本發(fā)明涉及生物，具體涉及蠟樣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑、制備方法以及姜黃素的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、在原料乳中，蠟樣芽孢桿菌是常見(jiàn)的食源性致病菌之一，其能產(chǎn)生生物膜和毒素，污染乳制品，進(jìn)而對(duì)消費(fèi)者的健康構(gòu)成威脅。在蠟樣芽孢桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和磷脂酶，其中以蛋白酶為主的耐熱酶是乳和乳制品發(fā)生腐敗相關(guān)的主要胞外酶之一。由于蠟樣芽孢桿菌所產(chǎn)蛋白酶存在耐熱性，常規(guī)的熱處理難以將其滅活，并且蛋白酶可能存在耐低溫性，在乳制品生產(chǎn)到銷售過(guò)程中會(huì)持續(xù)存在，蛋白酶水解乳中的κ-酪蛋白、β-酪蛋白和α-酪蛋白，導(dǎo)致乳制品出現(xiàn)蛋白沉淀和苦味等不良現(xiàn)象，嚴(yán)重影響產(chǎn)品品質(zhì)，縮短其貨架期。因此，開發(fā)新的蠟樣芽孢桿菌蛋白酶的抑制劑，解決常規(guī)熱處理技術(shù)難以將其滅活的問(wèn)題，對(duì)保障乳品質(zhì)量安全以及延長(zhǎng)貨架期具有重要影響。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種蠟樣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑、制備方法以及姜黃素的應(yīng)用，開發(fā)新的蠟樣芽孢桿菌蛋白酶的抑制劑，以解決常規(guī)熱處理技術(shù)難以將其滅活的問(wèn)題，對(duì)保障乳品質(zhì)量安全以及延長(zhǎng)貨架期具有重要影響問(wèn)題。

2、本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、一方面，本發(fā)明提供一種蠟樣芽孢桿菌，所述蠟樣芽孢桿菌d8(bacillus?cereusd8)已于2024年6月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為gdmcc?no.64815。

4、進(jìn)一步地，在所述的蠟樣芽孢桿菌中，所述蠟樣芽孢桿菌d8具有l(wèi)uxs/ai-2型群體感應(yīng)系統(tǒng)。

5、另一方面，本發(fā)明提供姜黃素在制備蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑中的應(yīng)用，所述蠟樣芽孢桿菌包括蠟樣芽孢桿菌d8。

6、另一方面，姜黃素在抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性中的應(yīng)用，所述蠟樣芽孢桿菌蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶。

7、另一方面，姜黃素在抑制蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)的信號(hào)分子中的應(yīng)用，所述蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶。

8、另一方面，姜黃素在制備抑制蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)的信號(hào)分子制劑中的應(yīng)用，所述蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶。

9、進(jìn)一步地，所述群體感應(yīng)信號(hào)分子為ai-2。

10、另一方面，本發(fā)明提供一種蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑，所述群體感應(yīng)抑制劑包括姜黃素；所述蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶，所述蠟樣芽孢桿菌d8具有l(wèi)uxs/ai-2型群體感應(yīng)系統(tǒng)。

11、進(jìn)一步地，在所述的蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑中，所述姜黃素的濃度為0.1μg/ml～400μg/ml。

12、另一方面，本發(fā)明提供上述的蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑的制備方法，包括：

13、將活化后的蠟樣芽孢桿菌d8接種到第一培養(yǎng)基中，在25～45℃溫度下培養(yǎng)10h～15h后，按接種量為1％～2％接種到含姜黃素的第二培養(yǎng)基中，分別在25℃～45℃下50r/min～200r/min振蕩培養(yǎng)10h～15h。

14、進(jìn)一步地，在所述的蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑的制備方法中，所述第一培養(yǎng)基為lb肉湯培養(yǎng)基；

15、優(yōu)選地，所述第二培養(yǎng)基為lb肉湯培養(yǎng)基；

16、優(yōu)選地，在所述第二培養(yǎng)基中姜黃素的濃度為0.1μg/ml～400μg/ml；

17、優(yōu)選地，含姜黃素的第二培養(yǎng)基的制備包括：將姜黃素溶于有機(jī)溶劑中，于-20℃溫度下保存，將保存后的姜黃素溶液按照不同的量加入到第二培養(yǎng)基中制成不同濃度的姜黃素溶液。

18、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

19、本發(fā)明通過(guò)提供具有l(wèi)uxs/ai-2型群體感應(yīng)系統(tǒng)的蠟樣芽孢桿菌，利用姜黃素作為抑制活性成分抑制蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)來(lái)制備蠟樣芽孢桿菌蛋白酶抑制劑，可有效抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性，在不影響細(xì)菌生長(zhǎng)的情況下，通過(guò)干擾存在于蠟樣芽孢桿菌的luxs/ai-2群體感應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)而降低蛋白酶酶活，從而達(dá)到抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性的作用。

20、本發(fā)明所提供的姜黃素作為抑制活性成分抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性，具有不易產(chǎn)生耐藥性，抑制效果好的特點(diǎn)，能夠有效抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性，保證乳品質(zhì)量安全。本發(fā)明所提供的姜黃素以一種非熱處理方式即干擾蠟樣芽孢桿菌luxs/ai-2型群體感應(yīng)系統(tǒng)有效抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性的同時(shí)也可以有效避免熱處理對(duì)蠟樣芽孢桿菌所在基質(zhì)中生物活性物質(zhì)造成的熱損害。本發(fā)明所提供的姜黃素作為一種天然化合物，并具有高療效低毒性的特點(diǎn)，在作為抑制活性成分抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶方面具有良好的開發(fā)前景。

技術(shù)特征：

1.一種蠟樣芽孢桿菌，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌d8（bacillus?cereus?d8）已于2024年6月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為gdmcc?no.64815。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌d8具有l(wèi)uxs/ai-2型群體感應(yīng)系統(tǒng)。

3.姜黃素在制備蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌包括蠟樣芽孢桿菌d8。

4.姜黃素在抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性中的應(yīng)用，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶。

5.姜黃素在抑制蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)信號(hào)分子中的應(yīng)用，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，所述群體感應(yīng)信號(hào)分子為ai-2。

7.一種蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑，其特征在于，所述群體感應(yīng)抑制劑包括姜黃素；所述蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶包括蠟樣芽孢桿菌d8產(chǎn)生的胞外蛋白酶，所述蠟樣芽孢桿菌d8具有l(wèi)uxs/ai-2型群體感應(yīng)系統(tǒng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑，其特征在于，所述姜黃素的濃度為0.1μg/ml?~400μg/ml。

9.一種如權(quán)利要求7或8所述的蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑的制備方法，其特征在于，包括：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑的制備方法，其特征在于，所述第一培養(yǎng)基為lb肉湯培養(yǎng)基；優(yōu)選地，所述第二培養(yǎng)基為lb肉湯培養(yǎng)基；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了蠟樣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)抑制劑、制備方法以及姜黃素的應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供一種蠟樣芽孢桿菌，所述蠟樣芽孢桿菌D8（Bacillus?cereus?D8）已于2024年6月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為GDMCC?NO.64815。本發(fā)明通過(guò)提供具有LuxS/AI?2型群體感應(yīng)系統(tǒng)的蠟樣芽孢桿菌，利用姜黃素作為抑制活性成分抑制蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶相關(guān)的群體感應(yīng)來(lái)制備蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶抑制劑，可有效抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性，在不影響細(xì)菌生長(zhǎng)的情況下，通過(guò)干擾存在于蠟樣芽孢桿菌的LuxS/AI?2群體感應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)而降低蛋白酶活性，從而達(dá)到抑制蠟樣芽孢桿菌蛋白酶活性的作用。

技術(shù)研發(fā)人員：姜毓君,何夢(mèng)麗,楊鑫焱,滿朝新,程婧祺,祁雪鶴
受保護(hù)的技術(shù)使用者：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26