本發(fā)明涉及肽提取，具體涉及一種預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法。

背景技術(shù)：

1、腦肽是存在于腦中的多種小分子肽，這些小分子肽具有重要的藥用價(jià)值，如抗菌、抗炎、抗氧化等作用，對(duì)于癡呆，記憶力減退，注意力不集中等問題具有很好的幫助。

2、目前，在提取腦肽方面取得了一定的進(jìn)展，但仍然存在一些技術(shù)瓶頸：

3、(1)純度難以保證：由于腦組織中含有多種成分，提取得到的小分子肽往往伴隨著其他雜質(zhì)，使得純度難以達(dá)到要求；

4、(2)提取效率低：部分小分子肽可能與組織中的其他成分結(jié)合緊密，導(dǎo)致提取效率較低，影響產(chǎn)率。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的是提出一種預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，旨在提高腦肽的提取純度和提取效率。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出一種預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，包括以下步驟：

3、s10.以動(dòng)物腦組織為原料，置于0~4℃下研磨后冷藏12?h~24?h，排酸，洗滌，凍干，得腦組織粉體；

4、s20.將腦組織粉體與nacl溶液混合后置于mrm分子共振環(huán)境下浸泡發(fā)生鹽析反應(yīng)，離心過濾，濾渣為腦組織蛋白，濾液為腦組織肽溶液；

5、s30.將腦組織蛋白懸浮于磷酸鹽緩沖液中，加入木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶，在負(fù)離子的發(fā)生量為2000?e-/cm3~2500?e-/cm3的mrm分子共振環(huán)境下進(jìn)行50℃~60℃水浴反應(yīng)60?min~90?min，滅酶，冷卻，離心，收集上清液，得腦組織蛋白酶解液；

6、s40.將腦組織肽溶液、腦組織蛋白酶解液及弱堿性緩沖液混合，加入胰蛋白酶和糜蛋白酶，37℃~40℃水浴反應(yīng)60?min~90?min，滅酶，冷卻，超濾，對(duì)濾液進(jìn)行噴霧干燥，得預(yù)防癡呆的腦肽。

7、在一實(shí)施例中，步驟s10中，采用tris-hcl緩沖液洗滌，tris-hcl緩沖液的ph值為7.5~8.5。

8、在一實(shí)施例中，步驟s20中，nacl溶液中nacl的質(zhì)量占比為2%~4%；

9、所述腦組織粉體在nacl溶液中的質(zhì)量濃度為50~70?g/l。

10、在一實(shí)施例中，步驟s30中，磷酸鹽緩沖液的ph值為6.5~7.5。

11、在一實(shí)施例中，步驟s30中，木瓜蛋白酶在磷酸鹽緩沖液中的質(zhì)量濃度為40~60?g/l，菠蘿蛋白酶在磷酸鹽緩沖液中的質(zhì)量濃度為40~60?g/l。

12、在一實(shí)施例中，步驟s40中，弱堿性緩沖液包括tris-hcl緩沖液，tris-hcl緩沖液的ph值為7.5~8.5。

13、在一實(shí)施例中，步驟s40中，腦組織肽溶液、腦組織蛋白酶解液及緩沖液的體積比為1:1:（1~2）。

14、在一實(shí)施例中，步驟s30中，滅酶的步驟包括沸水浴10~15?min；和/或，

15、步驟s40中，滅酶的步驟包括沸水浴10~15?min。

16、在一實(shí)施例中，步驟s40中，超濾的步驟采用4.5kda超濾膜進(jìn)行離心過濾率分離。

17、在一實(shí)施例中，步驟s40中，濃縮干燥的步驟包括真空冷凍干燥。

18、本發(fā)明提供的技術(shù)方案通過采用mrm分子共振環(huán)境，提高鹽析反應(yīng)和一次酶解過程中的負(fù)離子發(fā)生量，加快反應(yīng)進(jìn)程，促進(jìn)提高蛋白質(zhì)提取率，以及促進(jìn)酶解提升腦肽的提取率，從而提高腦肽的提取效率；通過采用胰蛋白酶和糜蛋白酶聯(lián)用，提高腦組織蛋白的水解反應(yīng)程度，進(jìn)一步提高腦肽的提取率。

技術(shù)特征：

1.一種預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s10中，采用tris-hcl緩沖液洗滌，tris-hcl緩沖液的ph值為7.5~8.5。

3.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s20中，nacl溶液中nacl的質(zhì)量占比為2%~4%；

4.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s30中，磷酸鹽緩沖液的ph值為6.5~7.5。

5.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s30中，木瓜蛋白酶在磷酸鹽緩沖液中的質(zhì)量濃度為40~60?g/l，菠蘿蛋白酶在磷酸鹽緩沖液中的質(zhì)量濃度為40~60?g/l。

6.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s40中，弱堿性緩沖液包括tris-hcl緩沖液，tris-hcl緩沖液的ph值為7.5~8.5。

7.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s40中，腦組織肽溶液、腦組織蛋白酶解液及緩沖液的體積比為1:1:（1~2）。

8.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s30中，滅酶的步驟包括沸水浴10~15?min；和/或，

9.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s40中，超濾的步驟采用4.5kda超濾膜進(jìn)行離心過濾率分離。

10.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，其特征在于，步驟s40中，濃縮干燥的步驟包括真空冷凍干燥。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提出一種預(yù)防癡呆的腦肽的制備方法，涉及肽提取技術(shù)領(lǐng)域，通過采用冷藏研磨排酸、分子共振輔助鹽析、分子共振輔助酶解、二次酶解、超濾干燥制得預(yù)防癡呆的腦肽。本發(fā)明提供的技術(shù)方案通過采用MRM分子共振環(huán)境，提高鹽析反應(yīng)和一次酶解過程中的負(fù)離子發(fā)生量，加快反應(yīng)進(jìn)程，促進(jìn)提高蛋白質(zhì)提取率，以及促進(jìn)酶解提升腦肽的提取率，從而提高腦肽的提取效率；通過采用胰蛋白酶和糜蛋白酶協(xié)同使用，提高腦組織蛋白的水解反應(yīng)程度，進(jìn)一步提高腦肽的提取率。

技術(shù)研發(fā)人員：王玉民,李猷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：德州藍(lán)力生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10