本發(fā)明涉及生物醫(yī)學檢測，尤其涉及一種基于重組酶聚合酶擴增技術(rpa)的新冠病毒jn.1快速檢測試劑盒。

背景技術：

1、jn.1變異株是新冠病毒奧密克戎ba.2.86變異株的第二代亞分支，具有較快的傳播速度。自首次在盧森堡被發(fā)現(xiàn)以來，jn.1在全球范圍內(nèi)的流行情況迅速增長，截至2023年12月初，其在全球流行毒株中的占比已達到30％左右，顯示出其強大的傳播能力。2023年12月19日，世衛(wèi)組織將jn.1單獨列為需留意的新冠變異株(主要是s基因突變)。截止2024年8月，新冠感染病例數(shù)以驚人的速度上升，新冠病毒的陽性率占比超過60％，尤其是其亞分支(xdv.1和kp.2變異株)。這一變化無疑引發(fā)了公眾的廣泛關注，令很多人不寒而栗。與此同時，科學界的專家們也對此現(xiàn)象發(fā)出了警示，稱當前主要流行株為jn.1變異株，顯著增高的感染率使得醫(yī)療系統(tǒng)面臨巨大壓力。因此，及時檢測jn.1變異株對于監(jiān)測其傳播趨勢、評估其對公共衛(wèi)生安全的影響至關重要。

2、此外，jn.1變異株的檢測還有助于評估現(xiàn)有防控措施的有效性。盡管jn.1變異株可能具有一定的免疫逃逸能力，但研究表明，含有xbb.1.5成分的新冠病毒疫苗仍對其有效，這表明通過疫苗接種可以提供一定的保護。因此，通過檢測jn.1變異株，可以了解疫苗接種等防控措施的效果，為未來的防控策略提供科學依據(jù)。

3、綜上所述，檢測jn.1變異株對于及時了解其傳播情況、評估其對公共衛(wèi)生安全的影響以及為防控措施提供科學依據(jù)具有重要意義。

4、為了準確識別新冠病毒jn.1變異株，通常使用包括rt-pcr(reversetranscription-polymerase?chain?reaction)的分子實時診斷方法，例如國內(nèi)一些公司和科研單位已經(jīng)針對jn.1開發(fā)了pcr檢測試劑。雖然熒光定量pcr是現(xiàn)階段病毒檢測的優(yōu)選方案，但其存在以下局限性：(1)容易產(chǎn)生氣溶膠污染導致結果出現(xiàn)假陽性，需配備經(jīng)專業(yè)培訓并執(zhí)pcr上崗證的技術人員、專業(yè)pcr認證實驗室與價格昂貴的溫度變換控制分析儀器；(2)傳統(tǒng)熒光定量pcr樣本核酸提取和擴增檢測分兩步驟進行，從取樣到出具檢測結果至少需要1.5-2小時以上。雖然最近已開發(fā)出通過單個靶基因的多重pcr實時擴增技術，但其多達90～120分鐘的擴增檢測過程與對實驗設備和實驗人員的嚴苛要求顯然不適合于快速檢測。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種用于新冠病毒變異株jn.1特異性檢測的試劑盒、引物對、擴增體系及應用，本發(fā)明具有準確率高、檢測速度快的特點，能夠特異性的對新冠病毒jn.1進行特異性檢測。

2、為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：

3、本發(fā)明提供的新冠病毒jn.1快速檢測試劑盒，所述試劑盒包括用于檢測新冠病毒jn.1引物探針組。

4、進一步的，所述用于檢測新冠病毒jn.1引物探針組中的引物包括：

5、jn.1:

6、上游引物的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；

7、seq?id?no.1：gaccttgaccggtgcaccacttttgatgatg

8、下游引物的核苷酸序列如seq?id?no.2所示；

9、cccctcatagatgaagtatgttgagtgtaat

10、優(yōu)選地，所述用于新冠病毒jn.1引物探針組中的探針為經(jīng)中間修飾的熒光探針；

11、所述用于新冠病毒jn.1引物探針組中探針的序列如seq?id?no.3所示；

12、新冠病毒毒株jn.1s基因：

13、seq?id?no.3：gaccggtgcaccacttttgatgatgttca-

14、agc/i6famdt/c/idsp/ibhq1dt/aattacactcaacat(c3?spacer)

15、進一步的，所述應用的方法包括以下步驟：

16、提供待測樣品的rna，隨后利用上述一種用于新冠病毒變異株jn.1特異性檢測的引物對、擴增試劑盒及應用快速檢測試劑盒進行等溫擴增；

17、優(yōu)選地，所述待測樣品包括jn.1液體室內(nèi)質(zhì)控品中的至少一種。

18、更進一步的，所述多酶恒溫擴增的反應體系中引物的初始濃度均為2～50mmol/l，醋酸鎂的初始濃度為50-280mmol/l。

19、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：

20、1、本發(fā)明提供的基于重組酶聚合酶擴增技術(rpa)的新冠病毒變異株jn.1快速檢測試劑盒可以廣泛應用于臨床上新冠病毒變異株jn.1的檢測。

21、2、本發(fā)明將引物探針組整合于單一擴增體系，實現(xiàn)實時快速擴增檢測體系的微量化，對未知新冠病毒變異株jn.1的鑒定提供技術支持，做到早定型、早發(fā)現(xiàn)、早治療。

技術特征：

1.一種用于新冠病毒變異株jn.1特異性檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括用于檢測新冠病毒jn.1的引物探針組；

2.根據(jù)權利要求1所述一種用于新冠病毒變異株jn.1特異性檢測的試劑盒，其特征在于，所述用于新冠病毒變異株jn.1特異性檢測的引物探針組中的探針為經(jīng)修飾的熒光探針；

3.一種根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒及在檢測新冠病毒變異株jn.1特異性方面的應用。

4.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

5.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述待測樣品包括鼻拭子、咽拭子、痰液中的至少一種。

6.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述恒溫擴增的反應體系中，擴增引物的初始濃度均為2～40mmol/l，醋酸鎂的初始濃度為50～280mmol/l。

技術總結
本發(fā)明公開了一種用于新冠病毒變異株JN.1特異性檢測的試劑盒及應用，涉及生物醫(yī)學檢測技術領域，所述試劑盒包含用于檢測新冠病毒變異株JN.1的引物探針組，本發(fā)明可特異性對新冠病毒JN.1毒株進行檢測。相對于現(xiàn)有的熒光定量PCR檢測法具有準確率高、檢測速度快的優(yōu)勢，臨床實用價值大。

技術研發(fā)人員：姚航平,鄭書發(fā),梁利國,王嘉龍,李陽,陸思銘
受保護的技術使用者：浙江大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/10