本發(fā)明屬于生物材料，具體涉及一種脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分及其分離提純方法。

背景技術：

1、基于細胞外基質的生物支架與人工合成支架相比，在結構和成分上模擬了體內微環(huán)境、免疫源性低、生物相容性高，廣泛用于組織工程與再生醫(yī)學領域。脂肪源性脫細胞基質(decellular?adipose-derived?matrix,dam)生物支架的來源脂肪抽吸物或其他廢棄脂肪組織，獲取渠道廣泛，可以在體內實現(xiàn)脂肪組織再生并用于軟組織重建。

2、目前該支架應用面臨的主要問題是支架再生效果參差不齊，穩(wěn)定性差，難以橫向比較。這阻礙了科學研究的發(fā)展和支架的臨床轉化。我們發(fā)現(xiàn)，dam中的親水性成分有利于成脂，而親脂性成分的成脂效果差。兩種成分不同的混合比例造成了不同的成脂效果?；诖税l(fā)現(xiàn)，我們認為有必要在制備過程的基質前體階段將成脂的有效成分，即親水性成分進行分離和提純，從而提高和穩(wěn)定支架的再生效果。然而目前缺乏dam中親水性成分分離方法的技術方案。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分及其分離提純方法和應用。本發(fā)明通過簡單的物理手段可將dam中誘導脂肪再生的有益成分，即親水性成分分離和提純出來。而基于這樣的分離技術，可將支架的成分統(tǒng)一化，從而穩(wěn)定再生效果，并有利于實現(xiàn)技術效果的橫向比較和臨床轉化。

2、本發(fā)明所提供的技術方案如下：

3、一種脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，包括以下步驟：

4、1)獲取脂肪組織，并從脂肪組織中分離出脂肪層；

5、2)將步驟1)得到的脂肪層除水后進行物理破碎，得到脂肪漿液；

6、3)將步驟2)得到的脂肪漿液中的親水性成分和親脂性成分分離，得到親水性脂肪源性脫細胞基質前體。

7、發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，脂肪源性脫細胞基質(dam)的有益成分是親水性成分。上述技術方案提供了一種通過純物理手段分離、提純脂肪源性脫細胞基質中的親水性成分的方法。采用該方法可以有效純化脂肪源性脫細胞基質，提高和穩(wěn)定其作為支架的應用效果。

8、具體的，步驟1)中：以脂肪組織作為供體，去除纖維組織和筋膜，pbs浸泡，低速離心，去除油脂、血液和腫脹液，得到中間的脂肪層。

9、進一步的，所述脂肪組織為廢棄的吸脂脂肪組織。

10、基于上述技術方案，可以對廢棄的吸脂脂肪進行利用。

11、具體的，步驟2)中：將脂肪層通過離心去除水分，然后通過勻漿機勻漿成液體，得到脂肪漿液。

12、具體的，步驟3)包括以下步驟：

13、3a)將步驟2)得到的脂肪漿液高速離心進行分層，得到第一分層液，其從上至下依次為：油、未破碎脂肪與脂肪源性脫細胞基質前體混合物、液體相和沉淀，將沉淀收集備用；

14、3b)向未破碎脂肪與脂肪源性脫細胞基質前體混合物中加入其3倍體積以上的超純水，在搖床上充分震蕩，將親水性成分溶解至水相中，得到第二分層液；

15、3c)將步驟3b)得到的第二分層液冷凍，然后水浴加熱；

16、3d)在第二分層液解凍為液體后立即高速離心，并收集離心后的沉淀；

17、3e)對離心后的液體重復步驟3b)至3d)若干次，直至離心后沒有沉淀出現(xiàn)，收集位于油層和液體之間的米白色的一層，得到親脂性脂肪來源脫細胞基質前體成分；

18、3f)收集步驟3a)到步驟3e)得到的各沉淀，得到親水性脂肪來源脫細胞基質前體成分。進一步的，將該前體成分用于后續(xù)的化學漂洗脫細胞流程，以制備親水性脂肪來源脫細胞基質生物支架。

19、上述技術方案提供了一種通過勻漿、離心、震蕩和凍融的純物理手段分離、提純脂肪源性脫細胞基質前體中的親水性成分的方法。

20、具體的：步驟3a)中的高速離心：離心力3400～3600g，時間2.5～3.5min。

21、具體的：步驟3c)中，在-15～-25℃冷凍25～35分鐘；在36～38℃水浴加熱8～12分鐘。

22、具體的：步驟3d)中的高速離心：離心力3400～3600g，時間2.5～3.5min。

23、本發(fā)明還提供了根據(jù)上述方法分離提純得到的親水性脂肪來源脫細胞基質前體成分。

24、本發(fā)明還提供了親水性脂肪來源脫細胞基質前體成分的應用，用于制備生物支架。

25、親水性脂肪來源脫細胞基質成分制備生物支架，可誘導脂肪組織再生，并用于軟組織重建。

26、本發(fā)明的有益效果：

27、本發(fā)明通過純物理手段分離用于支架制備的基質前體中的親水性和親脂性成分。分離過程簡單易操作，避免化學修飾和其他非生物成分來源成分的引入，保留了dam支架生物相容性好、安全性高的優(yōu)勢。

技術特征：

1.一種脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于，步驟1)中：以脂肪組織作為供體，去除纖維組織和筋膜，pbs浸泡，低速離心，去除油脂、血液和腫脹液，得到中間的脂肪層。

3.根據(jù)權利要求2所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于：所述脂肪組織為廢棄的吸脂脂肪組織。

4.根據(jù)權利要求1所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于，步驟2)中：將脂肪層通過離心去除水分，然后通過勻漿機勻漿成液體，得到脂肪漿液。

5.根據(jù)權利要求1至4任一所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于，步驟3)包括以下步驟：

6.根據(jù)權利要求5所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于：步驟3a)中的高速離心：離心力3400～3600g，時間2.5～3.5min。

7.根據(jù)權利要求5所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于：步驟3c)中，在-15～-25℃冷凍25～35分鐘；在36～38℃水浴加熱8～12分鐘。

8.根據(jù)權利要求5所述的脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法，其特征在于：步驟3d)中的高速離心：離心力3400～3600g，時間2.5～3.5min。

9.一種根據(jù)權利要求1至8任一所述的方法分離提純得到的親水性脂肪來源脫細胞基質前體成分。

10.一種根據(jù)權利要求9所述的親水性脂肪來源脫細胞基質前體成分的應用，其特征在于：用于制備脂肪再生生物支架。

技術總結
本發(fā)明屬于生物材料技術領域，具體涉及一種脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分及其分離提純方法。該脂肪來源脫細胞基質前體中親水性成分的分離提純方法包括以下步驟：1)獲取脂肪組織，并從脂肪組織中分離出脂肪層；2)將步驟1)得到的脂肪層除水后進行物理破碎，得到脂肪漿液；3)將步驟2)得到的脂肪漿液中的親水性成分和親脂性成分分離，得到親水性脂肪源性脫細胞基質前體。本發(fā)明通過簡單的物理手段可將脂肪源性脫細胞基質前體中誘導脂肪再生的有益成分，即親水性成分分離和提純出來。而基于這樣的分離技術，可將支架的成分統(tǒng)一化，從而穩(wěn)定再生效果，并有利于實現(xiàn)技術效果的橫向比較和臨床轉化。

技術研發(fā)人員：馬小睦,岳強,侯雪迎,欒杰,劉春軍,付蘇
受保護的技術使用者：中國醫(yī)學科學院整形外科醫(yī)院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/5