本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物，具體涉及一種蝠蛾腸道內(nèi)生真菌菌株及其發(fā)酵生產(chǎn)的具有抗炎祛痰活性的化合物。

背景技術(shù)：

1、慢性阻塞性肺疾病(copd)是一種以氣流受限為特征的慢性氣道炎癥性疾病，肺功能呈進(jìn)行性減退，嚴(yán)重影響患者的勞動(dòng)能力和生活質(zhì)量，是現(xiàn)代社會(huì)一種持續(xù)惡化且不完全可逆的異質(zhì)性、全身性疾病，是全球第三大致死病因，已經(jīng)上升到世界疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)第五位。copd主要和患者長(zhǎng)期接觸化學(xué)顆?；蛳銦煙熿F等有害氣體導(dǎo)致支氣管壁黏膜、血管、肺泡等產(chǎn)生的非特異性慢性炎癥反應(yīng)相關(guān)。copd的重要病理特征之一即粘液高分泌，正常情況下適量的粘液分泌對(duì)氣道具有保護(hù)作用，但在病理?xiàng)l件下，常有粘液量或質(zhì)的異常，過量的黏液集聚會(huì)加重局部呼吸道的炎癥和感染。粘蛋白5ac(mucin?5ac，5ac)是氣道黏液的主要蛋白成分，muc5ac大量分泌是粘液高分泌狀態(tài)的主要原因。copd在我國(guó)也具有較高的死亡率，尤其是在copd急性加重期(aecopd)，患者呼吸道產(chǎn)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，造成呼吸道的不可逆阻塞進(jìn)一步加重，呼吸肌疲勞，常常進(jìn)展為ⅱ型呼吸衰竭，致死率進(jìn)一步加大，為臨床治療增加難度。抑制炎癥和黏蛋白的發(fā)生和發(fā)展是緩解、治療copd等慢性疾病的有效手段，因此，開發(fā)安全高效的抗炎祛痰制劑是非常必要的。

2、真菌是結(jié)構(gòu)新穎活性獨(dú)特的化合物重要來源之一。申請(qǐng)人先前從蝠蛾腸道內(nèi)生真菌giz45-a37代謝產(chǎn)物中分離得到一個(gè)具有顯著抗炎活性的大環(huán)內(nèi)酯類新化合物，申請(qǐng)人對(duì)蝠蛾腸道內(nèi)生真菌giz45-a37(保藏編號(hào)：gdmcc?no.64050)代謝產(chǎn)物做進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)一個(gè)具有顯著抗炎祛痰活性的新不飽和烯醛類化合物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供從褶滑耳菌(talaromyces?rugulosus)giz45-a37菌株中發(fā)酵得到的具有顯著抗炎祛痰活性的新的化合物-不飽和烯醛類化合物。

2、本發(fā)明提供了式i所示的不飽和烯醛類化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物：

3、

4、其中，r1、r2、r3、r4、r5分別獨(dú)立選自甲基或羥基。

5、進(jìn)一步地，上述r1為甲基。

6、進(jìn)一步地，上述r2為甲基。

7、進(jìn)一步地，上述r3為甲基。

8、進(jìn)一步地，上述r4為羥基。

9、進(jìn)一步地，上述r5為甲基。

10、進(jìn)一步地，上述化合物的結(jié)構(gòu)如下：

11、

12、本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，其是從褶滑耳菌(talaromycesrugulosus)giz45-a37的發(fā)酵培養(yǎng)物中分離得到的。

13、具體包括如下步驟：

14、s1、將褶滑耳菌(talaromyces?rugulosus)giz45-a37接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到發(fā)酵產(chǎn)物；

15、s2、將乙酸乙酯加入到s1得到的發(fā)酵產(chǎn)物中，混合后提取，過濾得到浸提液；

16、s3、將s2得到的浸提液減壓濃縮，得到粗浸膏；

17、s4、將s3得到的粗浸膏進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚和乙酸乙酯組成的洗脫液，按照石油醚和乙酸乙酯的體積比50:1、25:1、10:1、5:1、2:1、1:1依次進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚和乙酸乙酯的體積比為5:1的洗脫液，干燥得粗產(chǎn)物；

18、s5、將s4得到的粗產(chǎn)物進(jìn)行反相ods柱層析，以甲醇和水組成的洗脫液，按照甲醇濃度20％、40％、60％、80％依次進(jìn)行梯度洗脫，收集40％～60％甲醇/水的洗脫液，干燥得粗產(chǎn)物；

19、s6、將s5得到的粗產(chǎn)物進(jìn)行凝膠sephadex?lh-20柱層析，以二氯甲烷-甲醇v/v?2:1為洗脫液洗脫，收集洗脫液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，以c18色譜柱、60％甲醇/水、254nm波長(zhǎng)為色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，收集含主峰的洗脫液，干燥得粗產(chǎn)物；

20、s7、將s6得到的粗產(chǎn)物經(jīng)中高壓制備液相純化即得。

21、進(jìn)一步地，上述步驟s1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基由如下重量份的組分組成：大米90～100g、水100ml，120℃高壓蒸汽滅菌20min。

22、進(jìn)一步地，步驟s1所述培養(yǎng)為放置于25℃恒溫靜置培養(yǎng)30天；

23、進(jìn)一步地，步驟s2所述的將乙酸乙酯加入到s1得到的發(fā)酵產(chǎn)物中，發(fā)酵產(chǎn)物與乙酸乙酯質(zhì)量體積比為1:3，提取是超聲提取15min，提取次數(shù)為3次，超聲提取使用的功率為400w，工作頻率為40khz。

24、進(jìn)一步地，步驟s7所述中高壓制備液相色譜純化，其流動(dòng)相為乙腈和水的混合溶液，其中，乙腈體積百分?jǐn)?shù)為70％。

25、本發(fā)明還提供了上述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物在制備抗炎祛痰藥物中的用途；優(yōu)選地，所述藥物是防治慢性阻塞性肺疾病(copd)的藥物。

26、本發(fā)明還提供了一種藥物，它是以上述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而得的制劑。

27、本發(fā)明的有益效果：

28、(1)本發(fā)明的蝠蛾腸道內(nèi)生菌菌株可發(fā)酵生產(chǎn)一種新的化合物，該化合物性能穩(wěn)定，細(xì)胞毒性低，且具有顯著抗炎祛痰活性。

29、(2)本發(fā)明化合物由真菌經(jīng)固體發(fā)酵產(chǎn)生，可通過對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行乙酸乙酯提取后，再用硅膠柱層析、反相ods柱層析、凝膠柱層析和高效液相色譜分離純化制得，分離步驟簡(jiǎn)單，實(shí)施方便，易于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，具備廣闊的應(yīng)用前景。

30、生物材料保藏：

31、褶滑耳菌(talaromyces?rugulosus)giz45-a37于2023年11月22日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(gdmcc)，保藏地址：廣東省廣州市越秀區(qū)先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓，郵編510070,，保藏編號(hào)為gdmcc?no.64050。

32、顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

33、以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

技術(shù)特征：

1.式i所示的不飽和烯醛類化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不飽和烯醛類化合物，其特征在于，r1為甲基；或r2為甲基；

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的不飽和烯醛類化合物，其特征在于，化合物的結(jié)構(gòu)如下：

4.一種權(quán)利要求3所述的不飽和烯醛類化合物的制備方法，其特征在于，是從褶滑耳菌(talaromyces?rugulosus)giz45-a37的發(fā)酵培養(yǎng)物中分離得到的，所述的褶滑耳菌(talaromyces?rugulosus)giz45-a37，保藏編號(hào)為gdmcc?no.64050。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟s1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基由如下重量份的組分組成：大米90～100g、水100ml，120℃高壓蒸汽滅菌20min；步驟s1所述培養(yǎng)為放置于25℃恒溫靜置培養(yǎng)30天。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟s2所述的將乙酸乙酯加入到s1得到的發(fā)酵產(chǎn)物中，發(fā)酵產(chǎn)物與乙酸乙酯質(zhì)量體積比為1:3，提取是超聲提取15min，提取次數(shù)為3次，超聲提取使用的功率為400w，工作頻率為40khz。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟s7所述中高壓制備液相色譜純化，其流動(dòng)相為乙腈和水的混合溶液，其中，乙腈體積百分?jǐn)?shù)為70％。

9.權(quán)利要求1所述的不飽和烯醛類化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物在制備抗炎祛痰藥物中的用途；優(yōu)選地，所述藥物是防治慢性阻塞性肺疾病的藥物。

10.一種藥物，其特征在于，是以權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而得的制劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種具有抗炎祛痰活性的不飽和烯醛類化合物及其制備方法和應(yīng)用。式I所示的不飽和烯醛類化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其溶劑合物：其中，R1、R2、R3、R4、R5分別獨(dú)立選自甲基或羥基。本發(fā)明的蝠蛾腸道內(nèi)生菌菌株可發(fā)酵生產(chǎn)一種新的化合物，該化合物性能穩(wěn)定，細(xì)胞毒性低，且具有顯著抗炎祛痰活性。

技術(shù)研發(fā)人員：龍海林,饒中臣,曹莉,韓日疇
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣東省科學(xué)院動(dòng)物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/28