本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種芋螺毒素來(lái)源抗凝血多肽cb-13及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、心腦血管疾病是與血管病變有關(guān)的心腦疾病的總稱，主要包括心臟衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、心律失常、高血壓和腦卒中等，盡管藥物和器械技術(shù)近些年來(lái)有所改進(jìn)，但是心血管疾病仍舊是全球主要的非傳染性疾病死亡的主要原因，遠(yuǎn)高于癌癥和其他疾病。研究預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物具有巨大的社會(huì)需求和重要的社會(huì)意義，心腦血管疾病是由于心腦血管中產(chǎn)生血栓引發(fā)的血管狹窄與閉塞，導(dǎo)致的心臟和腦部發(fā)生缺血和梗塞而引發(fā)機(jī)能障礙的疾病，在正常的機(jī)體內(nèi)，凝血途徑包括凝血和抗凝兩方面，促凝因子和抗凝因子之間的相互作用維持著凝血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡，從而維持了機(jī)體內(nèi)血液的正常流動(dòng)，在正常的生理環(huán)境下，抗凝機(jī)制占據(jù)微弱的優(yōu)勢(shì)。當(dāng)血管損傷后，出血部位迅速誘導(dǎo)形成一個(gè)止血板(大量的血小板和纖維蛋白)，最終阻止出血部位的持續(xù)流血，而血栓的形成與止血板相似，因?yàn)檠装Y等因素導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)生理環(huán)境的改變，血漿中促凝因子表達(dá)水平上升，進(jìn)而出現(xiàn)高凝傾向，形成一個(gè)傾向于血栓形成的狀態(tài)，最終通過(guò)凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致大量凝血酶的產(chǎn)生，凝血酶將體內(nèi)循環(huán)的可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不可溶纖維蛋白，從而導(dǎo)致血栓的形成。

2、纖溶是止血的一個(gè)重要生理組成部分，其功能是限制凝塊的形成。纖溶調(diào)節(jié)止血過(guò)程中纖維蛋白的形成以及血管阻塞的程度。在組織和血管損傷后，多種止血機(jī)制被啟動(dòng)，導(dǎo)致凝血酶生成、血小板粘附、血小板交聯(lián)和纖維蛋白形成。作為限制凝塊形成的止血反應(yīng)的一部分，啟動(dòng)纖維蛋白溶解。凝血激活的最終產(chǎn)物纖維蛋白，是組織型纖溶酶原激活劑激活纖溶酶原的輔因子。纖溶酶是纖維蛋白溶解中的酶促因子，裂解纖維蛋白，但作為底物特異性的混雜酶，當(dāng)其濃度超過(guò)局部和全身抑制劑(最顯著的是α2-抗纖溶酶)時(shí)，它也可以介導(dǎo)多種止血和炎癥成分的蛋白水解激活。當(dāng)調(diào)節(jié)時(shí)，纖維蛋白溶解是一種保護(hù)性的生理反應(yīng)，適當(dāng)?shù)叵拗屏搜龎K的大小。纖維蛋白溶解還通過(guò)除纖維蛋白原和纖維蛋白裂解外的其他機(jī)制導(dǎo)致凝血功能障礙，而且還切割血小板上的糖蛋白ib和iib/iiia受體，從而減少血小板的粘附和聚集。

3、芋螺毒素或芋螺肽是由海洋軟體動(dòng)物芋螺分泌的小肽，通常包含10-50個(gè)氨基酸和1-5個(gè)二硫鍵。由于芋螺毒素對(duì)靶向離子通道或神經(jīng)遞質(zhì)受體的高效性和特異性，因此芋螺毒素是很有前途的神經(jīng)藥理學(xué)工具和候選藥物。但其關(guān)于抗凝血的作用還不清楚。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種芋螺毒素來(lái)源抗凝血多肽cb-13及其應(yīng)用，所述抗凝血多肽cb-13具有顯著的纖溶活性和抗凝血活性。

2、本發(fā)明提供了一種抗凝血多肽cb-13，包括以下至少一種多肽：

3、(1).氨基酸序列如seq?id?no.1所示的多肽；

4、(2).seq?id?no.1所示的多肽中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基經(jīng)化學(xué)修飾后形成的多肽；

5、(3).(1)所述多肽或(2)所述多肽的鹽形式。

6、本發(fā)明還提供了編碼上述抗凝血多肽cb-13的基因。

7、優(yōu)選的，所述基因的核苷酸序列包括seq?id?no.2。

8、本發(fā)明還提供了上述抗凝血多肽cb-13或上述基因在制備抗凝血藥物中的應(yīng)用。

9、優(yōu)選的，所述抗凝血藥物包括將活性成分直接或與藥用載體組合制成的制劑；

10、所述活性成分包括：抗凝血多肽cb-13或所述抗凝血多肽cb-13的衍生物或包含所述抗凝血多肽cb-13的組合物。

11、本發(fā)明還提供了一種抗凝血藥物，活性成分包括上述抗凝血多肽cb-13和藥學(xué)上可接受的輔料。

12、本發(fā)明還提供了上述抗凝血多肽cb-13或上述基因在制備預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物中的應(yīng)用。

13、優(yōu)選的，所述預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物包括將活性成分直接或與藥用載體組合制成的制劑；

14、所述活性成分包括：抗凝血多肽cb-13或所述抗凝血多肽cb-13的衍生物或包含所述抗凝血多肽cb-13的組合物。

15、本發(fā)明還提供了一種預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物，活性成分包括上述抗凝血多肽cb-13和藥學(xué)上可接受的輔料。

16、優(yōu)選的，所述抗凝血多肽cb-13的工作濃度不高于400μm。

17、有益效果：本發(fā)明提供了一種抗凝血多肽cb-13，具體涉及一種芋螺毒素來(lái)源的多肽，由14個(gè)氨基酸組成，序列如seq?id?no.1所示：srakmqnhklfklt。本發(fā)明所述抗凝血多肽cb-13在濃度400μm及以下時(shí)不具有溶血活性，且對(duì)hek-293t細(xì)胞和小鼠脾細(xì)胞不具有細(xì)胞毒性。本發(fā)明所述抗凝血多肽cb-13在100μm濃度下具有顯著延長(zhǎng)血漿復(fù)鈣凝血時(shí)間的作用，對(duì)于血漿復(fù)鈣凝血時(shí)間具有抑制作用；給藥cb-13可顯著延長(zhǎng)aptt凝血時(shí)間，具有抗凝血作用，并且cb-13對(duì)出血影響小；cb-13對(duì)plasmin和upa有明顯的促進(jìn)效果。同時(shí)還利用動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了所述抗凝血多肽cb-13較肝素鈉具有更小的出血風(fēng)險(xiǎn)，cb-13給藥后能抑制鼠尾血栓和頸動(dòng)脈血栓的形成，即本發(fā)明所述抗凝血多肽cb-13具有體內(nèi)外纖溶作用和抗凝血作用，且具有較小的出血風(fēng)險(xiǎn)，可用作抗血栓或溶血栓藥物。

技術(shù)特征：

1.一種抗凝血多肽cb-13，其特征在于，包括以下至少一種多肽：

2.編碼權(quán)利要求1所述抗凝血多肽cb-13的基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列包括seq?id?no.2。

4.權(quán)利要求1所述抗凝血多肽cb-13或權(quán)利要求2或3所述基因在制備抗凝血藥物中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述應(yīng)用，其特征在于，所述抗凝血藥物包括將活性成分直接或與藥用載體組合制成的制劑；

6.一種抗凝血藥物，其特征在于，活性成分包括權(quán)利要求1所述抗凝血多肽cb-13和藥學(xué)上可接受的輔料。

7.權(quán)利要求1所述抗凝血多肽cb-13或權(quán)利要求2或3所述基因在制備預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，所述預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物包括將活性成分直接或與藥用載體組合制成的制劑；

9.一種預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物，其特征在于，活性成分包括權(quán)利要求1所述抗凝血多肽cb-13和藥學(xué)上可接受的輔料。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述抗凝血藥物或權(quán)利要求9所述藥物，其特征在于，所述抗凝血多肽cb-13的工作濃度不高于400μm。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種芋螺毒素來(lái)源抗凝血多肽Cb?13及其應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種抗凝血多肽Cb?13，氨基酸序列包括SEQ?IDNo.1。本發(fā)明還提供了所述抗凝血多肽Cb?13的編碼基因，并提供了所述抗凝血多肽Cb?13在濃度400μM及以下時(shí)不具有溶血活性，且不具有細(xì)胞毒性。本發(fā)明所述抗凝血多肽Cb?13對(duì)于血漿復(fù)鈣凝血時(shí)間具有延長(zhǎng)作用，具有抗凝血作用，并且對(duì)出血影響小，還對(duì)plasmin和uPa有明顯的促進(jìn)效果。同時(shí)還證實(shí)了所述抗凝血多肽Cb?13能抑制血栓的形成，即本發(fā)明所述抗凝血多肽Cb?13具有體內(nèi)外纖溶作用和抗凝血作用，且具有較小的出血風(fēng)險(xiǎn)，可用作抗血栓或溶血栓藥物。

技術(shù)研發(fā)人員：張保衛(wèi),李夢(mèng)如,賴仞,王愛麗
受保護(hù)的技術(shù)使用者：安徽大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17