本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)，尤其涉及一種胰島β細胞的體外誘導方法。

背景技術(shù)：

1、糖尿病是影響人類健康的主要疾病之一，胰島β細胞功能下降所導致的胰島素分泌不足、糖代謝案亂是糖尿病的重要原因，在研究發(fā)病機理的同時，研究胰島細胞的功能狀態(tài)是其中的重要部分。目前諸多試驗證明，胰島β細胞替代療法—胰島β細胞移植是治愈糖尿病的有效方法。但是由于糖尿病患者數(shù)量巨大，細胞來源問題有待解決。干細胞作為一類具有多向分化潛能的細胞，可成為胰島β細胞替代物的理想資源。

2、中國專利cn113583938a公開了一種體外誘導干細胞分化的胰島細胞形成胰島樣結(jié)構(gòu)的方法，包括以下步驟：原料組織分離培養(yǎng)得到間充質(zhì)干細胞；所得間充質(zhì)干細胞傳代培養(yǎng)；對所得傳代間充質(zhì)干細胞進行誘導分化，分化為胰島樣細胞，該發(fā)明采用特定的誘導培養(yǎng)基(含有β細胞素、egf、尼克酰胺、人堿性成纖維細胞生長因子)及前處理、誘導培養(yǎng)步驟，能夠快速高效體外誘導干細胞分化的胰島細胞形成胰島樣結(jié)構(gòu)。

3、但是現(xiàn)有技術(shù)中的胰島β細胞誘導方案的誘導率、產(chǎn)品細胞質(zhì)量有待進一步提升。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種胰島β細胞的體外誘導方法，能夠提升胰島β細胞的誘導率和產(chǎn)品細胞質(zhì)量。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種胰島β細胞的體外誘導方法，包括以下步驟：

4、s1、將人臍帶間充質(zhì)干細胞接種至初期誘導培養(yǎng)基，進行第一階段誘導培養(yǎng)；

5、s2、將s1所得細胞轉(zhuǎn)入中期誘導培養(yǎng)基，進行第二階段誘導培養(yǎng)；

6、s3、將s2所得細胞轉(zhuǎn)入后期誘導培養(yǎng)基，進行第三階段誘導培養(yǎng)，得到胰島β細胞；

7、所述初期誘導培養(yǎng)基中含有2-巰基乙醇水溶液。

8、優(yōu)選的，所述初期誘導培養(yǎng)基中，2-巰基乙醇水溶液的體積百分濃度為0.5～2％。

9、優(yōu)選的，所述2-巰基乙醇水溶液的初始體積百分濃度為0.02％～0.04％。

10、優(yōu)選的，所述后期誘導培養(yǎng)基中含有艾塞那肽。

11、優(yōu)選的，所述后期誘導培養(yǎng)基中，艾塞那肽的終濃度為30～80nmol/l。

12、優(yōu)選的，所述后期誘導培養(yǎng)基中還包含以下終濃度的組分：

13、10～20mmol/l尼克酰胺、5～15μg/l?bfgf和5～7％生長因子。

14、優(yōu)選的，所述中期誘導培養(yǎng)基中包含以下終濃度的組分：

15、80～120μg/lβ-神經(jīng)生長因子、3～5nmol/l?activina、20～30μg/l表皮生長因子、1～3％?b27補充劑和5～7％生長因子。

16、優(yōu)選的，所述第一階段誘導培養(yǎng)的時間為1～4天；

17、所述第二階段誘導培養(yǎng)的時間為5～10天；

18、所述第三階段誘導培養(yǎng)的時間為5～10天。

19、優(yōu)選的，s1中，所述人臍帶間充質(zhì)干細胞的接種密度為5×104～5×105個/孔；

20、和/或，所述人臍帶間充質(zhì)干細胞為傳代培養(yǎng)第3代的人臍帶間充質(zhì)干細胞。

21、優(yōu)選的，所述初期誘導培養(yǎng)基采用無血清培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基；

22、所述中期誘導培養(yǎng)基采用無血清培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基；

23、所述后期誘導培養(yǎng)基采用無血清培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基。

24、本發(fā)明的有益效果：

25、本發(fā)明采用特定的三步誘導方案，能夠利用人臍帶間充質(zhì)干細胞成功誘導得到胰島β細胞，并且促進所獲得的胰島β細胞的增殖和存活情況，在提升誘導率的同時進一步優(yōu)化產(chǎn)品細胞質(zhì)量。

技術(shù)特征：

1.一種胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述初期誘導培養(yǎng)基中，2-巰基乙醇水溶液的體積百分濃度為0.5～2％。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述2-巰基乙醇水溶液的初始體積百分濃度為0.02％～0.04％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述后期誘導培養(yǎng)基中含有艾塞那肽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述后期誘導培養(yǎng)基中，艾塞那肽的終濃度為30～80nmol/l。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述后期誘導培養(yǎng)基中還包含以下終濃度的組分：

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述中期誘導培養(yǎng)基中包含以下終濃度的組分：

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述第一階段誘導培養(yǎng)的時間為1～4天；

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，s1中，所述人臍帶間充質(zhì)干細胞的接種密度為5×104～5×105個/孔；

10.根據(jù)權(quán)利要求1～9任一項所述的胰島β細胞的體外誘導方法，其特征在于，所述初期誘導培養(yǎng)基采用無血清培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種胰島β細胞的體外誘導方法，屬于細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用特定的三步誘導方案，能夠解決現(xiàn)有技術(shù)中的胰島β細胞誘導方案的誘導率、產(chǎn)品細胞質(zhì)量有待進一步提升的問題。本發(fā)明提供的方案不僅能夠利用人臍帶間充質(zhì)干細胞成功誘導得到胰島β細胞，還能促進所獲得的胰島β細胞的增殖和存活情況，在提升誘導率的同時進一步優(yōu)化產(chǎn)品細胞質(zhì)量。

技術(shù)研發(fā)人員：姜琦,趙小兵
受保護的技術(shù)使用者：陜西北天生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/11