本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，具體涉及一種膠原蛋白三肽的制備方法及所得產(chǎn)品。

背景技術(shù)：

1、膠原蛋白是一種細(xì)胞外蛋白質(zhì)，它是由3條肽鏈擰成螺旋形的纖維狀蛋白質(zhì)，膠原蛋白是動(dòng)物結(jié)締組織中的主要成分，也是哺乳動(dòng)物體內(nèi)含量最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質(zhì)總量的25%～30%，某些生物體甚至高達(dá)80%以上。膠原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，在食品、醫(yī)藥、組織工程、化妝品等領(lǐng)域獲得廣泛的應(yīng)用。

2、膠原蛋白富含甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸等氨基酸。膠原蛋白分子包含一個(gè)高度重復(fù)的甘氨酸-x-y序列。x和y是任意的，但通常被脯氨酸、羥脯氨酸和丙氨酸占據(jù)。這種成分使膠原蛋白更能抵抗一般蛋白酶的降解。

3、膠原三肽（ctp）是一種高度純化、非抗原、低過(guò)敏性膠原蛋白部分，含有高濃度的含有甘氨酸-x-y序列的三肽。一些研究表明，小的膠原蛋白肽，包括ctp，具有生物學(xué)效應(yīng)，如激活人體產(chǎn)生新的膠原蛋白和透明質(zhì)酸的能力，預(yù)防動(dòng)脈粥樣樣硬化、強(qiáng)健骨骼和肌腱等。牛皮中膠原蛋白含量豐富，價(jià)格低廉，常用來(lái)作為提取膠原蛋白的原料。但是目前現(xiàn)有的關(guān)于膠原蛋白三肽的提取方法較為冗雜且不能實(shí)現(xiàn)祛除異味，純度不高，不能實(shí)現(xiàn)膠原蛋白三肽的多層次應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種膠原蛋白三肽的制備方法。本發(fā)明通過(guò)二次酶解，過(guò)程中不需要多次調(diào)節(jié)ph值，酶解產(chǎn)物分子量小且集中，酶解產(chǎn)物游離氨基酸含量低，制得的膠原蛋白三肽粉末無(wú)異味，得率高，水復(fù)溶性好。

2、本發(fā)明還提供了利用上述制備方法制備得到的膠原蛋白三肽。

3、本發(fā)明的另一目的為提供了上述膠原蛋白三肽的應(yīng)用。

4、本發(fā)明為了實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案為：

5、本發(fā)明提供了一種膠原蛋白三肽的制備方法，包括以下步驟：

6、（1）預(yù)處理牛皮：取新鮮牛皮，脫毛去除脂肪后，切成小塊，洗凈；將洗凈后的牛皮顆粒加入堿溶液中，進(jìn)行堿處理，水洗后得預(yù)處理牛皮；

7、（2）變性牛皮：將預(yù)處理牛皮和處理液混合，保溫放置一段時(shí)間后煮沸，降溫后濾去殘?jiān)米冃耘Ｆぃ?/p>

8、（3）勻漿：將變性牛皮加入純化水，高壓均質(zhì)勻漿，得牛皮勻漿；

9、（4）第一次酶解：將牛皮勻漿中加入混合蛋白酶，酶解；滅酶，得一次酶解液；

10、（5）第二次酶解：以一次酶解液為底物，添加動(dòng)物蛋白水解酶，進(jìn)行水解；滅酶后得二次酶解液；

11、（6）過(guò)濾吸附除雜：?將二次酶解液冷卻至室溫后過(guò)濾，濾液中加入活性炭，放置一段時(shí)間后離心，得上清液；將上清液抽濾除雜，得膠原蛋白三肽溶液；；然后所得膠原三肽溶液以6000-9000rpm轉(zhuǎn)速離心10-15min，得上清液。上清液抽濾除雜，得到。

12、（7）真空冷凍干燥：將上清液進(jìn)行真空冷凍干燥，得到膠原蛋白三肽。

13、進(jìn)一步的，步驟（1）中，所述堿溶液的質(zhì)量體積濃度為3-6％；所述牛皮顆粒和堿溶液的質(zhì)量比為1:2-10；所述堿處理為3-5℃下攪拌12-24h。

14、進(jìn)一步的，步驟（2）中，所述預(yù)處理牛皮和處理液的質(zhì)量比為1:3-8；所述處理液通過(guò)以下原料制備而成：水?10份、葡萄糖0.3-0.5份；每100ml水中，加入乳酸鏈球菌菌液5ml；具體處理為：30-32℃下保溫處理50-60min后；煮沸20-40min；然后降溫至50-60℃，過(guò)濾。

15、進(jìn)一步的，步驟（3）中，所述變性牛皮和純化水的質(zhì)量比為1:3-5；所述高壓均質(zhì)勻漿為在20-50mpa壓力下，處理8-15min。

16、進(jìn)一步的，步驟（4）中，所述混合蛋白酶的加入量占變性牛皮質(zhì)量的0.1-0.25%；所述混合蛋白酶包括20-30%的胰酶和80%-70%的堿性蛋白酶；所述酶解為在55℃下酶解4h。

17、進(jìn)一步的，步驟（5）中，所述動(dòng)物蛋白水解酶的加入量占一次酶解液的0.2-0.5%；所述水解為在55℃下水解12-24h。

18、進(jìn)一步的，步驟（6）中，所述活性炭的加入量占濾液質(zhì)量的0.2%-0.6%；所述放置的時(shí)間12-18h；所述抽濾采用20-40μm孔徑的濾紙進(jìn)行。

19、進(jìn)一步的，步驟（7）中，真空冷凍干燥程序分為預(yù)凍、低溫干燥和升溫干燥三個(gè)部分；所述預(yù)凍的溫度為-20--80℃之間，預(yù)凍5-12h；預(yù)凍后凍干機(jī)抽真空，而后按照5-10℃/h升溫至-10-0℃后恒溫，低溫干燥，恒溫時(shí)間12-24h；而后按照5-10℃/h升溫至0-30℃后恒溫，升溫干燥，恒溫時(shí)間16-48h。

20、本發(fā)明一種利用權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的膠原蛋白三肽。

21、本發(fā)明的有益效果為：

22、（1）本發(fā)明通過(guò)對(duì)牛皮顆粒加堿浸泡預(yù)處理，可使牛皮顆粒溶脹，去除多余的脂肪和非膠原蛋白成分；

23、（2）本發(fā)明經(jīng)變性及酶解等處理，能夠促進(jìn)牛皮內(nèi)膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)的破壞變性，不僅可以徹底酶解膠原蛋白，使得膠原蛋白三肽得量更高，分子量小且集中，同時(shí)，能夠有效去除牛皮中的異雜味；后續(xù)經(jīng)混合酶共同作用于膠原蛋白肽鍵，有利于膠原蛋白三肽的生成；本方法操作過(guò)程中無(wú)需多次加酸或堿調(diào)節(jié)ph，生成的膠原蛋白三肽灰分含量低；抽濾除雜后，膠原蛋白三肽中雜質(zhì)降低，所得膠原蛋白三肽凍干品得率高；

24、（3）本發(fā)明在各處理工藝協(xié)同作用下，制備得到的產(chǎn)品成分細(xì)膩無(wú)腥味、無(wú)異雜味，水溶性較好。

25、（4）本發(fā)明提供的方法，冷凍干燥過(guò)程中，溫度的控制至關(guān)重要。預(yù)凍階段需要快速降溫以避免冰晶形成過(guò)大；升華干燥和解析干燥階段則需逐漸升溫以促進(jìn)水分的蒸發(fā)和逸出。溫度控制不僅影響產(chǎn)品的形態(tài)和質(zhì)量，還直接影響膠原蛋白的結(jié)構(gòu)和活性。因此，精準(zhǔn)的溫度控制是確保產(chǎn)品品質(zhì)的重要因素。

技術(shù)特征：

1.一種膠原蛋白三肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述堿溶液的質(zhì)量體積濃度為3～6％；所述牛皮顆粒和堿溶液的質(zhì)量比為1:2-10；所述堿處理為3-5℃下攪拌12-24h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，所述預(yù)處理牛皮和處理液的質(zhì)量比為1:3-8；所述處理液通過(guò)以下原料制備而成：水?10份、葡萄糖0.3-0.5份；每100ml水中，加入乳酸鏈球菌菌液5ml；具體處理為：30-32℃下保溫處理50-60min后；煮沸20-40min；然后降溫至50-60℃，過(guò)濾。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述變性牛皮和純化水的質(zhì)量比為1:3-5；所述高壓均質(zhì)勻漿為在20-50mpa壓力下，處理8-15min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（4）中，所述混合蛋白酶的加入量占變性牛皮質(zhì)量的0.1-0.25%；所述混合蛋白酶包括20-30%的胰酶和80%-70%的堿性蛋白酶；所述酶解為在55℃下酶解4h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的制備方法，其特征在于，步驟（5）中，所述動(dòng)物蛋白水解酶的加入量占一次酶解液的0.2-0.5%；所述水解為在55℃下水解12-24h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（6）中，所述活性炭的加入量占濾液質(zhì)量的0.2%-0.6%；所述放置的時(shí)間12-18h；所述抽濾采用20-40μm孔徑的濾紙進(jìn)行。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（7）中，真空冷凍干燥程序分為預(yù)凍、低溫干燥和升溫干燥三個(gè)部分；所述預(yù)凍的溫度為-20--80℃之間，預(yù)凍5-12h；預(yù)凍后凍干機(jī)抽真空，而后按照5-10℃/h升溫至-10-0℃后恒溫，低溫干燥，恒溫時(shí)間12-24h；而后按照5-10℃/h升溫至0-30℃后恒溫，升溫干燥，恒溫時(shí)間16-48h。

9.一種利用權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的膠原蛋白三肽。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，具體涉及一種膠原蛋白三肽的制備方法及所得產(chǎn)品。本發(fā)明通過(guò)對(duì)牛皮顆粒加堿浸泡，同時(shí)結(jié)合變性及酶解等處理手段，能夠促進(jìn)牛皮內(nèi)膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)的破壞變性，不僅可以徹底酶解膠原蛋白，使得膠原蛋白三肽得量更高，分子量小且集中，同時(shí)，能夠有效去除牛皮中的異雜味；后續(xù)經(jīng)混合酶共同作用于膠原蛋白肽鍵，有利于膠原蛋白三肽的生成；本方法操作過(guò)程中無(wú)需多次加酸或堿調(diào)節(jié)pH，生成的膠原蛋白三肽灰分含量低；抽濾除雜后，膠原蛋白三肽中雜質(zhì)降低，所得膠原蛋白三肽凍干品得率高；本發(fā)明在各處理工藝協(xié)同作用下，制備得到的產(chǎn)品成分細(xì)膩無(wú)腥味、無(wú)異雜味，水溶性較好。

技術(shù)研發(fā)人員：陳璐璐,王杰,邢志青,管瑞芹,冀曉靜,張平,張?zhí)鹛?王紅麗,單風(fēng)娟
受保護(hù)的技術(shù)使用者：濟(jì)南磐升生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19