本發(fā)明涉及一種金花茶基因及其應用，具體涉及一種金花茶基因cppal及其在調(diào)控植物葉片中類黃酮含量的應用。

背景技術(shù)：

1、金花茶是山茶科山茶屬金花茶組植物的統(tǒng)稱，常綠灌木或小喬木，是山茶屬中罕有的花色金黃的品種，被譽為“植物界的大熊貓”和“茶族皇后”。金花茶喜蔭，不耐陽光直射，因此只有在蔭蔽度較高的地方才能生長。由于這一生物學特性，金花茶至分布在我國廣西、云南、貴州等地，將其引種都其它地區(qū)均表現(xiàn)出不良的長勢。相關(guān)研究表明，葉片中類黃酮含量高的植物，可以增強自身的耐曬能力，而葉片中類黃酮含量的變化受到一些基因的調(diào)控。截至目前，關(guān)于調(diào)控植物葉片中類黃酮含量的基因未見報道，因此挖掘調(diào)控植物葉片中類黃酮含量的功能基因具有非常重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：本發(fā)明旨在提供一種可以用于調(diào)控植物葉片中的類黃酮含量的金花茶基因cppal；本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述基因在調(diào)控植物葉片中的類黃酮含量的應用。

2、技術(shù)方案：本發(fā)明所述的金花茶葉片中類黃酮含量的基因cppal，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3、本發(fā)明所述的重組表達載體，含有上述金花茶基因cppal。

4、本發(fā)明所述的宿主菌，含有上述金花茶基因cppal或上述重組表達載體。

5、所述金花茶基因cppal，或所述重組表達載體或所述宿主菌可以應用在調(diào)控植物葉片類黃酮含量中。

6、一種利用金花茶基因cppal調(diào)控植物葉片中類黃酮含量的應用方法，包括以下步驟：

7、(1)構(gòu)建金花茶cppal基因的超表達載體；

8、(2)轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌gv3101；

9、(3)侵染大花煙草并進行篩選得到抗性轉(zhuǎn)基因植株；

10、(4)cppal轉(zhuǎn)基因植株葉片類黃酮含量的測定。

11、進一步地，構(gòu)建金花茶cppal基因超表達載體時所用載體為psuper1300-cppal。

12、進一步地，構(gòu)建金花茶cppal基因超表達載體時所用引物為：

13、f-caaatcgactctagaaagcttatgcggcaggaaataaggg；

14、r-accggatccactagtatttaaatttagttatactcaggtggtggtggg。

15、進一步地，pcr擴增的反應體系為：forward?primer?1μl，forward?primer?1μl，cdna?1μl，prime?star?10μl，ddh2o?7μl；反應條件為：98℃變性10s；58℃退火15s；72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃總延伸10min；16℃終止反應。

16、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著優(yōu)點：所述金花茶基因cppal可以用于提高物葉片中的類黃酮含量，在調(diào)控植物中的類黃酮含量方面有著良好的應用前景本發(fā)明基于前期研究和生物信息學分析軟件初步預測了該基因的功能。通過克隆得到基因序列的全長，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了超表達載體并進行煙草的瞬時轉(zhuǎn)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，cppal轉(zhuǎn)基因株系葉片中類黃酮的含量與空載相比明顯升高。作為調(diào)控金花茶葉片中類黃酮含量的基因cppal，可應用于基因工程中一些耐曬能力差的植物，具有實際應用價值。

技術(shù)特征：

1.一種金花茶基因cppal，其特征在于，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.含有權(quán)利要求1所述金花茶基因cppal的重組表達載體。

3.含有權(quán)利要求1所述金花茶基因cppal或含有權(quán)利要求2所述重組表達載體的宿主菌。

4.一種權(quán)利要求1所述金花茶基因cppal或權(quán)利要求2所述重組表達載體或權(quán)利要求3所述宿主菌在調(diào)控植物葉片類黃酮含量中的應用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，所述金花茶基因cppal用于提高植物葉片的類黃酮含量。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，應用方法包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，構(gòu)建金花茶cppal基因超表達載體時所用載體為psuper1300-cppal。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，構(gòu)建金花茶cppal基因超表達載體時所用引物為：

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，pcr擴增的反應體系為：forward?primer1μl，forward?primer?1μl，cdna?1μl，prime?star?10μl，ddh2o?7μl。

10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，pcr擴增反應條件為：98℃變性10s；58℃退火15s；72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃總延伸10min；16℃終止反應。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種金花茶基因CpPAL及其在調(diào)控植物葉片中類黃酮含量的應用，所述金花茶基因CpPAL的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明基于前期研究和生物信息學分析軟件初步預測了該基因的功能，通過克隆得到基因序列的全長，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了超表達載體并進行煙草的瞬時轉(zhuǎn)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CpPAL轉(zhuǎn)基因株系葉片中類黃酮的含量與空載相比明顯升高。作為調(diào)控金花茶葉片中類黃酮含量的基因CpPAL，可應用于基因工程中一些耐曬能力差的植物，具有實際應用價值。

技術(shù)研發(fā)人員：沈雨晞,秦旭陽,易秋水,葛云芝
受保護的技術(shù)使用者：南京林業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/28