本發(fā)明屬于黃蜀葵各部位的綜合利用，具體涉及黃蜀葵根莖總多糖的提取分離方法。

背景技術(shù)：

1、黃蜀葵是錦葵科秋葵屬的一年生或多年生粗壯直立草本植物，全株均有藥用價(jià)值?，F(xiàn)今，只有黃蜀葵花的黃酮成分作為中藥及中成藥得到應(yīng)用，黃蜀葵花采收加工過程中，大量的根、莖廢棄物未獲得合理的利用，這些根、莖常被直接丟棄或者焚燒，導(dǎo)致黃蜀葵的資源被浪費(fèi)和污染環(huán)境。故本發(fā)明集中于對黃蜀葵根莖各個(gè)部位的綜合利用，提高黃蜀葵的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

2、天然植物多糖是具有重要生物活性的化學(xué)物質(zhì)，具備低毒、安全、來源廣泛等優(yōu)點(diǎn)，其擁有抗腫瘤、免疫、降低血糖和血脂、抗氧化活性、促進(jìn)記憶、抗衰老、降低血壓等諸多藥理作用，已經(jīng)逐漸成為當(dāng)今新藥發(fā)展的重要方向之一。目前，植物多糖在食品、日化、農(nóng)業(yè)、工業(yè)等行業(yè)也擁有良好的應(yīng)用前景。因此，本發(fā)明將對黃蜀葵根莖各個(gè)部位的多糖進(jìn)行提取、純化、分離，并分析檢測黃蜀葵根莖多糖的單糖組成，充分將黃蜀葵各部位綜合利用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的是為了解決大量的黃蜀葵根莖等部位未獲得合理的利用，提供一種黃蜀葵根莖總多糖的提取分離方法。

2、本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的：

3、一種黃蜀葵根莖總多糖的提取分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

4、(1)將黃蜀葵根莖干燥、粉碎、過篩，得到藥材粉末；所得粉末經(jīng)乙醇回流提取去除黃酮后，過濾，藥渣采用熱水回流提取，抽濾，得到提取液；

5、(2)將提取液活性炭除色素得到脫色后的多糖溶液，再用sevage法除蛋白，離心，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除殘留的有機(jī)溶劑，再冷凍干燥得到棉絮狀物，洗滌，烘干，得到蜀葵根莖總多糖；

6、(3)利用deae-52纖維素交換柱層析法對黃蜀葵根莖的多糖進(jìn)行分離后透析。

7、優(yōu)選地，步驟(1)所述的乙醇回流提取采用的質(zhì)量濃度為80％。

8、優(yōu)選地，步驟(1)所述的粉末與乙醇用量比例為1：200g/ml。

9、優(yōu)選地，步驟(1)所述的熱水提取多糖采用的提取溫度100℃，提取時(shí)間4-4.5h，料液比1：50g/ml。

10、優(yōu)選地，步驟(2)所述的sevage法除蛋白時(shí)向多糖溶液里加入4倍體積sevage試劑，震搖10min，重復(fù)4-5次；其中，sevage試劑為正丁醇與氯仿體積比1：4。

11、優(yōu)選地，步驟(2)所述的洗滌分離為采用無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌。

12、優(yōu)選地，步驟(1)所述的藥渣采用熱水回流提取前用真空干燥箱對其進(jìn)行充分干燥。

13、優(yōu)選地，步驟(2)所述的活性炭加入量為提取液重量的2％；所述的除色素方法為在50℃下，攪拌40min。

14、優(yōu)選地，步驟(2)所述的離心為3000r/min條件離心20min。

15、優(yōu)選地，步驟(2)所述的在50-60℃下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去多糖溶液中殘留的有機(jī)溶劑。

16、優(yōu)選地，步驟(3)步驟(3)所述的將多糖溶液加樣于deae-52纖維素柱中，分別用純水以及0.1、0.3、0.5mol·ml-1nacl溶液對樣品依次洗脫，調(diào)節(jié)流速為1.0ml·min-1，每10分鐘收集一管，每管10ml，收集水及不同nacl濃度的洗脫液。

17、具體地，所述的deae-52纖維素交換柱層析法采用deae-52柱分離：稱量黃蜀葵的多糖用純水配置成5.016mg·ml-1的多糖溶液，加樣于deae-52纖維素柱中。分別用純水以及0.1、0.3、0.5mol·ml-1nacl溶液對樣品依次洗脫，調(diào)節(jié)流速為1.0ml·min-1，收集不同nacl濃度的洗脫液，每10分鐘收集一管，每管10ml。

18、收集純水對樣品進(jìn)行洗脫的各管洗脫液，各取2ml，以蒽酮-硫酸比色法測定其吸光度。

19、另取水2ml，用相同的方法制備空白對照溶液。

20、將5或6管洗脫液(50ml或60ml)進(jìn)行合并，將合并后的洗脫液濃縮至25ml，取2ml，以蒽酮-硫酸比色法測定其吸光度。量取相同體積的0.1、0.3、0.5mol·ml-1nacl溶液(50ml或60ml)，濃縮到25ml，取2ml，用相同的方法制備空白對照溶液。

21、縱坐標(biāo)為吸光度a，橫坐標(biāo)為洗脫液的管數(shù)或管數(shù)范圍代表號，繪制洗脫曲線，依據(jù)吸光度收集不同的洗脫峰。

22、優(yōu)選地，步驟(3)所述的透析具體步驟為：將各多糖的洗脫液置于各段透析袋中，用流動(dòng)的自來水透析48h，純水透析24h，每4至6小時(shí)換一次水，除去多糖洗脫液里的nacl以及多糖內(nèi)殘留的小分子雜質(zhì)，將透析后的溶液倒入培養(yǎng)皿，于冰箱里冷凍成冰，再放進(jìn)冷凍干燥機(jī)中除去水分，獲得四種多糖，分別為slamp-a、slamp-b、slamp-c、slamp-d，為白色的多糖。

23、因?yàn)閐eae-52是陰離子交換纖維素，其對多糖分子的吸附能力與多糖分子的酸性基團(tuán)含量成正比，故通過采用不同離子強(qiáng)度溶液對多糖進(jìn)行梯度洗脫，獲得組成存在差異的多糖，達(dá)成多糖的分離。

24、本發(fā)明采用蒽酮-硫酸比色法測得黃蜀葵根莖的多糖含量，并使用deae-52纖維素交換柱層析法對多糖進(jìn)行初步分離，獲得四種多糖，采用離子色譜法分析檢測多糖的單糖組成。

25、與現(xiàn)有技術(shù)比較本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明對黃蜀葵藥材各部位的多糖進(jìn)行全面研究，對多糖提取純化和分離工藝進(jìn)行優(yōu)化，分離制備具有免疫活性的多糖類物質(zhì)，變廢為寶，為實(shí)現(xiàn)中藥黃蜀葵資源的充分利用奠定了基礎(chǔ)，具有重要的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。該方法工藝設(shè)計(jì)合理，可操作性強(qiáng)。

技術(shù)特征：

1.一種黃蜀葵根莖總多糖的提取分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的乙醇回流提取采用的質(zhì)量濃度為80％，所述的粉末與乙醇用量比例為1：200g/ml。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的熱水提取多糖采用的提取溫度100℃，提取時(shí)間4-4.5h，料液比1：50g/ml。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的sevage法除蛋白時(shí)向多糖溶液里加入4倍體積sevage試劑，震搖10min，重復(fù)4-5次；其中，sevage試劑為正丁醇與氯仿體積比1：4。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)所述的所述的洗滌分離為采用無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的藥渣采用熱水回流提取前用真空干燥箱對其進(jìn)行充分干燥。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)所述的活性炭加入量為提取液重量的2％；所述的除色素方法為在50℃下，攪拌40min。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)所述的離心為3000r/min條件離心20min；所述的在50-60℃下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去多糖溶液中殘留的有機(jī)溶劑。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)所述的將多糖溶液加樣于deae-52纖維素柱中，分別用純水以及0.1、0.3、0.5mol·ml-1nacl溶液對樣品依次洗脫，調(diào)節(jié)流速為1.0ml·min-1，每10分鐘收集一管，每管10ml，收集水及不同nacl濃度的洗脫液。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)所述的透析具體步驟為：將收集不同的洗脫峰進(jìn)行透析，冷凍干燥。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種黃蜀葵根莖總多糖的提取分離方法，包括：干燥，粉碎，過篩，乙醇去除黃酮，水提取多糖，活性炭脫色素，Sevage法除蛋白，冷凍干燥，得黃蜀葵根莖總多糖，最后利用DEAE?52纖維素交換柱層析法對黃蜀葵根莖的多糖進(jìn)行分離后透析。本發(fā)明對黃蜀葵根莖部位的多糖進(jìn)行全面研究，同時(shí)對多糖提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，分離制備具有免疫活性的黃蜀葵根莖多糖類物質(zhì)，變廢為寶，為實(shí)現(xiàn)中藥黃蜀葵資源的充分利用奠定了基礎(chǔ)，具有重要的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，且該方法工藝設(shè)計(jì)合理，可操作性強(qiáng)。

技術(shù)研發(fā)人員：李永,段瓊輝,吳慶國,秦楓
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10