本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，一種螺甾烷型甾體生物堿的制備方法及抗腸炎的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、炎癥性腸病(inflammatorybowel?disease，ibd)，是一種主要累及胃腸道的非特異性、慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性疾病，主要癥狀為腹痛抽筋、直腸疼痛、直腸出血，可能出現(xiàn)中毒性巨結(jié)腸、腸穿孔、重度脫水、癌變等嚴(yán)重并發(fā)癥。ibd主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，uc)和克羅恩病(crohn?disease，cd)。ibd的發(fā)病率在西方國(guó)家趨于穩(wěn)定，但是在新興工業(yè)化國(guó)家處于快速增長(zhǎng)階段。研究表明遺傳基因、環(huán)境、免疫系統(tǒng)、腸道菌群之間的改變是導(dǎo)致ibd發(fā)展的主要因素。目前ibd的主要治療手段是藥物治療，包括抗生素、免疫調(diào)節(jié)劑、氨基水楊酸鹽、糖皮質(zhì)激素、生物制劑等，但長(zhǎng)期服用極易產(chǎn)生耐藥性及嚴(yán)重不良反應(yīng)，包括肝毒性以及骨髓毒性、腎毒性、骨壞死、白內(nèi)障、糖尿病、高血壓等。目前國(guó)內(nèi)已開展中西醫(yī)結(jié)合的治療方法，西醫(yī)以快速控制疾病發(fā)展為目標(biāo)，中醫(yī)以后續(xù)鞏固為主。天然產(chǎn)物不僅具有良好的抗炎效果，還具有較高的安全性、副作用少等優(yōu)點(diǎn)。

2、螺甾烷型生物堿(spirosolane?alkaloid)廣泛存在于茄科植物中，主要包含澳洲茄胺(solasodine)類，西紅柿烯胺(tomatidine)類，西紅柿登醇(tomatidenol)類。據(jù)報(bào)道螺甾烷型生物堿類物質(zhì)在體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出強(qiáng)抗腫瘤及抗炎活性，可降低炎癥模型il-1β、il-6等促炎細(xì)胞因子的含量，抑制no的產(chǎn)生。前期研究表明新鮮龍葵果汁可緩解潰瘍性結(jié)腸炎病癥，且其主要成分為螺甾烷型生物堿類物質(zhì)，但其部分化合物結(jié)構(gòu)及抗腸炎活性并未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于闡明一種螺甾烷型甾體生物堿的制備方法及抗腸炎的應(yīng)用，為炎癥反應(yīng)提供一種潛在安全藥物。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種螺甾烷型甾體生物堿的制備方法及抗腸炎的應(yīng)用。

4、本技術(shù)方案的原理以及優(yōu)點(diǎn)在于：

5、發(fā)明人進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證探究了螺甾烷型甾體生物堿propanediolsolaoiate的制備方法及抗腸炎的應(yīng)用，具體如下：

6、(1)螺甾烷型甾體生物堿propanediol?solaoiate的制備方法：通過(guò)ods反相柱及凝膠柱分離純化新鮮龍葵果汁，通過(guò)顯色反應(yīng)、高分辨質(zhì)譜、1h?nmr、13c?nmr確定得到一種螺甾烷型甾體生物堿化合物。

7、(2)一種螺甾烷型甾體生物堿propanediol?solaoiate的結(jié)構(gòu)鑒定：通過(guò)顯色反應(yīng)、質(zhì)譜、1h?nmr、13c?nmr、hsqc、hmbc、1h-1h?cosy、roesy對(duì)螺甾烷型甾體生物堿的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。

8、(3)一種螺甾烷型甾體生物堿propanediol?solaoiate體外抗炎活性的評(píng)價(jià)：使用lps/ifn-γ誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞raw264.7極化，通過(guò)dcfh-da探針及elisa試劑盒檢測(cè)此螺甾烷型甾體生物堿對(duì)巨噬細(xì)胞ros和il-1β分泌的影響。

9、(4)一種螺甾烷型甾體生物堿propanediol?solaoiate對(duì)dss構(gòu)建的ibd模型小鼠的影響：首先，統(tǒng)計(jì)小鼠的體重變化和生存期。其次，比較各組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度、脾臟指數(shù)及結(jié)腸組織形態(tài)。最后，檢測(cè)各組小鼠血清的炎癥因子含量。

10、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)方案具有以下有益效果。

11、本發(fā)明首次報(bào)道了一種螺甾烷型甾體生物propanediol?solaoiate結(jié)構(gòu)及制備方法。另外，本發(fā)明首次報(bào)道了此螺甾烷型甾體生物堿可提高葡聚糖硫酸鈉鹽構(gòu)建潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的生存狀態(tài)，緩解結(jié)腸長(zhǎng)度變短及腸道壞死出血的情況，下調(diào)血清中促炎因子il-1β、tnf-α的含量。上述發(fā)現(xiàn)可提供一種腸炎的治療藥物，為進(jìn)一步研究潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病提供了新的思路；同時(shí)，此螺甾烷型甾體生物堿propanediol?solaoiate可應(yīng)用于新型的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的藥物篩選和測(cè)試中，為開發(fā)出新型的治療腸炎藥物提供了指導(dǎo)。

技術(shù)特征：

1.化合物在制備抗腸炎產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述化合物制備方法如下：以新鮮龍葵果汁為原料，使用ods-aq-hg反相柱及凝膠柱分離純化得到。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：命名為(1s,2)-propanediol(3β，12β，22α，25r)-3，12-dihydroxy-siprosol-5-en-27-ate-12-o-beta-d-glucopyranosyl-(1-2)-[o-alpha-l-rhamnopyranosy?l-(1-3)]-o-alpha-l-mannopyranosyl，簡(jiǎn)稱propanediolsolaoiate。結(jié)構(gòu)如下

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：化合物propanediol?solaoiate對(duì)極化后巨噬細(xì)胞促炎物質(zhì)的分泌具有抑制作用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：化合物propanediol?solaoiate可預(yù)防或/和治療腸炎。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：化合物propanediol?solaoiate的受試者包括人、貓、狗、豬、馬或雞。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：巨噬細(xì)胞為raw264.7細(xì)胞株。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：促炎物質(zhì)包括ros、il-1β等。

8.包含一種或多種權(quán)利要求2中所述化合物或其可藥用的鹽與可藥用載體的藥物。

9.如權(quán)利要求2及8所述的用途，其中所述藥物是以口服方式給藥：片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、泡騰片劑、舌下片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微膠囊劑、微囊劑、微球劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、散劑、口服液、混懸液、溶液以及緩釋或控釋制劑。

10.如權(quán)利要求2及8所述的用途，其中所述藥物是以吸入方式給藥：氣霧劑以及緩釋或控釋制劑。

11.如權(quán)利要求2及8所述的用途，其中所述藥物是以靜脈方式給藥：注射劑、注射乳劑、凍干粉針以及緩釋或控釋制劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一個(gè)新的螺甾烷型甾體生物堿的制備方法和應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)反相柱及凝膠柱對(duì)新鮮龍葵果汁化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，采用現(xiàn)代波譜學(xué)數(shù)據(jù)分析表明其為一個(gè)新的化合物，分子式為C<subgt;48</subgt;H<subgt;77</subgt;NO<subgt;20</subgt;，命名為(1S,2)?propanediol(3β，12β，22α，25R)?3，12?dihydroxy?siprosol?5?en?27?ate?12?O?beta?D?glucopyranosyl?(1?2)?[O?alpha?L?rhamnopyranosyl?(1?3)]?O?alpha?L?mannopyranosyl，簡(jiǎn)稱propanediol?solaoiate。該化合物可明顯下調(diào)極化后巨噬細(xì)胞RAW264.7中ROS及促炎因子IL?1β的含量，可提高葡聚糖硫酸鈉鹽構(gòu)建潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的生存狀態(tài)，緩解結(jié)腸長(zhǎng)度變短、腸道壞死出血、結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞及促炎因子分泌增加的情況。該化合物可用于抗腸炎的應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員：趙文華,邢雯,王麗雪,師軍鳳,李羽鏑,羅莎莎,張懿川
受保護(hù)的技術(shù)使用者：首都醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10