本發(fā)明涉及核酸檢測，具體是涉及一種拭子樣本核酸釋放劑。

背景技術：

1、常規(guī)病原微生物的核酸檢測需經過核酸提取步驟，這使得核酸檢測過程耗時較長，不能滿足快速檢測需要。核酸釋放劑可用于快速裂解各類常見樣本，無需核酸的提取純化步驟，樣本裂解物可直接作為模板進行擴增反應，目前已在病原微生物檢測領域普遍使用。但現有核酸釋放劑存在操作不夠簡便，以及核酸釋放仍不夠快速等問題。

2、假設某一核酸檢測方法足夠靈敏，即滿足檢測體系中大于等于一個靶標分子即可報告陽性結果。此時，對于低濃度樣本(≤3copy/μl)而言，其檢出結果的穩(wěn)定性在很大程度上取決于能否取到大于等于一個靶標分子進入檢測體系參與擴增。對于核酸檢測，低濃度樣本的取樣是一個隨機獨立的事件，每次取樣過程中取到的靶標分子的數量服從泊松分布。從取樣概率的角度，使用泊松分布解釋低濃度樣本檢測不穩(wěn)定的原因，計算低濃度樣本(1copy/μl)不同取樣體積下取到k(非負整數)個靶標分子的概率。只有當取樣體積達到10ul時，才能有99.72％的概率取到≥3copy的病毒。中國專利cn112980831b公開了一種拭子核酸釋放劑、雖然簡單方便，但其加樣體積只能達到反應體積的20％，可能無法滿足低濃度樣本的檢測需求，會造成很多的假陰性。

3、因此，當前背景下，持續(xù)開發(fā)和優(yōu)化核酸釋放劑對病原微生物的實際檢測工作有重要意義。

技術實現思路

1、本發(fā)明的目的是為了克服上述背景技術所述核酸釋放劑產品的不足，提供了一種拭子樣本核酸釋放劑，該核酸釋放劑能快速釋放拭子樣本dna或rna的核酸，當樣本采集后，立即將樣本與核酸釋放劑混合，室溫靜置230min，即可吸取樣本進行核酸檢測，且不影響后續(xù)pcr檢測反應，操作簡便，特別適合一些在急診、發(fā)熱門診等情景的核酸檢測。

2、為達到本發(fā)明的目的，本發(fā)明通過大量研究試驗在所述核酸釋放劑中復配了多種細胞裂解劑，最終所得拭子樣本核酸釋放劑的主要成分為強堿、sds、酶保護劑和曲拉通100(triton-100)，試驗結果顯示，本發(fā)明所述核酸釋放劑能達到快速釋放核酸但不影響后續(xù)pcr反應的要求。

3、進一步地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中強堿為naoh和/或koh。

4、進一步地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中強堿的濃度為10-30mm。

5、進一步地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中sds的質量濃度為0.005％～0.05％。

6、進一步地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中的曲拉通100的體積濃度為2％～6％，優(yōu)選2％～4％。

7、進一步地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述酶保護劑選自明膠、tween20或甜菜堿中的一種或多種。

8、優(yōu)選地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中酶保護劑的含量為2％～6％，優(yōu)選4％。

9、進一步優(yōu)選地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中強堿濃度為10-20mm、sds的質量濃度為0.008％～0.012％、曲拉通100的質量體積濃度為2％～4％、酶保護劑的含量為2％～6％。

10、更進一步優(yōu)選地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述核酸釋放劑中強堿為naoh，酶保護劑為tween20。

11、進一步優(yōu)選地，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述酶保護劑為tween20和明膠，且二者的質量比為4：0.2-0.6。

12、與現有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點如下：

13、(1)常規(guī)核酸提取試劑中的主要成分為細胞裂解劑，常用的細胞裂解劑如尿素、ctab等的殘留會對后續(xù)pcr反應產生明顯的抑制，需要嚴格控制使用量，除上述試劑外，一些較為溫和的表面活性劑也可滿足細胞裂解的需要，而本發(fā)明所述核酸釋放劑中復配了多種細胞裂解劑，不但能快速釋放核酸，還無不良影響。

14、(2)本發(fā)明所述核酸釋放劑可以對采集拭子樣本進行核酸的快速釋放。當樣本采集后，立刻將樣本與所述核酸釋放劑混合，室溫靜置2～30min，即可吸取樣本裂解物進行核酸檢測，操作方便快捷，且不會對后續(xù)pcr反應造成影響，加樣量可以達到最大的反應體積容量。

技術特征：

1.一種拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中包含強堿、sds、酶保護劑和曲拉通100。

2.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中強堿為naoh和/或koh。

3.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中強堿的濃度為10-30mm。

4.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中sds的質量濃度為0.005％～0.05％。

5.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中的曲拉通100的體積濃度為2％～6％，優(yōu)選2％～4％。

6.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述酶保護劑選自明膠、tween20或甜菜堿中的一種或多種。

7.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中酶保護劑的含量為2％～6％，優(yōu)選4％。

8.根據權利要求1所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中強堿濃度為10-20mm、sds的質量濃度為0.008％～0.012％、曲拉通100的質量體積濃度為2％～4％、酶保護劑的含量為2％～6％。

9.根據權利要求8所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述核酸釋放劑中強堿為naoh，酶保護劑為tween20。

10.根據權利要求8所述的拭子樣本核酸釋放劑，其特征在于，所述酶保護劑為tween20和明膠，且二者的質量比為4：0.2-0.6。

技術總結
本發(fā)明屬于核酸檢測技術領域，公開了一種拭子樣本核酸釋放劑。本發(fā)明的拭子樣本核酸釋放劑中添加了強堿、SDS、酶保護劑和曲拉通100。本發(fā)明的核酸釋放劑能夠快速釋放核酸，無需進行核酸的提取純化步驟。拭子樣本采集后置于本發(fā)明所述核酸釋放劑中，室溫靜置5～10min即可直接用于PCR分子生物學實驗，且對后續(xù)核酸檢測不產生影響，加樣體積可達到反應體積的同等量。試驗結果顯示，本發(fā)明的產品安全可靠，操作簡單、快速，適用于急診、發(fā)熱門診、現場大量快速篩查等核酸檢測場景。

技術研發(fā)人員：楊華,陳夏敏,崔玉峰
受保護的技術使用者：上海北昂醫(yī)藥科技股份有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/10