本發(fā)明涉及生物，尤其是涉及一種誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法、試劑盒和應用。

背景技術：

1、如下陳述僅提供與本發(fā)明有關的背景信息，而不必然地構成現(xiàn)有技術。

2、誘導多能干細胞(induced?pluripotent?stem?cells，ipscs)是一種具有類似胚胎干細胞特性的細胞類型，ipscs通過引入特定轉(zhuǎn)錄因子使體細胞重編程而成為干細胞。ipscs的發(fā)現(xiàn)是干細胞研究領域的重要突破，最初是由四個轉(zhuǎn)錄因子oct4、sox2、klf4和c-myc)的組合轉(zhuǎn)入分化的體細胞中實現(xiàn)的。ipscs具有類似胚胎干細胞的特性，能夠分化成多種類型的細胞。這項技術不僅避免了使用胚胎細胞或卵細胞，從而解決了相關的倫理問題，還因其在再生醫(yī)學、疾病建模、藥物發(fā)現(xiàn)等領域的潛在應用而備受關注。

3、目前ipscs常用培養(yǎng)方式是通過在培養(yǎng)皿中鋪上基質(zhì)膠或vtn蛋白(vitronectin)使ipscs附著后生長擴增。在體細胞形成克隆后，需要使用吸頭在顯微鏡下挑取克隆，同時在傳代過程中需要通過消化酶或edta處理細胞。但該方法通常消化時間長，對細胞活率以及細胞得率影響較大。因此，改進ipscs的培養(yǎng)方式是目前有待解決的問題。

4、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法，以緩解上述誘導多能干細胞中的至少一個缺陷?；谠撜T導多能干細胞的培養(yǎng)方法，還提供了用于誘導多能干細胞培養(yǎng)的試劑盒和它們的應用。

2、為解決上述技術問題，本發(fā)明特采用如下技術方案：

3、第一方面，提供了一種誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法，該培養(yǎng)方法包括使誘導多能干細胞附著在細胞培養(yǎng)基質(zhì)生長，所述細胞培養(yǎng)基質(zhì)中含有外泌體。

4、第二方面，提供了一種用于誘導多能干細胞培養(yǎng)的試劑盒，該試劑盒包含溫敏性水凝膠、外泌體和用于誘導多能干細胞的培養(yǎng)基。

5、第三方面，還提供了第一方面所述的誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法，或第二方面所述的用于誘導多能干細胞培養(yǎng)的試劑盒在制備細胞藥物中的應用。

6、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

7、本發(fā)明提供的誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法通過使誘導多能干細胞附著在含有外泌體的細胞培養(yǎng)基質(zhì)上生長，將外泌體的生物活性優(yōu)勢至細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，外泌體作為細胞間通訊的重要載體，攜帶豐富的蛋白質(zhì)、rna等生物活性分子，能夠有效模擬體內(nèi)微環(huán)境，促進ipscs更快地自我更新與增殖，大幅縮減ipscs傳代時間。并且ipscs不僅增殖效率得到提升，而且能維持良好的生存狀態(tài)，這直接促進了細胞總數(shù)的顯著增長，為后續(xù)的細胞治療、藥物篩選及疾病模型構建等應用提供了更為充足的高質(zhì)量細胞來源。

技術特征：

1.一種誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括使誘導多能干細胞附著在細胞培養(yǎng)基質(zhì)生長，所述細胞培養(yǎng)基質(zhì)中含有外泌體。

2.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，以外泌體的總蛋白濃度計，所述細胞培養(yǎng)基質(zhì)中外泌體的濃度為0.05～0.2mg/ml；

3.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述細胞培養(yǎng)基質(zhì)包括水凝膠。

4.根據(jù)權利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述水凝膠包括溫敏性水凝膠；

5.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法還包括對體細胞進行重編程，體細胞附著在所述細胞培養(yǎng)基質(zhì)并被重編程至形成誘導多能干細胞單克隆集落。

6.根據(jù)權利要求1～5任一項所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括使用克隆環(huán)裝置分離單克隆集落，所述分離單克隆集落包括將克隆環(huán)的環(huán)體套在所需分離的單克隆集落上，加入消化試劑至所述環(huán)體內(nèi)，細胞脫離培養(yǎng)容器后將所述環(huán)體內(nèi)細胞分離至新的培養(yǎng)體系中；

7.根據(jù)權利要求6所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述克隆環(huán)裝置包括環(huán)體和與所述環(huán)體密封連接的用于貯存消化試劑的柔性中空容器，所述柔性中空容器的出料口與環(huán)體內(nèi)連通。

8.用于誘導多能干細胞培養(yǎng)的試劑盒，其特征在于，包含溫敏性水凝膠、外泌體和用于誘導多能干細胞的培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，以外泌體的總蛋白濃度計，外泌體的工作濃度為0.05～0.2mg/ml；

10.權利要求1～7任一項所述的誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法，或權利要求8或9所述的用于誘導多能干細胞培養(yǎng)的試劑盒在制備細胞藥物中的應用。

技術總結(jié)
本發(fā)明提供了一種誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法、試劑盒和應用，涉及生物技術領域。該誘導多能干細胞的培養(yǎng)方法包括使誘導多能干細胞附著在細胞培養(yǎng)基質(zhì)生長，所述細胞培養(yǎng)基質(zhì)中含有外泌體。該培養(yǎng)方法可以縮短誘導多能干細胞傳代時間、降低誘導多能干細胞傷害，提高誘導多能干細胞的數(shù)量。

技術研發(fā)人員：張強,王雪麗,潘若浪,陳燁,戴玲華
受保護的技術使用者：杭州易文賽生物技術有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/10