本發(fā)明屬于生物，具體涉及濃縮血小板制品、生產(chǎn)工藝、血小板保存液及儲(chǔ)存方法。

背景技術(shù)：

1、血小板(blood?platelet，plt)是血液主成份之一，主要功能是凝血和止血，修補(bǔ)破損的血管。plt是巨核細(xì)胞成熟后脫顆粒釋放到血液中的血細(xì)胞，形狀多樣不規(guī)則，直徑1～4μm到7～8μm不等，且個(gè)體差異很大(5～12立方微米)，無(wú)細(xì)胞核。plt在血液中是與其他細(xì)胞混合存在的，常成群分布在紅細(xì)胞之間。根據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求》(gb?18469)中對(duì)濃縮血小板質(zhì)量要求紅細(xì)胞混入量必須≤2.0×109個(gè)(來(lái)源于400ml全血)，傳統(tǒng)制備濃縮血小板為了達(dá)到要求，會(huì)降低血小板收率，因此研究高純度、高收率分離制備血小板工藝非常必要。

2、目前國(guó)內(nèi)絕大部分血站使用的濃縮血小板制品是用血漿保存，血漿中含有抗原、抗體、凝血酶等異體蛋白。在輸血過(guò)程中常會(huì)引起患者引發(fā)發(fā)熱、過(guò)敏等變態(tài)反應(yīng)，因此，進(jìn)一步研究可替代血漿使用的血小板保存液是極其必要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本申請(qǐng)首先提供一種濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，制備得到的濃縮血小板純度高、收率好、穩(wěn)定性強(qiáng)、保存時(shí)間長(zhǎng)。本申請(qǐng)另一方面提供了用于保存濃縮血小板的保存液和血小板的儲(chǔ)存方法，可以長(zhǎng)期維持血小板保存的穩(wěn)定性，提高保存期間血小板質(zhì)量和減輕血小板保存期損傷。

2、為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

3、本申請(qǐng)第一方面提供一種濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，包括：

4、s1：取新鮮抗凝全血并振搖解聚；

5、s2：對(duì)振搖解聚后的全血進(jìn)行輕離心，得到上層富血小板血漿ⅰ和下層血細(xì)胞??；

6、s3：對(duì)所述下層血細(xì)胞ⅰ進(jìn)行梯度離心，得到含白膜層、血漿及少量紅細(xì)胞的上層及下層紅細(xì)胞ⅱ；

7、s4：對(duì)所述含白膜層、血漿及少量紅細(xì)胞的上層進(jìn)行梯度離心，得到富血小板血漿ⅱ和和下層紅細(xì)胞ⅲ；

8、s5：將所述富血小板血漿ⅰ和富血小板血漿ⅱ合并后得到混合富血小板血漿??；

9、s6：對(duì)所述混合富血小板血漿ⅰ進(jìn)行離心，得到上層混合富血小板血漿ⅱ和下層紅細(xì)胞ⅳ；

10、s7：對(duì)所述上層混合富血小板血漿ⅱ進(jìn)行離心，得到上層血漿和下層血小板ⅴ；

11、s8：向血小板v加入一定量血漿或血小板保存液后，即得濃縮血小板制品。

12、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述新鮮抗凝全血是從人或動(dòng)物采集新鮮血液并加入抗凝劑制得。

13、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述振搖解聚的條件為20-24℃，時(shí)間20-40min。

14、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述步驟s2中輕離心的具體條件為：150-250g，15-20min；所述步驟s3中梯度離心的條件為：440-470g，6-8min；2400-2700g，4-6min；所述步驟s4中梯度離心的條件為：260-320g，5-7min；450-500g，5-7min。

15、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述步驟s6中離心條件為：350-430g，5-7min；所述步驟s7中離心條件為：2250-2750g，15-20min。

16、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述血小板保存液的成分和濃度為：氯化鈉75-85mmol/l、氯化鉀4-5mmol/l、氯化鎂1-3mmol/l、醋酸鈉20-24mmol/l、氯化鈣1-2mmol/l、檸檬酸3-5mmol/l、碳酸氫鈉43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、檸檬酸鈉9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l。

17、本申請(qǐng)第二方面提供以上任一所述的生產(chǎn)工藝制備得到的濃縮血小板制品。

18、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述的濃縮血小板制品的血小板濃度為：800-1400e9/l。

19、本申請(qǐng)第三方面提供一種血小板保存液，所述血小板保存液的成分和濃度為：氯化鈉75-85mmol/l、氯化鉀4-5mmol/l、氯化鎂1-3mmol/l、醋酸鈉20-24mmol/l、氯化鈣1-2mmol/l、檸檬酸3-5mmol/l、碳酸氫鈉43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、檸檬酸鈉9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l。所述血小板保存液的ph值為7.2～7.4。

20、本申請(qǐng)第四方面提供一種血小板的儲(chǔ)存方法，包括：將一定量的血小板與一定體積的所述血小板保存液混合，保存于22±2℃的恒溫振蕩箱中。

21、在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述血小板的儲(chǔ)存方法還包括將所述血小板儲(chǔ)存3-7天。

22、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

23、本發(fā)明提供一種濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝中分離提取血小板的方法不僅可以提高收率，還可以提高純度，得到的血小板保存在本發(fā)明所制備的血小板保存液中可以長(zhǎng)期維持血小板保存的穩(wěn)定性，提高保存期間血小板質(zhì)量和減輕保存期損傷；

24、本發(fā)明提供了一種新型血小板保存液，能有效維持血小板穩(wěn)定性，提高血小板質(zhì)量和減輕保存期損傷，可以替代傳統(tǒng)血漿保存血小板。血小板保存液中含有常作為血漿替代品的海藻糖，對(duì)人體安全無(wú)害，可被機(jī)體吸收和代謝。通過(guò)該保存液可以減少輸血過(guò)程中不良反應(yīng)發(fā)生幾率，提高濃縮血小板活性和保存時(shí)間；

25、本發(fā)明提供的分離提取血小板的工藝得到的濃縮血小板制品，其純度高、收率好、穩(wěn)定性強(qiáng)、保存時(shí)間長(zhǎng)，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述新鮮抗凝全血是從人或動(dòng)物采集新鮮血液并加入抗凝劑制得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述振搖解聚的溫度條件為20-24℃，時(shí)間為20-40min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述步驟s2中輕離心的具體條件為：150-250g，15-20min；所述步驟s3中梯度離心的條件為：440-470g，6-8min；2400-2700g，4-6min；所述步驟s4中梯度離心的條件為：260-320g，5-7min；450-500g，5-7min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述步驟s6中離心條件為：350-430g，5-7min；所述步驟s7中離心條件為：2250-2750g，15-20min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濃縮血小板制品生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述血小板保存液的成分和濃度為：氯化鈉75-85mmol/l、氯化鉀4-5mmol/l、氯化鎂1-3mmol/l、醋酸鈉20-24mmol/l、氯化鈣1-2mmol/l、檸檬酸3-5mmol/l、碳酸氫鈉43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、檸檬酸鈉9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l。

7.權(quán)利要求1-6任一所述的生產(chǎn)工藝制備得到的濃縮血小板制品，所述的濃縮血小板制品的血小板濃度為：800-1400e9/l。

8.一種血小板保存液，其特征在于，所述血小板保存液的成分和濃度為：氯化鈉75-85mmol/l、氯化鉀4-5mmol/l、氯化鎂1-3mmol/l、醋酸鈉20-24mmol/l、氯化鈣1-2mmol/l、檸檬酸3-5mmol/l、碳酸氫鈉43-46mmol/l、葡萄糖12-16mmol/l、檸檬酸鈉9-11mmol/l、海藻糖5-15mmol/l，所述血小板保存液的ph值為7.2～7.4。

9.一種血小板的儲(chǔ)存方法，其特征在于，包括：將一定量的血小板與一定體積的血小板保存液混合，保存于22±2℃的恒溫振蕩箱中，所述血小板保存液為權(quán)利要求8所述的血小板保存液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的血小板的儲(chǔ)存方法，其特征在于，還包括將所述血小板儲(chǔ)存3-7天。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)公開(kāi)了濃縮血小板制品、生產(chǎn)工藝、血小板保存液及儲(chǔ)存方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。生產(chǎn)工藝包括：取新鮮抗凝全血并振搖解聚；對(duì)振搖解聚后的新鮮抗凝全血進(jìn)行輕離心，得到上層富血小板血漿Ⅰ和下層血細(xì)胞Ⅰ；對(duì)下層血細(xì)胞Ⅰ進(jìn)行梯度離心，得到含白膜層、血漿及少量紅細(xì)胞的上層及下層紅細(xì)胞Ⅱ；對(duì)上層進(jìn)行梯度離心，得到富血小板血漿Ⅱ和和下層紅細(xì)胞Ⅲ；將富血小板血漿Ⅰ和富血小板血漿Ⅱ合并后得到混合富血小板血漿Ⅰ；對(duì)混合富血小板血漿Ⅰ進(jìn)行離心，得到上層混合富血小板血漿Ⅱ和下層紅細(xì)胞Ⅳ；對(duì)上層混合富血小板血漿Ⅱ進(jìn)行離心，得到上層血漿和下層血小板Ⅴ；向血小板V加入一定量血漿或血小板保存液后，即得濃縮血小板制品。

技術(shù)研發(fā)人員：劉傳夢(mèng),徐箭,聶代邦
受保護(hù)的技術(shù)使用者：創(chuàng)觀（蘇州）生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10