背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、一些癌癥可具有十分有限的治療選擇，尤其在癌癥變?yōu)檗D(zhuǎn)移性及不可切除時(shí)。盡管諸如例如手術(shù)、化學(xué)療法及放射療法的治療已經(jīng)取得進(jìn)展，但許多癌癥(諸如例如胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌和前列腺癌)的預(yù)后可能較差。因此，存在對癌癥的另外治療的未滿足的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、發(fā)明簡述

1、本發(fā)明的實(shí)施方案提供了分離的或純化的t細(xì)胞受體(tcr)，其包含(i)seq?idno:1-3、(ii)seq?id?no:4-6或(iii)seq?id?no:1-6的氨基酸序列，其中所述tcr對由人白細(xì)胞抗原(hla)i類分子呈遞的突變的人ras氨基酸序列具有抗原特異性，并且其中所述突變的人ras氨基酸序列是突變的人kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(kras)氨基酸序列、突變的人harvey大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(hras)氨基酸序列或突變的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(nras)氨基酸序列。

2、本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了分離的或純化的多肽，其包含本發(fā)明tcr的功能部分，其中所述功能部分包含以下氨基酸序列：(a)全部seq?id?no:1-3，(b)全部seq?id?no:4-6，或(c)全部seq?id?no:1-6。

3、本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了包含至少一種本發(fā)明多肽的分離的或純化的蛋白。

4、本發(fā)明的其它實(shí)施方案提供了與本發(fā)明的tcr、多肽及蛋白相關(guān)的核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群體和藥物組合物。

5、本發(fā)明的實(shí)施方案還提供了檢測哺乳動(dòng)物中癌癥的存在的方法以及治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中癌癥的方法。

6、附圖中幾個(gè)視圖的簡要說明

7、圖1a描述了示例在與二甲基亞砜(dmso)或者用kras?wt?24-mer肽或kras?g12v24-mer肽脈沖的自體dc共培養(yǎng)后，外周血cd8+t細(xì)胞的cd137表達(dá)的圖。方框中的數(shù)字表示在每種共培養(yǎng)條件下表達(dá)cd137的t細(xì)胞的百分比。

8、圖1b是顯示在t細(xì)胞與用dmso、kras?wt?24-mer肽或kras?g12v?24-mer肽脈沖的自體dc共培養(yǎng)后，每2x104個(gè)細(xì)胞的ifn-γ斑點(diǎn)數(shù)目的圖。用pma:離子霉素培養(yǎng)的t細(xì)胞以及與用dmso脈沖的dc培養(yǎng)的t細(xì)胞作為對照。

9、圖2顯示了描述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的圖(點(diǎn)圖)，示例了已經(jīng)用結(jié)合kras?g12v四聚體-別藻藍(lán)素(apc)或kras?g12v四聚體-藻紅蛋白(pe)的kras?g12v?24-mer肽進(jìn)行ivs的cd8+外周血細(xì)胞的百分比(右圖)。左圖顯示了已被修飾以表達(dá)tcr的t細(xì)胞，該tcr在hla-a*11:01的背景下識別kras?g12d?10-mer，其與kras?g12v四聚體-apc或kras?g12v四聚體-pe結(jié)合。

10、圖3描述了顯示用實(shí)施例2的tcr轉(zhuǎn)導(dǎo)的來自第一供體和第二供體(分別為左圖和右圖)的同種異體t細(xì)胞表面上tcr表達(dá)的圖，如通過流式細(xì)胞術(shù)通過對鼠tcrβ鏈恒定區(qū)(mtcrβ)染色所測量的。方框中的數(shù)字表示mtcrβ表達(dá)陽性的細(xì)胞的百分比。

11、圖4的圖顯示了與表達(dá)不同krasg12突變的癌細(xì)胞系共培養(yǎng)過夜后，用實(shí)施例2的tcr轉(zhuǎn)導(dǎo)的來自兩個(gè)不同供體(供體1和供體2)的t細(xì)胞的ifn-γ產(chǎn)生(如通過elispot測定法測量的(ifn-γ斑點(diǎn)/2e4個(gè)細(xì)胞)以及4-1bb表達(dá)(％mtcrβ+cd137+)。每個(gè)靶癌細(xì)胞系未轉(zhuǎn)導(dǎo)或用hla-a*11:01轉(zhuǎn)導(dǎo)?！?gt;”表示大于500個(gè)斑點(diǎn)。

12、圖5a是顯示在將用實(shí)施例2的tcr轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞與用指示濃度(ng/ml)的kras?g12v9-mer肽(實(shí)心圓)或kras?wt?9-mer肽(空心圓)脈沖的靶細(xì)胞共培養(yǎng)后分泌的ifn-γ的濃度(pg/ml)的圖。

13、圖5b是顯示在將用實(shí)施例2的tcr轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞與用指示濃度(ng/ml)的kras?g12v10-mer肽(實(shí)心圓)或kras?wt?10-mer肽(空心圓)脈沖的靶細(xì)胞共培養(yǎng)后分泌的ifn-γ的濃度(pg/ml)的圖。

技術(shù)特征：

1.產(chǎn)生表達(dá)t細(xì)胞受體(tcr)的人細(xì)胞或人細(xì)胞群的方法，所述方法包括：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述tcr還包含人可變區(qū)。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述tcr包含：

4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述tcr包含：

5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述tcr還包含：

6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其中所述tcr還包含：

7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其中所述tcr包含：

8.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法，其中所述tcr包含：

9.產(chǎn)生表達(dá)多肽的人細(xì)胞或人細(xì)胞群的方法，所述方法包括：

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述多肽還包含：

11.如權(quán)利要求9或10所述的方法，其中所述多肽包含：

12.如權(quán)利要求9-11任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽包含：

13.如權(quán)利要求9-12任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽包含：

14.如權(quán)利要求9-13任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽包含：

15.如權(quán)利要求9-14任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽包含：

16.產(chǎn)生表達(dá)蛋白的人細(xì)胞或人細(xì)胞群的方法，所述方法包括：

17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中：

18.如權(quán)利要求16或17所述的方法，其中：

19.如權(quán)利要求16-18任一項(xiàng)所述的方法，其中：

20.如權(quán)利要求16-19任一項(xiàng)所述的方法，其中：

21.如權(quán)利要求16-20任一項(xiàng)所述的方法，其中：

22.如權(quán)利要求16-21任一項(xiàng)所述的方法，其中：

23.如權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)所述的方法，

24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述突變的人ras氨基酸序列的氨基酸序列包含seq?id?no:29或30，或者由seq?id?no:29或30組成。

25.如權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)所述的方法，其中所述hla?i類分子是hla-a分子。

26.如權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)所述的方法，其中所述hla?i類分子是hla-a11分子。

27.如權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)所述的方法，其中所述hla?i類分子是hla-a*11:01分子。

28.如權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)所述的方法，其中所述突變的人ras氨基酸序列包括在第12位的甘氨酸被取代的野生型人kras、野生型人hras或野生型人nras氨基酸序列，其中第12位是通過分別參照野生型人kras、野生型人hras或野生型人nras蛋白來定義的。

29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述取代是第12位的甘氨酸被纈氨酸取代。

技術(shù)總結(jié)
本申請公開了分離的或純化的T細(xì)胞受體(TCR)，其中所述TCR對人白細(xì)胞抗原(HLA)I類分子呈遞的突變的RAS氨基酸序列具有抗原特異性。還提供了相關(guān)的多肽和蛋白質(zhì)，以及相關(guān)的核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群和藥物組合物。還公開了檢測哺乳動(dòng)物中癌癥的存在的方法以及治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的癌癥的方法。

技術(shù)研發(fā)人員：拉米·約瑟夫,盧勇成,蓋爾·卡弗里,史蒂文·A·羅森伯格
受保護(hù)的技術(shù)使用者：美國衛(wèi)生和人力服務(wù)部
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23