本發(fā)明涉及生物，尤其是涉及一種高dopa含量的重組貽貝粘蛋白及其制備方法。

背景技術：

1、貽貝是一種廣泛分布于沿海和近海的甲殼類海洋生物，其足絲腺能分泌足絲，并通過足絲形成的足絲盤將貽貝固定在各種基材表面，研究表明，這與貽貝分泌的足絲有關。其足絲的主要成分為貽貝足絲蛋白(mytilus?edulis?foot?protein，mfp)，也稱為貽貝粘蛋白(mussel?adhesive?protein，map)，該蛋白具有高強度、高韌性和防水性。貽貝粘蛋白所形成的涂層具有多功能性，對多級別材料均能實現(xiàn)表面改性。貽貝粘蛋白還具有耐腐蝕性強、生物相容性良好、不會產(chǎn)生免疫反應等特點，在海洋工程、生物醫(yī)學及表面化學等領域具有廣泛的應用前景。

2、目前現(xiàn)有技術的缺點有一下兩點：

3、其一，現(xiàn)有貽貝粘蛋白產(chǎn)品主要是從貽貝足絲腺體中提取獲得的天然粘附蛋白，但由于貽貝粘附蛋白的分泌量很低，提取1g粘附蛋白大約需要30000只貽貝；或采用基因工程法制備重組貽貝粘蛋白，但該方法存在環(huán)境不友好、破壞生物多樣性、破壞環(huán)境穩(wěn)態(tài)、產(chǎn)率較低、純化量低且純化工藝復雜等缺陷，進而造成制備貽貝粘蛋白純品的效率及產(chǎn)量均較低，極大的限制了貽貝粘蛋白的應用。

4、其二、目前市場上主流的貽貝粘蛋白重組產(chǎn)品多為非酪氨酸酶活化產(chǎn)品，不具有天然活性?；蚺c天然貽貝粘蛋白同源性極差，不能完全實現(xiàn)天然貽貝粘蛋白的功能。

5、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的在于提供一種重組貽貝粘蛋白，以解決上述問題。

2、本發(fā)明的第二目的在于提供一種核酸分子。

3、本發(fā)明的第三目的在于提供一種載體。

4、本發(fā)明的第四目的在于提供一種細胞。

5、本發(fā)明的第五目的在于提供一種高dopa含量的重組貽貝粘蛋白的制備方法。

6、為了實現(xiàn)以上目的，特采用以下技術方案：

7、第一方面，本發(fā)明提供了一種重組貽貝粘蛋白，所述重組貽貝粘蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

8、第二方面，本發(fā)明提供了一種核酸分子，所述核酸分子編碼所述的重組貽貝粘蛋白。

9、作為進一步技術方案，所述核酸分子的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

10、第三方面，本發(fā)明提供了一種載體，所述載體攜帶所述的核酸分子。

11、作為進一步技術方案，所述載體包括ppicza載體。

12、第四方面，本發(fā)明提供了一種細胞，所述細胞攜帶所述的核酸分子，或者含有所述的載體，或者表達所述的重組貽貝粘蛋白。

13、作為進一步技術方案，所述細胞包括畢赤酵母。

14、第五方面，本發(fā)明提供了一種高dopa含量的重組貽貝粘蛋白的制備方法，包括：利用所述的細胞表達所述重組貽貝粘蛋白，然后經(jīng)分離純化和酪氨酸酶活化后制備得到所述重組貽貝粘蛋白。

15、作為進一步技術方案，所述活化為采用活化液處理；

16、所述活化液包括緩沖液，所述緩沖液中包括濃度為20mm的硼酸鈉、濃度為25mm的抗壞血酸，以及酪氨酸酶；

17、所述緩沖液包括pbs緩沖液，ph為6-7。

18、作為進一步技術方案，所述酪氨酸酶和重組貽貝粘蛋白的質(zhì)量比為1：(1600-2400)；

19、所述活化的時間為1-3h。

20、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

21、本發(fā)明提供的重組貽貝粘蛋白，與天然形式存在的貽貝粘蛋白(mfp)具有高度一致性，序列同源性高達90％以上。該重組貽貝粘蛋白經(jīng)酪氨酸酶活化后，dopa含量在3％以上(dopa含量越高，重組貽貝粘蛋白的價值越高)，具有天然活性，有助于從根源上解決對貽貝的屠殺現(xiàn)象，保護生物多樣性。

技術特征：

1.一種重組貽貝粘蛋白，其特征在于，所述重組貽貝粘蛋白的氨基酸序列如seq?idno.1所示。

2.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權利要求1所述的重組貽貝粘蛋白。

3.根據(jù)權利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如seq?idno.2所示。

4.一種載體，其特征在于，所述載體攜帶權利要求2或3所述的核酸分子。

5.根據(jù)權利要求4所述的載體，其特征在于，所述載體包括ppicza載體。

6.一種細胞，其特征在于，所述細胞攜帶權利要求2或3所述的核酸分子，或者含有權利要求4或5所述的載體，或者表達權利要求1所述的重組貽貝粘蛋白。

7.根據(jù)權利要求6所述的細胞，其特征在于，所述細胞包括畢赤酵母。

8.一種高dopa含量的重組貽貝粘蛋白的制備方法，其特征在于，包括：利用權利要求6或7所述的細胞表達所述重組貽貝粘蛋白，然后經(jīng)分離純化和酪氨酸酶活化后制備得到所述重組貽貝粘蛋白。

9.根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述活化為采用活化液處理；

10.根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述酪氨酸酶和重組貽貝粘蛋白的質(zhì)量比為1：(1600-2400)；

技術總結(jié)
本發(fā)明提供了一種高DOPA含量的重組貽貝粘蛋白及其制備方法，涉及生物技術領域。本發(fā)明提供的重組貽貝粘蛋白，與天然形式存在的貽貝粘蛋白(mfp)具有高度一致性，序列同源性高達90％以上。該重組貽貝粘蛋白經(jīng)酪氨酸酶活化后，DOPA含量在3％以上，具有天然活性，有助于從根源上解決對貽貝的屠殺現(xiàn)象，保護生物多樣性。

技術研發(fā)人員：安海謙,朱璐宇,車廣勝,沈雙紅
受保護的技術使用者：江蘇金普諾安生物科技股份有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/10