本發(fā)明涉及分子診斷領(lǐng)域，特別是涉及一種胃腸癌相關(guān)基因變異檢測(cè)用的多重pcr引物組及其用途。

背景技術(shù)：

1、胃腸癌是世界上最常見的一類惡性腫瘤，由于消化道腫瘤早期癥狀多數(shù)都不明顯，故發(fā)病多較隱匿，多數(shù)病人出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)已屬于中晚期，且多伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此患者生存率較低。

2、循環(huán)腫瘤細(xì)胞為從原發(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移灶脫落，進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。它們的存在是腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要標(biāo)志，因此通過(guò)檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞對(duì)于胃腸癌的早期診斷、治療效果評(píng)估及預(yù)后判斷具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種胃腸癌相關(guān)基因變異檢測(cè)用的多重pcr引物組及其用途，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種肺部腫瘤相關(guān)基因變異檢測(cè)用的多重pcr引物組，所述多重pcr引物組為檢測(cè)如下任意多種基因的引物組：apc基因、braf基因、cdh1基因、ctnnb1基因、kras基因、nras基因、pik3ca基因或tp53基因。

3、優(yōu)選的，所述多重pcr引物組包含核苷酸序列如seq?id?no.1-70所示的引物對(duì)。

4、本發(fā)明還提供前述多重pcr引物組在制備循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)產(chǎn)品中的用途。

5、本發(fā)明還提供一種循環(huán)腫瘤細(xì)胞中胃腸癌相關(guān)基因的檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒包含前述多重pcr引物組。

6、本發(fā)明還提供一種非疾病診斷目的的循環(huán)腫瘤細(xì)胞中胃腸癌相關(guān)基因變異的檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法包含如下步驟中的一種或多種：

7、1）裂解待測(cè)樣本，擴(kuò)增待測(cè)樣本的全基因組；

8、2）用前述多重pcr引物組或前述檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增步驟1）中全基因組中的特定基因，建立測(cè)序庫(kù)；

9、3）用步驟2）中測(cè)序庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，獲得步驟2）特定基因的核苷酸序列，根據(jù)所述核苷酸序列與標(biāo)準(zhǔn)庫(kù)的序列信息的比對(duì)結(jié)果，確定循環(huán)腫瘤細(xì)胞中是否存在基因變異的結(jié)果。

10、如上所述，本發(fā)明的一種胃腸癌相關(guān)基因變異檢測(cè)用的多重pcr引物組及其用途，具有以下有益效果：通過(guò)對(duì)血液中的異常細(xì)胞進(jìn)行基因檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞中含有的變異，進(jìn)而輔助診斷胃腸癌，也可用于對(duì)胃腸癌術(shù)后的患者提供復(fù)發(fā)的早期預(yù)警，一定程度上可以填補(bǔ)現(xiàn)有的未被滿足的醫(yī)療需求，同時(shí)簡(jiǎn)化了高通量測(cè)序傳統(tǒng)文庫(kù)構(gòu)建的復(fù)雜流程，具有較大的臨床和經(jīng)濟(jì)意義。

技術(shù)特征：

1.一種胃腸癌相關(guān)基因變異檢測(cè)用的多重pcr引物組，其特征在于，所述多重pcr引物組為檢測(cè)如下多種基因的引物組：apc基因、braf基因、cdh1基因、ctnnb1基因、kras基因、nras基因、pik3ca基因和tp53基因；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重pcr引物組，其特征在于，所述引物對(duì)還包含核苷酸序列如seq?id?no.79或seq?id?no.80所示的接頭序列片段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重pcr引物組，其特征在于，以同時(shí)擴(kuò)增apc基因的?9號(hào)外顯子和chd1基因的反應(yīng)體系為基準(zhǔn)，擴(kuò)增chd1基因引物的工作濃度為擴(kuò)增apc基因的?9號(hào)外顯子引物的工作濃度的0.4-0.6倍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重pcr引物組，其特征在于，所述多重pcr引物組包含建庫(kù)引物，所述建庫(kù)引物包含核苷酸序列如seq?id?no.81-92任一所示的核酸分子。

5.權(quán)利要求1-4任一所述的多重pcr引物組在制備循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)產(chǎn)品中的用途。

6.一種循環(huán)腫瘤細(xì)胞中胃腸癌相關(guān)基因的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒包含如權(quán)利要求1-4任一所述的多重pcr引物組。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒還包含pcr反應(yīng)試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述pcr反應(yīng)試劑包含括pcr緩沖液、dna聚合酶、鎂離子、鈣離子、dntps、表面活性劑或防腐劑中的一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及分子診斷領(lǐng)域，特別是涉及一種胃腸癌相關(guān)基因變異檢測(cè)用的多重PCR引物組及其用途。本發(fā)明提供的引物組為檢測(cè)如下基因的引物組：APC基因、BRAF基因、CDH1基因、CTNNB1基因、KRAS基因、NRAS基因、PIK3CA基因或TP53基因。本發(fā)明通過(guò)對(duì)血液中的異常細(xì)胞進(jìn)行基因檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞中含有的變異，進(jìn)而輔助診斷胃腸癌，也可用于對(duì)胃腸癌術(shù)后的患者提供復(fù)發(fā)的早期預(yù)警，一定程度上可以填補(bǔ)現(xiàn)有的未被滿足的醫(yī)療需求，同時(shí)簡(jiǎn)化了高通量測(cè)序傳統(tǒng)文庫(kù)構(gòu)建的復(fù)雜流程，具有較大的臨床和經(jīng)濟(jì)意義。

技術(shù)研發(fā)人員：楊成鎬,孫建龍,陳光輝,丁波,王建香
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海復(fù)迪生生命科學(xué)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10