本發(fā)明涉及醫(yī)療器械低溫消毒，更具體地說，是涉及一種極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、醫(yī)療器械的無菌保證是患者生命健康的最基本要求，滅菌生物監(jiān)測結(jié)果是評判醫(yī)療器械滅菌是否合格最可靠的指標(biāo)。環(huán)氧乙烷可以殺滅各種微生物，包括細(xì)菌繁殖體、芽孢、病毒和真菌孢子，是一種廣譜滅菌劑。一般認(rèn)為是由于它能與微生物的蛋白質(zhì)、dna和rna發(fā)生非特異性烷基化作用，更重要的是，環(huán)氧乙烷的殺菌作用是不可逆的。美國藥典第17版首先記載了用芽孢作為環(huán)氧乙烷和熱力滅菌的生物監(jiān)測指標(biāo)，并出現(xiàn)了生物指示劑（biological?indicator）這一學(xué)術(shù)專用名詞。在21版中全面規(guī)范了多種滅菌因子的生物指示劑，其中就包括了用于環(huán)氧乙烷滅菌效果監(jiān)測的枯草桿菌黑色變種芽孢atcc9372株，我國原衛(wèi)生部2017年版《消毒技術(shù)規(guī)范》中也做了明確規(guī)定。

2、生物指示劑是一類特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗證，生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等。環(huán)氧乙烷可用于不耐高溫、不耐濕熱物品的滅菌，具有廣譜滅菌和穿透性強(qiáng)的優(yōu)點，而且由于其殺滅微生物是利用烷基化原理而非氧化過程，因此對物品損壞非常小，對不耐熱精密儀器滅菌由著非常廣泛的用途，可以說環(huán)氧乙烷過去、今后和將來仍將是一種主要的低溫滅菌方式。

3、目前，用于環(huán)氧乙烷滅菌效果檢測的生物指示劑的培養(yǎng)時間一般為3小時左右或48小時，如專利cn202223465093.4公開了一種環(huán)氧乙烷滅菌生物挑戰(zhàn)包，通過一種塑料殼與密封膜結(jié)合形成的長孔道結(jié)構(gòu)的生物挑戰(zhàn)包，對現(xiàn)有環(huán)氧乙烷滅菌生物指示劑傳統(tǒng)打包方式進(jìn)行替換，使其操作更加簡便，節(jié)省時間；但生物挑戰(zhàn)包內(nèi)包含的生物指示劑所需培養(yǎng)時間是3小時，無法進(jìn)一步縮短這個時間。由此可知，現(xiàn)有技術(shù)還沒一種環(huán)氧乙烷生物指示物可以將培養(yǎng)時間縮短到1小時，更長的培養(yǎng)時間會降低醫(yī)療器械的周轉(zhuǎn)效率，提高醫(yī)院的用料成本，甚至耽誤急救患者的搶救時間。同時，由于傳統(tǒng)配方中，碳源和氮源的來源比較單一，會被不同的環(huán)境影響，單純的增加或減少碳源氮源的量會使培養(yǎng)基的穩(wěn)定性降低，甚至出現(xiàn)返色（假陰性）現(xiàn)象，影響醫(yī)院結(jié)果判讀，影響滅菌物品正常使用，造成經(jīng)濟(jì)損失。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑及其制備方法，本發(fā)明提供的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，能夠極大縮短滅菌物品的放行時間，提高滅菌物品周轉(zhuǎn)效率，為更多患者爭取治療時間。

2、本發(fā)明提供了一種極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，包括生物指示物芽孢和恢復(fù)培養(yǎng)基，所述恢復(fù)培養(yǎng)基包括：

3、復(fù)合碳源20~25g/l，復(fù)合萌發(fā)劑2~3g/l，復(fù)合氮源8~12g/l，緩沖體系1.5~2.5g/l，變色指示物1~2ml/l，底物0.5~1g/l，溶劑為水；

4、所述復(fù)合碳源由葡萄糖、淀粉、抗壞血酸和棉籽油組成；所述復(fù)合氮源包括有機(jī)氮源和無機(jī)氮源。

5、優(yōu)選的，所述生物指示物芽孢為枯草芽孢桿菌黑色變種atcc9372芽孢。

6、優(yōu)選的，所述復(fù)合碳源中葡萄糖、淀粉、抗壞血酸和棉籽油的質(zhì)量比為1：0.5：0.4：0.3。

7、優(yōu)選的，所述復(fù)合萌發(fā)劑由l-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸鈣組成。

8、優(yōu)選的，所述復(fù)合萌發(fā)劑中l(wèi)-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸鈣的質(zhì)量比為3：1：1。

9、優(yōu)選的，所述復(fù)合氮源由酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸銨組成。

10、優(yōu)選的，所述復(fù)合氮源中酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸銨的質(zhì)量比為1.5：2.5：1。

11、優(yōu)選的，所述緩沖體系由磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉組成，使恢復(fù)培養(yǎng)基的ph值為7.4

12、所述變色指示物為2%溴百里酚藍(lán)溶液；

13、所述底物為4-mug。

14、優(yōu)選的，所述恢復(fù)培養(yǎng)基的配方具體為：

15、葡萄糖10g/l，淀粉5g/l，抗壞血酸4g/l，棉籽油3g/l，l-天冬酰胺1.5g/l，l-半胱氨酸0.5g/l，2,6-吡啶二羧酸鈣0.5g/l，酵母提取物3g/l，大豆蛋白胨5g/l，硫酸銨2g/l，磷酸二氫鉀0.2245g/l，磷酸氫二鈉1.9734g/l，2%溴百里酚藍(lán)溶液1.6ml/l，底物4-mug0.8735g/l，溶劑為水。

16、本發(fā)明還提供了一種上述技術(shù)方案所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑的制備方法，包括以下步驟：

17、將水升溫到70℃~80℃，在攪拌條件下，加入淀粉，溶解后降至20℃~30℃；再加入葡萄糖、抗壞血酸、棉籽油、復(fù)合萌發(fā)劑、復(fù)合氮源和底物繼續(xù)攪拌；然后加入緩沖體系和變色指示物進(jìn)行超聲處理，得到恢復(fù)培養(yǎng)基；

18、將上述恢復(fù)培養(yǎng)基熔封在安瓿瓶中，與生物指示物芽孢組合，得到極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑。

19、本發(fā)明提供了一種極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，包括生物指示物芽孢和恢復(fù)培養(yǎng)基，所述恢復(fù)培養(yǎng)基包括：復(fù)合碳源20~25g/l，復(fù)合萌發(fā)劑2~3g/l，復(fù)合氮源8~12g/l，緩沖體系1.5~2.5g/l，變色指示物1~2ml/l，底物0.5~1g/l，溶劑為水；所述復(fù)合碳源由葡萄糖、淀粉、抗壞血酸和棉籽油組成；所述復(fù)合氮源包括有機(jī)氮源和無機(jī)氮源。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，采用特定含量的特定組分限定的恢復(fù)培養(yǎng)基，實現(xiàn)整體較好的相互作用，通過上述環(huán)氧乙烷生物指示物的特定恢復(fù)培養(yǎng)基配方，能夠在不改變其d值（在規(guī)定的條件下，滅活試驗微生物總數(shù)的90%所需的時間或劑量）和活菌量（實際可回收的菌落形成單位或其他合適單位的數(shù)量）的前提下使芽孢快速萌發(fā)，縮短培養(yǎng)時間至1小時，從而極大縮短滅菌物品的放行時間，提高滅菌物品周轉(zhuǎn)效率，為更多患者爭取治療時間。

20、此外，本發(fā)明提供的制備方法原材料易得、成本低、易于存儲，且整體工藝步驟簡單，條件溫和、易控，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，包括生物指示物芽孢和恢復(fù)培養(yǎng)基，其特征在于，所述恢復(fù)培養(yǎng)基包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述生物指示物芽孢為枯草芽孢桿菌黑色變種atcc9372芽孢。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述復(fù)合碳源中葡萄糖、淀粉、抗壞血酸和棉籽油的質(zhì)量比為1：0.5：0.4：0.3。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述復(fù)合萌發(fā)劑由l-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸鈣組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述復(fù)合萌發(fā)劑中l(wèi)-天冬酰胺、l-半胱氨酸和2,6-吡啶二羧酸鈣的質(zhì)量比為3：1：1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述復(fù)合氮源由酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸銨組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述復(fù)合氮源中酵母提取物、大豆蛋白胨和硫酸銨的質(zhì)量比為1.5：2.5：1。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述緩沖體系由磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉組成，使恢復(fù)培養(yǎng)基的ph值為7.4

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，其特征在于，所述恢復(fù)培養(yǎng)基的配方具體為：

10.一種權(quán)利要求1~9任一項所述的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，包括生物指示物芽孢和恢復(fù)培養(yǎng)基，所述恢復(fù)培養(yǎng)基包括：復(fù)合碳源20~25g/L，復(fù)合萌發(fā)劑2~3g/L，復(fù)合氮源8~12g/L，緩沖體系1.5~2.5g/L，變色指示物1~2ml/L，底物0.5~1g/L，溶劑為水；所述復(fù)合碳源由葡萄糖、淀粉、抗壞血酸和棉籽油組成；所述復(fù)合氮源包括有機(jī)氮源和無機(jī)氮源。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的極速型環(huán)氧乙烷生物指示劑，采用特定含量的特定組分限定的恢復(fù)培養(yǎng)基，實現(xiàn)整體較好的相互作用，通過上述環(huán)氧乙烷生物指示物的特定恢復(fù)培養(yǎng)基配方，能夠在不改變其D值和活菌量的前提下使芽孢快速萌發(fā)，縮短培養(yǎng)時間至1小時，從而極大縮短滅菌物品的放行時間，提高滅菌物品周轉(zhuǎn)效率，為更多患者爭取治療時間。

技術(shù)研發(fā)人員：宋國鑫,韓建康,趙帥帥,盧方斌,王文波,林久祿,孟祥浩,朱本仁
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東新華醫(yī)療器械股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10