本發(fā)明涉及菌落檢測(cè)，具體涉及一種檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、菌落總數(shù)就是指在一定條件下(如需氧情況、營(yíng)養(yǎng)條件、ph、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等)每克(每毫升)檢樣所生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)菌菌落總數(shù)。菌落總數(shù)測(cè)定是用來(lái)判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過(guò)程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。

2、為了便于菌落總數(shù)的檢測(cè)，現(xiàn)有技術(shù)中經(jīng)常使用測(cè)試片進(jìn)行測(cè)試。如中國(guó)發(fā)明專利cn201180032280.9公開(kāi)了一種涂料組合物，其包含粉末狀冷水溶性膠凝劑和設(shè)置于所述粉末狀冷水溶性膠凝劑中的表面改性納米粒子；一種帶涂層的膜，其包括涂布有所述涂料組合物的透明膜；和一種用于培養(yǎng)微生物的裝置，其包括以可脫開(kāi)的方式附接至主體構(gòu)件的至少一部分的所述帶涂層的膜，所述主體構(gòu)件包括自支承且防水的基材。該專利即為早起公開(kāi)的測(cè)試片的專利。

3、發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，目前大多數(shù)測(cè)試片的顯色劑都是使用氯化三苯基四氮唑(ttc)。而顯色劑ttc的優(yōu)點(diǎn)是：可以將菌落顯示為紅色，濃度越高顏色越紅，可以與食物顆粒區(qū)分開(kāi)；但是ttc存在的缺點(diǎn)是：會(huì)抑制菌落的生長(zhǎng)，而且濃度越高抑制效果越強(qiáng)，而且革蘭氏陽(yáng)性菌比革蘭氏陰性菌對(duì)ttc更敏感，可能在某濃度下革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)基本不受到抑制，而革蘭氏陽(yáng)性菌會(huì)被嚴(yán)重抑制生長(zhǎng)，導(dǎo)致許多細(xì)菌檢測(cè)不出來(lái)。

4、因此，開(kāi)發(fā)一種能夠盡可能多的檢測(cè)出細(xì)菌菌落，以及進(jìn)一步能夠縮短檢測(cè)時(shí)間的測(cè)試片具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的至少之一的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了一種檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片及其制備方法。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明首先提供了一種檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其包括下層薄膜、下層粉末、中間泡沫隔層、上層薄膜、上層粉末以及粉末粘合劑；

4、所述的下層粉末通過(guò)粉末粘合劑黏附在下層薄膜上；所述的下層粉末為微生物生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)粉；

5、所述的上層粉末通過(guò)粉末粘合劑黏附在上層薄膜上；所述的上層粉末為讓微生物菌落能夠顯色的粉末；

6、所述的中間泡沫隔層中含有凹槽；所述的凹槽供液體樣品加入。

7、本發(fā)明提供了一種全新的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片；研究表明，通過(guò)本發(fā)明測(cè)試片檢測(cè)出來(lái)的菌落總數(shù)與采用國(guó)標(biāo)法檢測(cè)出來(lái)的菌落總數(shù)相當(dāng)；并且檢測(cè)時(shí)間相比于國(guó)標(biāo)法得到了大幅的縮短。

8、優(yōu)選地，所述的下層薄膜采用的是pet薄膜。

9、研究表明，下層薄膜采用pet薄膜，其具有堅(jiān)硬、防水的作用，并且透明度高。

10、優(yōu)選地，所述的上層薄膜采用的是bopp薄膜。

11、研究表明，上層薄膜采用bopp薄膜，其具有防水透氣以及透明度高的作用。

12、優(yōu)選地，中間泡沫隔層的材料采用的是eps泡沫材料。

13、研究表明，間泡沫隔層的材料采用eps泡沫材料，其有足夠的防水性，進(jìn)而不會(huì)讓水分大量蒸發(fā)。

14、優(yōu)選地，所述的中間泡沫隔層中的凹槽為直徑為3～6cm的圓形凹槽。

15、優(yōu)選地，所述的粉末粘合劑由丙烯酸異辛酯和乙酸乙酯組成。

16、優(yōu)選地，粉末粘合劑中丙烯酸異辛酯和乙酸乙酯的體積比為90～98：10～2。

17、最優(yōu)選地，粉末粘合劑中丙烯酸異辛酯和乙酸乙酯的體積比為96：4。

18、優(yōu)選地，粘合劑在下層薄膜以及上層薄膜上的含量為8～9g/m2。

19、優(yōu)選地，下層粉末在下層薄膜上的含量為0.0025～0.0035g/cm2。

20、優(yōu)選地，上層粉末在上層薄膜上的含量為0.0050～0.0060g/cm2。

21、優(yōu)選地，所述的下層粉末包含如下重量份的組分：

22、瓜爾膠10～20份；胰蛋白胨3～6份；酵母提取粉2～4份；葡萄糖0.5～1.5份；氣相二氧化硅0.1～0.2份；丙酮酸鈉2～4份；甘露醇1～3份；磷酸氫二鉀1～2份。

23、最優(yōu)選地，所述的下層粉末包含如下重量份的組分：

24、瓜爾膠15份；胰蛋白胨5份；酵母提取粉2.5份；葡萄糖1份；氣相二氧化硅0.12份；丙酮酸鈉3份；甘露醇2份；磷酸氫二鉀1.2份。

25、發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明下層粉末的組成十分關(guān)鍵；研究表明，所述的測(cè)試片采用在本發(fā)明所述組成的下層粉末，其可以使得所述的測(cè)試片只需國(guó)標(biāo)法一半的時(shí)間，即可檢測(cè)出與國(guó)標(biāo)法相當(dāng)?shù)木鋽?shù)。

26、優(yōu)選地，所述的酵母提取粉通過(guò)如下方法制備得到：

27、(1)取活性酵母菌加水?dāng)嚢杈鶆蚝蟮媒湍富旌弦海?/p>

28、(2)在酵母混合液中加入酶進(jìn)行酶解，調(diào)節(jié)ph為6～8，于25～40℃下酶解12～36h，酶解結(jié)束后高溫滅酶，離心取酵母酶解液；

29、(3)將酵母酶解液干燥后即得所述的酵母提取粉。

30、優(yōu)選地，步驟(1)中活性酵母菌與水的重量比為1:5～10。

31、最優(yōu)選地，步驟(1)中活性酵母菌與水的重量比為1:8。

32、優(yōu)選地，步驟(2)中酶的添加量為酵母混合液重量的1％～2％。

33、優(yōu)選地，所述的酶選自酵母抽提酶、中性蛋白酶以及木瓜蛋白酶中的一種或一種以上的組成。

34、優(yōu)選地，所述的酶由酵母抽提酶和中性蛋白酶組成。

35、優(yōu)選地，酵母抽提酶和中性蛋白酶的重量比為1～3:1～3。

36、最優(yōu)選地，酵母抽提酶和中性蛋白酶的重量比為1:1。

37、其中，酵母抽提酶、中性蛋白酶以及木瓜蛋白酶的酶活力為10萬(wàn)u/g。

38、優(yōu)選地，所述的上層粉末包含如下重量份的組分：

39、黃原膠20～25份；氯化三苯基四氮唑0.005～0.015份。

40、最優(yōu)選地，所述的上層粉末包含如下重量份的組分：

41、黃原膠22.5份；氯化三苯基四氮唑0.01份。

42、本發(fā)明還提供了一種上述檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片的制備方法，其包含如下步驟：

43、取上層粉末的組分，按所述重量份混合均勻后加水溶解，使用噴霧干燥機(jī)或者冷凍干燥機(jī)制成干粉，即得所述的上層粉末；

44、取下層粉末的組分，按所述重量份混合均勻后加水溶解，使用噴霧干燥機(jī)或者冷凍干燥機(jī)制成干粉，即得所述的下層粉末；

45、將粉末粘合劑分別涂抹到下層薄膜以及上層薄膜上；接著將下層粉末均勻地涂抹到含有粉末粘合劑的下層薄膜上，將上層粉末均勻地涂抹到含有粉末粘合劑的上層薄膜上；

46、將含有下層粉末的下層薄膜、中間泡沫隔層、含有上層粉末的上層薄膜依次組裝后即得所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片。

47、有益效果：本發(fā)明提供了一種全新的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片；研究表明，通過(guò)本發(fā)明測(cè)試片檢測(cè)出來(lái)的菌落總數(shù)與采用國(guó)標(biāo)法檢測(cè)出來(lái)的菌落總數(shù)相當(dāng)；并且檢測(cè)時(shí)間相比于國(guó)標(biāo)法得到了大幅的縮短。

技術(shù)特征：

1.一種檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，包括下層薄膜、下層粉末、中間泡沫隔層、上層薄膜、上層粉末以及粉末粘合劑；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，所述的下層薄膜采用的是pet薄膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，所述的上層薄膜采用的是bopp薄膜。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，中間泡沫隔層的材料采用的是eps泡沫材料。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，所述的中間泡沫隔層中的凹槽為直徑為3～6cm的圓形凹槽。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，所述的粉末粘合劑由丙烯酸異辛酯和乙酸乙酯組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，所述的下層粉末包含如下重量份的組分：

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其特征在于，所述的上層粉末包含如下重量份的組分：

9.權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片的制備方法，其特征在于，包含如下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及菌落檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片及其制備方法。所述的檢測(cè)菌落總數(shù)的測(cè)試片，其包括下層薄膜、下層粉末、中間泡沫隔層、上層薄膜、上層粉末以及粉末粘合劑；所述的下層粉末通過(guò)粘合劑黏附在下層薄膜上；所述的下層粉末為微生物生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)粉；所述的上層粉末通過(guò)粘合劑黏附在上層薄膜上；所述的上層粉末為讓微生物菌落能夠顯色的粉末；所述的中間泡沫隔層中含有凹槽；所述的凹槽供液體樣品加入。研究表明，通過(guò)本發(fā)明測(cè)試片檢測(cè)出來(lái)的菌落總數(shù)與采用國(guó)標(biāo)法檢測(cè)出來(lái)的菌落總數(shù)相當(dāng)；并且檢測(cè)時(shí)間相比于國(guó)標(biāo)法得到了大幅的縮短。

技術(shù)研發(fā)人員：徐保峰,陳裕昌,許俊康,鄧淑玲,謝析哲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州市保達(dá)新材料科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19