本發(fā)明涉及分子生物學(xué)診斷，具體涉及一種檢測(cè)骨科常見病原體的引物探針組合物、試劑盒及方法。

背景技術(shù)：

1、在現(xiàn)代醫(yī)療實(shí)踐中，快速準(zhǔn)確地診斷骨科相關(guān)的病原體感染對(duì)于治療效果和病人恢復(fù)至關(guān)重要。骨科感染包括但不限于骨髓炎、關(guān)節(jié)炎等，常常涉及多種細(xì)菌、真菌和其他微生物，其診斷挑戰(zhàn)巨大，需要高度精確且迅速的檢測(cè)方法。

2、目前，骨科病原體的診斷主要依賴于微生物培養(yǎng)和分子生物學(xué)方法。微生物培養(yǎng)是傳統(tǒng)的金標(biāo)準(zhǔn)，但其耗時(shí)長，且對(duì)某些難以培養(yǎng)的微生物靈敏度不足。分子生物學(xué)方法如聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)，提供了更快的檢測(cè)速度，但現(xiàn)有的pcr試劑盒通常針對(duì)性有限，無法覆蓋骨科感染中常見的多種病原體。現(xiàn)有的檢測(cè)方法無法滿足臨床對(duì)于快速、全面和準(zhǔn)確診斷骨科病原體的需求。這導(dǎo)致了診斷延遲，影響了治療決策和病人預(yù)后。因此，迫切需要一種能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)多種骨科病原體的新方法。

3、基于這些問題，開發(fā)一種能夠同時(shí)針對(duì)多種骨科相關(guān)病原體進(jìn)行快速、準(zhǔn)確檢測(cè)的pcr試劑盒成為了研究的重點(diǎn)。這種新型試劑盒需要具備高度的靈敏度和特異性，能夠在數(shù)小時(shí)內(nèi)提供可靠的診斷結(jié)果，從而指導(dǎo)臨床治療。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種檢測(cè)骨科常見病原體的引物探針組合物、試劑盒及方法，能夠同時(shí)檢測(cè)多種常見于骨科感染的細(xì)菌和真菌，顯著提高檢測(cè)的覆蓋范圍和效率，且靈敏度高，特異性好，可以在短時(shí)間內(nèi)為醫(yī)生提供準(zhǔn)確的診斷信息，以便醫(yī)生快速做出更為有效的治療決策。

2、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題采用以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬和曲霉菌屬的引物探針組合物。

4、本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬和曲霉菌屬的試劑盒，包括所述引物探針組合物。

5、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述試劑盒在骨科常見病原體檢測(cè)中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種檢測(cè)骨科常見病原體的方法，以待測(cè)樣本中的病原體的dna為模板，采用所述試劑盒進(jìn)行熒光定量pcr擴(kuò)增反應(yīng)，采集熒光信號(hào)以確定所述待測(cè)樣本中金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬、曲霉菌屬的含量。

7、本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明所述試劑盒采用了獨(dú)特的引物和探針設(shè)計(jì)，能夠同時(shí)檢測(cè)多種常見于骨科感染的細(xì)菌和真菌，顯著提高了檢測(cè)的覆蓋范圍和效率，并且通過優(yōu)化的反應(yīng)條件和增強(qiáng)的信號(hào)檢測(cè)確保了高靈敏度和特異性，能夠迅速為醫(yī)生提供準(zhǔn)確的診斷信息。

技術(shù)特征：

1.一種用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬和曲霉菌屬的引物探針組合物，其特征在于，包括以下引物和探針：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物探針組合物，其特征在于：所述探針序列的一端標(biāo)記有熒光基團(tuán)，另一端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物探針組合物，其特征在于：所述熒光基團(tuán)選自fam、vic、taram、rox、cy5中的一種；所述淬滅基團(tuán)選自bhq1、bhq2、bhq3中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的引物探針組合物，其特征在于：所述金黃色葡萄球菌探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)fam，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq1；所述鏈球菌屬探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)rox，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq2；所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)vic，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq3；所述大腸桿菌探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)tamra，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq1；所述假單胞菌探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)vic，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq1；所述念珠菌屬探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)fam，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq2；所述曲霉菌屬探針的5′端標(biāo)記有熒光基團(tuán)rox，3′端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)bhq3。

5.一種用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬和曲霉菌屬的試劑盒，包括權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)所述的引物探針組合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括分別獨(dú)立包裝的金黃色葡萄球菌核酸標(biāo)準(zhǔn)品、鏈球菌屬核酸標(biāo)準(zhǔn)品、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌核酸標(biāo)準(zhǔn)品、大腸桿菌核酸標(biāo)準(zhǔn)品、假單胞菌核酸標(biāo)準(zhǔn)品、念球菌屬核酸標(biāo)準(zhǔn)品和曲霉菌屬核酸標(biāo)準(zhǔn)品；

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括pcr反應(yīng)液和taqdna聚合酶。

8.權(quán)利要求5～7任意一項(xiàng)所述的試劑盒在骨科常見病原體檢測(cè)中的應(yīng)用。

9.一種檢測(cè)骨科常見病原體的方法，其特征在于：以待測(cè)樣本中的病原體的dna為模板，采用權(quán)利要求5～7任意一項(xiàng)所述的試劑盒進(jìn)行熒光定量pcr擴(kuò)增反應(yīng)，采集熒光信號(hào)以確定所述待測(cè)樣本中金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬、曲霉菌屬的含量。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述熒光定量pcr擴(kuò)增反應(yīng)程序如下：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種檢測(cè)骨科常見病原體的引物探針組合物、試劑盒及方法，涉及分子生物學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明所述試劑盒采用了獨(dú)特的引物和探針設(shè)計(jì)，能夠同時(shí)檢測(cè)多種常見于骨科感染的細(xì)菌和真菌(包括金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、假單胞菌、念珠菌屬和曲霉菌屬)，顯著提高了檢測(cè)的覆蓋范圍和效率，并且通過優(yōu)化的反應(yīng)條件和增強(qiáng)的信號(hào)檢測(cè)確保了高靈敏度和特異性，能夠迅速為醫(yī)生提供準(zhǔn)確的診斷信息。

技術(shù)研發(fā)人員：李培啟
受保護(hù)的技術(shù)使用者：李培啟
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19