1℃。
17、作為本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步描述，所述s5具體包括以下步驟：
18、對(duì)發(fā)酵完成的發(fā)酵液進(jìn)行加熱滅菌，將ph調(diào)節(jié)至9.5～11.5，經(jīng)無(wú)機(jī)膜過(guò)濾后將濾液的ph調(diào)節(jié)至6.5～7.5，降溫結(jié)晶，析出鳥(niǎo)苷粗品，鳥(niǎo)苷粗品精制后制得鳥(niǎo)苷成品。
19、綜上所述，本發(fā)明至少具有以下有益之處：
20、1、本發(fā)明提供的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，在發(fā)酵前期監(jiān)測(cè)發(fā)酵體系的光密度，待發(fā)酵體系的光密度為10～50時(shí)補(bǔ)入占總補(bǔ)糖量15～30％的糖，剩余補(bǔ)糖待發(fā)酵后期發(fā)酵體系的殘?zhí)橇繛?％～7％時(shí)才逐漸流加直至補(bǔ)完。通過(guò)在發(fā)酵前期補(bǔ)入部分補(bǔ)糖，稀釋菌體的密度、降低菌體的耗氧量，改善發(fā)酵前期發(fā)酵體系中溶氧偏低的問(wèn)題，顯著提高了發(fā)酵液中的鳥(niǎo)苷含量和糖酸轉(zhuǎn)化率，從而提高鳥(niǎo)苷的產(chǎn)量，有利于鳥(niǎo)苷的批量生產(chǎn)。
21、2、本發(fā)明提供的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，在發(fā)酵過(guò)程中采用利用率較高的有機(jī)氮源替代普通氮源，即采用高核酸酵母替代發(fā)酵培養(yǎng)基中的普通酵母，使發(fā)酵培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分更加豐富、利用率更高，從而有效提升了發(fā)酵液中的鳥(niǎo)苷含量，有利于進(jìn)一步提高鳥(niǎo)苷的產(chǎn)量。
1.一種提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，包括以下組分：葡萄糖25～35％，硫酸鎂0.2～0.5％，硫酸錳0.001～0.003％，硫酸亞鐵0.001～0.003％，高核酸酵母0.3～1.0％，玉米漿干粉0.4～0.8％，玉米漿膏0.4～0.8％，氯化鉀0.1～0.5％，消泡劑0.1～0.5％，余量為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述高核酸酵母的rna含量為25±2％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述產(chǎn)鳥(niǎo)苷菌種為枯草芽孢桿菌cgmcc?no.4587。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，包括以下組分：可溶性淀粉2～5％，蛋白胨0.3～0.7％，酵母抽提物0.8～1.2％，瓊脂2.5～3.5％，余量為水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述s2中搖瓶培養(yǎng)的溫度為34±1℃，培養(yǎng)時(shí)間為10～14h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述二級(jí)種子培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，包括以下組分：葡萄糖1.5～3.0％，酵母膏0.8～1.3％，磷酸二氫鉀0.2～0.5％，消泡劑0.1～0.5％，硫酸鎂0.1～0.3％，硫酸亞鐵0.001～0.003％，余量為水。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述s3中一級(jí)種子液的接種量為0.02～0.05％，所述擴(kuò)培的培養(yǎng)溫度為35±1℃，培養(yǎng)時(shí)間為16～20h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述s4中二級(jí)種子液的接種量為8～12％，所述發(fā)酵的溫度為35±1℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高鳥(niǎo)苷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述s5具體包括以下步驟：