本發(fā)明屬于微生物，具體涉及一株解淀粉芽孢桿菌及在防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、芍藥(paeonia?lactiflora?pall.)作為一種多年生草本植物，以其獨(dú)特的觀賞價(jià)值和藥用價(jià)值而被廣泛種植。但是芍藥在生長(zhǎng)與栽培過程中，常受到多種植物病害的侵?jǐn)_，其中葉斑病是最為常見且危害嚴(yán)重的一種真菌性病害，主要由芍藥尾孢菌(cercosporapaeoniae)引起的，表現(xiàn)為葉片出現(xiàn)斑點(diǎn)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致整個(gè)葉片枯死，嚴(yán)重影響植株的觀賞價(jià)值和藥用價(jià)值。

2、傳統(tǒng)的化學(xué)防治方法雖然在一定程度上可以有效控制病害的發(fā)生和擴(kuò)散，但長(zhǎng)期大量使用化學(xué)農(nóng)藥不僅造成環(huán)境污染，還可能對(duì)人類健康產(chǎn)生潛在風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)會(huì)使病菌產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致化學(xué)防治的難度增加。為了解決這些問題，生物防治技術(shù)逐漸成為研究的熱點(diǎn)，生物防治即是利用生防菌的天然作用來控制或消滅病害，這種方法具有環(huán)保、高效、無抗藥性等優(yōu)點(diǎn)。在這些生防菌中，解淀粉芽孢桿菌屬表現(xiàn)出了極佳的防病性能，如，劉永峰等發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌b1619對(duì)連作西瓜生長(zhǎng)及枯萎病發(fā)生具有一定的抑菌防治效果(王夏雯,孟佳麗,劉永鋒,等.解淀粉芽孢桿菌b1619對(duì)連作西瓜生長(zhǎng)及枯萎病發(fā)生的影響[j].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2019,34(11))；史一然等發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌lzn01對(duì)西瓜?；图怄哏牭毒哂酗@著抑制效應(yīng)(史一然,徐偉慧,呂智航,等.解淀粉芽孢桿菌lzn01對(duì)西瓜?；图怄哏牭毒囊种菩?yīng)[j].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2019,47(12))。然而目前鮮有提到對(duì)芍藥葉斑病有抑制效果的相關(guān)研究，芍藥等觀賞植物的健康生長(zhǎng)缺乏環(huán)保、長(zhǎng)期、有效的防病解決方案。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供了一株解淀粉芽孢桿菌及在防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。本發(fā)明首先自黃河灘涂的泥樣分離、篩選到一株高效拮抗芍藥葉斑病病原芍藥尾孢菌(cercospora?paeoniae)的解淀粉芽孢桿菌(bacillus?amyloliquefaciens)fzd-02，然后進(jìn)一步制備成可濕性粉劑。經(jīng)大田實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明制備的解淀粉芽孢桿菌fzd-02可濕性粉劑對(duì)芍藥葉斑病具有良好的防治效果，表現(xiàn)出較好的生防應(yīng)用潛力。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明首先自黃河灘涂的泥樣分離、篩選到一株高效拮抗芍藥葉斑病病原芍藥尾孢菌(cercospora?paeoniae)的解淀粉芽孢桿菌(bacillus?amyloliquefaciens)fzd-02，此菌株已于2022年12月08日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱cgmcc，地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏編號(hào)為cgmccno.26141。該菌株在na培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為規(guī)則圓形，前期表面濕潤(rùn)光滑，粘稠，不透明；后期表面有褶皺凸起、呈乳白色，產(chǎn)芽孢且為中生芽孢。

4、本發(fā)明提供了上述的解淀粉芽孢桿菌(bacillus?amyloliquefaciens)fzd-02在拮抗芍藥葉斑病病原芍藥尾孢菌(cercospora?paeoniae)，防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。

5、本發(fā)明還提供一種解淀粉芽孢桿菌(bacillus?amyloliquefaciens)fzd-02的可濕性粉劑，其特征是，包括以下步驟：

6、(1)一級(jí)種子液制備

7、取活化的解淀粉芽孢桿菌fzd-02接種于nb培養(yǎng)基中，37±0.5℃震蕩培養(yǎng)18～20h，測(cè)得od600為0.5～0.8之間時(shí)停止培養(yǎng)，所得菌液即為一級(jí)種子液；

8、(2)二級(jí)種子液制備

9、將培養(yǎng)好的一級(jí)種子液(按接種體積比0.5～1％)接入二級(jí)種子液培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵條件：溫度37±0.5℃、ph7.0～7.2、發(fā)酵時(shí)間14～16h，制成二級(jí)種子液；

10、(3)解淀粉芽孢桿菌fzd-02母液制備

11、將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液(按接種體積比5～10％)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵條件：溫度37±0.5℃、ph7.0～7.2；發(fā)酵終點(diǎn)：芽孢率≥90％；停罐，獲得解淀粉芽孢桿菌fzd-02母液(發(fā)酵液)；

12、(4)可濕性粉劑制備

13、將解淀粉芽孢桿菌fzd-02母液按照1:0.05～0.06的質(zhì)量比與載體混合，然后進(jìn)行噴霧干燥獲得解淀粉芽孢桿菌fzd-02母粉；然后進(jìn)一步制備成可濕性粉劑。

14、進(jìn)一步的，所述噴霧干燥控制進(jìn)風(fēng)溫度178～180℃，出風(fēng)溫度170～175℃。

15、進(jìn)一步的，所述可濕性粉劑配方(質(zhì)量比)：fzd-02母粉12～15％，烷基萘磺酸縮聚物鈉鹽(morwet?d－425)7～8％，羧甲基纖維素鈉(cmc－na)1.5～2％，表面活性劑(如吐溫80)3～5％，硅藻土66～70％，凹凸棒土補(bǔ)齊100％。制備方法：將解淀粉芽孢桿菌fzd-02母粉與烷基萘磺酸縮聚物鈉鹽、羧甲基纖維素鈉、表面活性劑、硅藻土和凹凸棒土混勻，然后經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎制備得到解淀粉芽孢桿菌fzd-02的可濕性粉劑。

16、其中，二級(jí)種子液培養(yǎng)基為：玉米粉1.0％、豆粕粉1.0％、(nh4)2so4?0.5％、mgso4·7h2o0.1％、k2hpo4·3h2o?0.02％、kh2po4?0.01％，其余為水，ph為7.2～7.5。發(fā)酵培養(yǎng)基：同二級(jí)種子液培養(yǎng)基。

17、本發(fā)明還提供了上述的解淀粉芽孢桿菌fzd-02可濕性粉劑在防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。

18、本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明篩選得到的解淀粉芽孢桿菌fzd-02對(duì)芍藥葉斑病具有良好的防治效果且防治效果較為穩(wěn)定，稀釋300倍的fzd-02可濕性粉劑防效達(dá)75.9％，對(duì)于減少化學(xué)殺菌劑的使用，降低農(nóng)藥污染具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一株解淀粉芽孢桿菌(bacillus?amyloliquefaciens)fzd-02，其特征是，其保藏編號(hào)為cgmcc?no.26141。

2.權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌fzd-02在拮抗芍藥葉斑病病原芍藥尾孢菌，防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。

3.一種解淀粉芽孢桿菌fzd-02的可濕性粉劑，其特征是，以權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌fzd-02為主要有效成分。

4.權(quán)利要求3所述的可濕性粉劑的制備方法，其特征是，具體包括以下步驟：

5.如權(quán)利要求4所述的可濕性粉劑的制備方法，其特征是，

6.如權(quán)利要求4所述的可濕性粉劑的制備方法，其特征是，

7.如權(quán)利要求4所述的可濕性粉劑的制備方法，其特征是，所述步驟(4)噴霧干燥控制進(jìn)風(fēng)溫度178～180℃，出風(fēng)溫度170～175℃。

8.權(quán)利要求3所述的解淀粉芽孢桿菌fzd-02可濕性粉劑在防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一株解淀粉芽孢桿菌及在防治芍藥葉斑病中的應(yīng)用。本發(fā)明首先自黃河灘涂的泥樣分離、篩選到一株高效拮抗芍藥葉斑病病原芍藥尾孢菌的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)FZD?02，此菌株已于2022年12月08日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC?No.26141，然后進(jìn)一步將菌株發(fā)酵后的發(fā)酵液制備成可濕性粉劑。經(jīng)大田實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明制備的解淀粉芽孢桿菌FZD?02可濕性粉劑對(duì)芍藥葉斑病具有良好的防治效果，稀釋300倍的可濕性粉劑防效達(dá)75.9％。

技術(shù)研發(fā)人員：馬丙堯,高嘉,龐薇,張淑靜,王霞,馬安寶,龐彩紅,高偉,馬春艷,杜振宇,王洪永,李宜明,顧鳳春,許萍,任廣娟
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東省林業(yè)科學(xué)研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10