本發(fā)明屬于生物，尤其涉及一種植物乳桿菌粉劑及其制備方法。

背景技術：

1、抗生素在畜牧業(yè)中被大量使用，不僅作為疾病的預防、治療手段，也應用為畜禽的促生長劑，近年來抗生素濫用和不規(guī)范使用問題突出，嚴重威脅畜禽與人類的健康安全，克服抗生素的弊端、尋求抗生素的替代物成為動物營養(yǎng)與健康相關研究的熱點。

2、益生菌制劑作為一種綠色飼料級添加劑，將其應用于動物營養(yǎng)和飼料中，可以較好地避免抗生素帶來的負面影響，因此，受到了越來越多的畜牧研究工作者的重視。益生菌制劑替代抗生素作為安全和綠色飼料添加劑具有廣闊的發(fā)展空間，其在飼喂動物方面的開發(fā)和利用對我國畜牧業(yè)的發(fā)展起到了積極的促進作用，并具有深遠的影響意義。

3、植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)生長速度快、產酸能力強，是近年來比較暢銷的乳酸菌之一，已被列為中國飼料添加劑目錄(2013)微生物制劑之一，其適用范圍為養(yǎng)殖動物。植物乳桿菌可以產多種細菌素，其能夠抑制多種病原菌和腐敗菌，1927年以來，已經(jīng)有70余種乳酸菌素陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，僅植物乳桿菌所產植物乳桿菌素就有20多種。植物乳桿菌可安全用于生產許多乳制品、肉類和蔬菜發(fā)酵產品，同時它可用于對抗病原體、抑制有害細菌的增殖、保護腸道和增強免疫力，具有較大的開發(fā)潛力。

4、液體制劑雖是乳酸菌常用的保藏方法，但是其穩(wěn)定性較低不適于長期保存。因此，為了穩(wěn)定益生菌類不穩(wěn)定的產品，必須降低儲存樣品中的含水量使其達到休眠狀態(tài)。常用的干燥方法有冷凍干燥法和噴霧干燥法。噴霧干燥是常用的干燥方式之一，其成本較低適合大批量生產，但由于干燥時需要較高的溫度只適用于熱穩(wěn)定性較好的菌種。植物乳桿菌無法產生芽孢，這會使得菌株對胃的ph值和膽鹽等生理條件很敏感。這將會極大地縮減后續(xù)菌粉制劑的保藏時間，進而縮短貨架期。因此，這些細菌的生物利用度容易受到各種生產、儲存和運輸條件的影響，因此形成孢子的細菌，特別是芽孢桿菌屬，成為解決許多工業(yè)生產者技術問題的替代方案，枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)就是一種具有優(yōu)秀芽孢形成能力的益生菌，這使得枯草芽孢桿菌制劑能夠具有較長保質期，并且在低ph環(huán)境中也可以發(fā)揮調節(jié)腸道微生態(tài)平衡等功效，使其擁有了多方面應用的潛能。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明將枯草芽孢桿菌的芽胞殼取出制備成芽胞殼液，用于植物乳桿菌噴干粉的制備，可為植物乳桿菌形成一層保護膜，以增強植物乳桿菌的熱穩(wěn)定性，此工藝可為其他熱穩(wěn)定差的益生菌固態(tài)制劑制備提供參考。

2、本發(fā)明的目的之一在于提供一種植物乳桿菌粉劑的制備方法，所述植物乳桿菌粉劑在制備過程中加入了枯草芽孢桿菌的芽孢殼。

3、優(yōu)選地，所述植物乳桿菌粉劑的制備過程包括以下步驟：

4、(1)用無菌水重懸植物乳桿菌菌泥；

5、(2)加入保護劑和枯草芽孢菌的芽孢殼液；

6、(3)震蕩培養(yǎng)；

7、(4)噴霧干燥；

8、所述芽孢殼液與植物乳桿菌菌泥的體積質量比ml/g為1～2：2～1；所述芽孢殼液的濃度為(9-10)×108particles/ml。

9、更優(yōu)選地，所述芽孢殼液與植物乳桿菌菌泥的體積質量比ml/g為1.5:1。

10、更優(yōu)選地，所述芽孢殼液的制備過程如下：

11、將枯草芽孢桿菌發(fā)酵液置于脂質體擠出儀中，先通過孔徑為0.8μm的聚碳酸酯膜來回擠壓，再通過0.4μm的聚碳酸酯膜來回擠壓，得到的混合溶液離心，棄去上清，得到的沉淀用去離子水洗滌，再次離心，棄去上清，得到的沉淀即為芽胞殼，將芽孢殼重懸于無菌水中制得芽胞殼液。

12、更優(yōu)選地，所述芽孢殼液的濃度為9.6×108particles/ml。

13、更優(yōu)選地，所述步驟(2)中的保護劑為乳糖、海藻糖、甘露醇、脫脂奶粉和麥芽糊精中的至少一種。

14、更優(yōu)選地，所述步驟(3)中震蕩培養(yǎng)時的轉速為100r/min，時間為15min。

15、更優(yōu)選地，所述步驟(4)中噴霧干燥時的進口溫度為140℃。

16、本發(fā)明的目的之二在于提供由上述制備方法制得的植物乳桿菌粉劑。

17、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

18、由于胃酸的作用及腸道的厭氧環(huán)境，多數(shù)益生菌不易在腸道定植。植物乳桿菌是一種用途廣泛的乳酸菌，能夠產生乳酸，對酸性環(huán)境耐受性較好；其產生的乳酸可以顯著降低動物腸道ph，保持腸道的酸性環(huán)境，抑制病原菌的生長。另外，其兼性厭氧屬性有利于其在腸道中的定植。植物乳桿菌有利于維持動物腸道微生物區(qū)系平衡，從而可以提高動物的日增重，增強其機體免疫力，降低其腹瀉率與死亡率。

19、常用的制備固體菌劑的方法有噴霧干燥法和冷凍干燥法。真空冷凍干燥運行時間一般為24～30h，能源成本較高。適合于價值較高的生物制品。相較之下噴霧干燥發(fā)生在幾秒鐘內成本低，生產率高，其產生的自由流動的粉末，易于運輸，處理和貯藏，保質期更長，適合大批量生產。但由于噴霧干燥適合于芽孢桿菌類熱穩(wěn)定性好的菌種，現(xiàn)有研究利用噴霧干燥法制備植物乳桿菌粉劑的效果并不理想，而本發(fā)明在利用噴霧干燥法制備植物乳桿菌粉劑時加入了芽胞殼液，通過該工藝對植物乳桿菌形成一層保護層，可以增加其儲存穩(wěn)定性。

技術特征：

1.一種植物乳桿菌粉劑的制備方法，其特征在于，所述植物乳桿菌粉劑在制備過程中加入了枯草芽孢桿菌的芽孢殼。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述植物乳桿菌粉劑的制備過程包括以下步驟：

3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述芽孢殼液與植物乳桿菌菌泥的體積質量比ml/g為1.5:1。

4.根據(jù)權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述芽孢殼液的制備過程如下：

5.根據(jù)權利要求4中所述的制備方法，其特征在于，所述芽孢殼液的濃度為9.6×108particles/ml。

6.根據(jù)權利要求1-5中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的保護劑為乳糖、海藻糖、甘露醇、脫脂奶粉和麥芽糊精中的至少一種。

7.根據(jù)權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中震蕩培養(yǎng)時的轉速為100r/min，時間為15min。

8.根據(jù)權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中噴霧干燥時的進口溫度為140℃。

9.由權利要求1-5或7-8中任一項所述的制備方法制得的植物乳桿菌粉劑。

10.由權利要求6所述的制備方法制得的植物乳桿菌粉劑。

技術總結
本發(fā)明公開了一種植物乳桿菌粉劑及其制備方法，屬于生物技術領域。該植物乳桿菌粉劑的制備過程包括以下步驟：(1)用無菌水重懸植物乳桿菌菌泥；(2)加入保護劑和枯草芽孢菌的芽孢殼液；(3)震蕩培養(yǎng)；(4)噴霧干燥；所述芽孢殼液與植物乳桿菌菌泥的體積質量比ml/g為1～2：2～1；所述芽孢殼液的濃度為(9?10)×10<supgt;8</supgt;particles/mL。本發(fā)明在利用噴霧干燥法制備植物乳桿菌粉劑時加入了芽胞殼液，通過該工藝對植物乳桿菌形成一層保護層，可以增加其儲存穩(wěn)定性。

技術研發(fā)人員：李永紅,高迎曼,李克克,馮利菲,李光華,李振,朱夢杰
受保護的技術使用者：鄭州大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/24