本發(fā)明屬于生物，特別涉及一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytocakn-l及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、血腦屏障是大腦與血液之間的物理和生化屏障，具有極其重要的生理功能，能阻止外界毒素和病原體從血液中進(jìn)入腦組織，維持大腦內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定性；還能通過主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)和被動(dòng)擴(kuò)散機(jī)制選擇性地調(diào)節(jié)特定分子的進(jìn)出，保證大腦得到足夠的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。當(dāng)血腦屏障受損或破壞時(shí)，外界有害物質(zhì)如細(xì)菌、病毒和毒素輕易進(jìn)入大腦，會(huì)增加神經(jīng)元受損和炎癥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，甚至引發(fā)腦部疾病或神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。

2、甘露糖醛酸寡糖(maos)是以褐藻膠為原料，經(jīng)特定酶降解、分級(jí)和凝膠層析分離制備得到的不同聚合度β-d-甘露糖醛酸寡糖的鈉鹽。已有研究報(bào)道m(xù)aos制備的甘露特鈉膠囊(gv-971)能夠重塑腸道菌群，抑制神經(jīng)炎癥，從而改善阿爾茨海默病(ad)患者的認(rèn)知功能。

3、二油?；蚜字?dopc)是一種常見的磷脂類化合物，是細(xì)胞膜的關(guān)鍵組成部分，特別是在脂質(zhì)體的形成中，它能夠形成穩(wěn)定的脂質(zhì)雙層，對(duì)細(xì)胞膜的流動(dòng)性和滲透性有重要影響。在腸道中，dopc可發(fā)揮多種調(diào)控作用，包括促進(jìn)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性、參與脂質(zhì)代謝和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等。在心血管疾病中，dopc參與了血脂代謝和血管內(nèi)皮功能的調(diào)節(jié)。異常的dopc代謝或分布可能與動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。此外，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，dopc對(duì)神經(jīng)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和功能有重要意義，其變化可能與神經(jīng)退行性疾病等相關(guān)。dopc目前主要是通過物理手段從蛋黃和大豆中提取純化而來也可通過化學(xué)合成磷脂，物理和化學(xué)法工藝復(fù)雜，產(chǎn)量也有限。

4、由于現(xiàn)有技術(shù)中dopc的生產(chǎn)成本高，亟需找到一種高產(chǎn)量低成本、通過生物合成生產(chǎn)dopc的方法及菌株。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在提供一株產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l及其生產(chǎn)dopc的應(yīng)用方法，該菌株在體外發(fā)酵時(shí)加入maos能夠顯著增加dopc的代謝產(chǎn)生，且經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明其生產(chǎn)的dopc在體內(nèi)外均能夠緩解神經(jīng)損傷。利用該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)生dopc的生物合成方法可以顯著降低dopc的生產(chǎn)成本。

2、具體采用的技術(shù)方案為：一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編430072，保藏日期為2024年4月12日，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2024683，分類學(xué)命名klebsiella?oxytoca。

3、而且，該菌株的16srdna序列如seq?id?no.1所示。

4、以及，所述的菌株用于制備二油?；蚜字?。

5、以及，用所述的菌株制備二油?；蚜字姆椒椋?/p>

6、步驟1：將產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l菌懸液接種在lb培養(yǎng)基中；

7、步驟2：培養(yǎng)基中添加甘露糖醛酸寡糖；

8、步驟3：在37℃搖床中以200rpm培養(yǎng)菌株12h；

9、步驟4：檢測(cè)菌懸液od值為1.0；

10、步驟5：8000rpm，5min離心收集上清。

11、以及，所述的菌株用于制作生產(chǎn)二油酰基卵磷脂的制劑，所述制劑中的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l數(shù)量≥1×107cfu/g或1×107cfu/ml。

12、以及，所述的菌株在制備用于保護(hù)腸道屏障的藥物中的應(yīng)用。

13、以及，所述的菌株在制備用于保護(hù)血腦屏障的藥物中的應(yīng)用。

14、以及，所述的菌株在制備用于抑制神經(jīng)炎癥的藥物中的應(yīng)用。

15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

16、(1)本發(fā)明所提供的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在maos的誘導(dǎo)下，能代謝產(chǎn)生二油酰基卵磷脂(dopc)利用該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)生dopc的生物合成方法相比于傳統(tǒng)的物理和化學(xué)方法成本更低，相比傳統(tǒng)化學(xué)合成方法更環(huán)保、高效。

17、(2)實(shí)驗(yàn)證明產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l所生產(chǎn)的dopc在小鼠體內(nèi)干預(yù)能夠保護(hù)腸道屏障功能、能顯著保護(hù)血腦屏障的完整性。

18、(3)實(shí)驗(yàn)證明產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l所生產(chǎn)的dopc在體外能顯著抑制神經(jīng)炎癥。

技術(shù)特征：

1.一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編430072，保藏日期為2024年4月12日，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2024683，分類學(xué)命名klebsiella?oxytoca。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l，其特征在于：該菌株的16srdna序列如seq?id?no.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l的應(yīng)用，其特征在于：用于制備二油?；蚜字?。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l的應(yīng)用，其特征在于，制備二油?；蚜字姆椒椋?/p>

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l的應(yīng)用，其特征在于：用于制作生產(chǎn)二油酰基卵磷脂的制劑，所述制劑中的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiellaoxytoca?kn-l數(shù)量≥1×107cfu/g或1×107cfu/ml。

6.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在制備用于保護(hù)腸道屏障的藥物中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在制備用于保護(hù)血腦屏障的藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在制備用于抑制神經(jīng)炎癥的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiella?oxytoca?KN?L及其應(yīng)用，一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiella?oxytoca?KN?L，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編430072，保藏日期為2024年4月12日，保藏編號(hào)為：CCTCC?NO：M2024683，分類學(xué)命名Klebsiella?oxytoca。本發(fā)明提供的產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiella?oxytoca?KN?L在體外發(fā)酵時(shí)加入MAOS能夠顯著增加DOPC的代謝產(chǎn)生，且經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明其生產(chǎn)的DOPC在體內(nèi)外均能夠緩解神經(jīng)損傷。利用該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)生DOPC的生物合成方法可以顯著降低DOPC的生產(chǎn)成本。

技術(shù)研發(fā)人員：盧霜,郭小華,陶正雄,吳莉莎,張莉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中南民族大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19