本發(fā)明涉及蜜蜂育種，尤其涉及一種snp分子標(biāo)記及其在改良蜜蜂種質(zhì)資源中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、中華蜜蜂（ apis?cerana?cerana）是東方蜜蜂的一個(gè)亞種，適應(yīng)溫帶和亞熱帶等多種氣候條件。中華蜜蜂具有優(yōu)良的采集能力，雖然蜂蜜產(chǎn)量上通常不及西方蜜蜂，但其蜜蜂營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高。在不同的地理環(huán)境中，中華蜜蜂表現(xiàn)出不同的性狀特征，有效的評(píng)判中蜂的形態(tài)性狀是挖掘、保護(hù)、鑒別和利用蜂種資源的重要手段。

2、現(xiàn)有技術(shù)常采用形態(tài)標(biāo)記用于蜂種鑒定和性能評(píng)估，形態(tài)標(biāo)記雖然有成本低廉、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，但有著固有的缺點(diǎn)，在中蜂上有不適用的現(xiàn)象。首先，形態(tài)標(biāo)記與蜜蜂的個(gè)體發(fā)育情況直接相關(guān)，容易受到發(fā)育過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)條件等外在干擾因素影響。其次，中蜂形態(tài)測(cè)量精細(xì)，對(duì)測(cè)量?jī)x器精度、測(cè)量人員形態(tài)解剖的熟練程度均有嚴(yán)格要求，且蜜蜂形態(tài)測(cè)量工作量巨大，可操作性反而不強(qiáng)。最后，中蜂形態(tài)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，測(cè)量人員互相之間存在人為差異，人為誤差影響結(jié)果判讀的現(xiàn)象嚴(yán)重。跗節(jié)長(zhǎng)是蜜蜂重要形態(tài)性狀之一，是蜜蜂后足上的重要指標(biāo)，其在一定程度上影響蜜蜂的爬行能力和采集花粉能力，開(kāi)發(fā)跗節(jié)長(zhǎng)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記有利于培育優(yōu)質(zhì)蜜蜂種類。

3、目前與中蜂跗節(jié)長(zhǎng)相關(guān)聯(lián)的snp位點(diǎn)尚不明確，無(wú)法通過(guò)簡(jiǎn)單的一代測(cè)序?qū)崿F(xiàn)中蜂跗節(jié)長(zhǎng)性狀的鑒定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種snp分子標(biāo)記及其在改良蜜蜂種質(zhì)資源中的應(yīng)用。

2、第一方面，本發(fā)明提供snp分子標(biāo)記，所述snp分子標(biāo)記基于基因組版本prjna738447，所述snp分子標(biāo)記位于蜜蜂11號(hào)染色體第3613559位，多態(tài)性為c/t。

3、進(jìn)一步地，所述snp分子標(biāo)記包括如下所示的核苷酸序列：

4、tcgcttcagaactgtcaacgttgagagaaaataacaactttattattcgaaagttgtacagtttcttcgcttcaatcaggcatctacttatcatcacaattgtcaaaacattcttattatttaacagagcgatcagaattcatcgacaaaaggagcggcaatgtagcacagaaactgtattcagatttataaatttctcggttacatttcctctttcagcatctctctcattctctcttctcgctaacaaaatcatcacaattaagtaattgatcacgtcacaatcgattaaatttaaccccgtgacattctcgcgtaacaaa；

5、所述核苷酸序列第169位存在多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性為c/t。

6、第二方面，本發(fā)明提供用于擴(kuò)增所述snp分子標(biāo)記的引物對(duì)，包括如下核苷酸序列：

7、f：5’-tcgcttcagaactgtcaacg-3’，

8、r：5’-tttgttacgcgagaatgtcac-3’。

9、第三方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，包括所述的snp標(biāo)記，或所述的引物對(duì)。

10、第四方面，本發(fā)明提供所述的snp分子標(biāo)記，或所述的引物對(duì)，或所述的試劑盒在蜜蜂跗節(jié)長(zhǎng)的鑒定中的應(yīng)用。

11、本發(fā)明進(jìn)一步提供所述的snp分子標(biāo)記，或所述的引物對(duì)，或所述的試劑盒在如下任一中的應(yīng)用：

12、i）培育轉(zhuǎn)基因蜜蜂；

13、ii）蜜蜂的分子標(biāo)記輔助育種；

14、iii）改良優(yōu)質(zhì)蜜蜂種質(zhì)資源。

15、進(jìn)一步地，所述蜜蜂為東方蜜蜂；優(yōu)選為中華蜜蜂。

16、第五方面，本發(fā)明提供一種檢測(cè)蜜蜂后足跗節(jié)長(zhǎng)性狀的方法，包括：

17、獲取待測(cè)蜜蜂的基因組dna；以所述基因組dna為模板，采用所述的引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果判斷所述待測(cè)蜜蜂的跗節(jié)長(zhǎng)。

18、進(jìn)一步地，以總體系為25μl計(jì)，所述擴(kuò)增的體系包括：

19、模板dna?1~2μl、上游引物1~2μl、下游引物1~2μl、dntp?mix?1~2μl、10×taqbuffer?2~4μl、taq酶?0.2~0.4μl，余量為水；

20、所述擴(kuò)增的程序包括：

21、95℃預(yù)變性5~10min；

22、92~96℃變性30~90s，62~65℃退火30~90s，70~75℃延伸30~90s，循環(huán)10~15次，每次退火溫度下降0.4~0.6℃；

23、92~96℃變性30~90s，56~60℃退火30~90s，70~75℃延伸30~90s，循環(huán)24~36次；

24、70~74℃修復(fù)延伸10~20min。

25、進(jìn)一步地，所述根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果判斷所述待測(cè)蜜蜂的跗節(jié)長(zhǎng)包括：

26、所述擴(kuò)增結(jié)果中，所述引物對(duì)鑒定基因型為c/c的中蜂跗節(jié)長(zhǎng)顯著小于c/t基因型中蜂。

27、本發(fā)明具有如下有益效果：

28、本發(fā)明通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)分析篩選得到一個(gè)與蜜蜂的跗節(jié)長(zhǎng)相關(guān)的snp分子標(biāo)記，其位于蜜蜂11號(hào)染色體第3613559位，多態(tài)性為c/t。該snp分子標(biāo)記的不同基因型檢測(cè)結(jié)果，可以反映出蜜蜂的跗節(jié)長(zhǎng)性狀。本發(fā)明提供的snp分子標(biāo)記可以應(yīng)用于改良蜜蜂種質(zhì)資源，這在蜜蜂育種領(lǐng)域具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.snp分子標(biāo)記，其特征在于，所述snp分子標(biāo)記基于基因組版本prjna738447，所述snp分子標(biāo)記位于蜜蜂11號(hào)染色體第3613559位，多態(tài)性為c/t。

2.snp分子標(biāo)記，其特征在于，所述snp分子標(biāo)記包括如下所示的核苷酸序列：

3.用于擴(kuò)增如權(quán)利要求1或2所述snp分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于，包括如下核苷酸序列：

4.一種試劑盒，其特征在于，包括：權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記，或權(quán)利要求3所述的引物對(duì)。

5.權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記，或權(quán)利要求3所述的引物對(duì)，或權(quán)利要求4所述的試劑盒在蜜蜂的跗節(jié)長(zhǎng)性狀的鑒定中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求1或2所述的snp分子標(biāo)記，或權(quán)利要求3所述的引物對(duì)，或權(quán)利要求4所述的試劑盒在如下任一中的應(yīng)用：

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蜜蜂為東方蜜蜂；優(yōu)選為中華蜜蜂。

8.一種檢測(cè)蜜蜂后足跗節(jié)長(zhǎng)性狀的方法，其特征在于，包括：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，以總體系為25μl計(jì)，所述擴(kuò)增的體系包括：

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果判斷所述待測(cè)蜜蜂的跗節(jié)長(zhǎng)包括：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及蜜蜂育種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種SNP分子標(biāo)記及其在改良蜜蜂種質(zhì)資源中的應(yīng)用。所述SNP分子標(biāo)記基于基因組版本PRJNA738447，所述SNP分子標(biāo)記位于蜜蜂11號(hào)染色體第3613559位，多態(tài)性為C/T。本發(fā)明提供的SNP分子標(biāo)記與蜜蜂跗節(jié)長(zhǎng)緊密連鎖，通過(guò)其基因型檢測(cè)結(jié)果，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)蜜蜂跗節(jié)長(zhǎng)的檢測(cè)。本發(fā)明提供的SNP分子標(biāo)記可以用于培育轉(zhuǎn)基因蜜蜂，改良蜜蜂種質(zhì)資源，在蜜蜂養(yǎng)殖領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：于瀛龍,韋小平
受保護(hù)的技術(shù)使用者：貴州省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所（貴州省現(xiàn)代農(nóng)村發(fā)展研究中心、貴州省農(nóng)村經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展科學(xué)研究所、貴州省農(nóng)產(chǎn)品加工研究所）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19