本公開涉及核桃副產(chǎn)物開發(fā)，具體涉及一種益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法。

背景技術(shù)：

1、低溫核桃粕是核桃油冷榨生產(chǎn)工藝過程中產(chǎn)生的一種副產(chǎn)物，其優(yōu)質(zhì)蛋白含量高達(dá)50％以上。與熱榨法相比，冷榨法核桃粕蛋白變性少。核桃粕主要成分為谷蛋白，其氨基酸種類齊全，還富含礦物質(zhì)、膳食纖維、多酚等營養(yǎng)物質(zhì)，可為發(fā)酵菌種提供充足的碳源和氮源。目前對核桃粕的利用大多用于動物飼料和肥料，也有少量核桃粕用于生產(chǎn)核桃蛋白粉、蛋白乳等初級產(chǎn)品，而對于核桃粕中優(yōu)質(zhì)蛋白的利用不夠充分。因此，加強(qiáng)核桃和核桃副產(chǎn)物的深度開發(fā)研究，對核桃產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展具有十分重要的意義。

2、中國發(fā)明專利第cn103497985b號公開了一種核桃粕抗氧化肽制備方法，其利用核桃粕蛋白，通過酶法水解，得到蛋白酶解液，再利用凝膠過濾色譜和反相高效液相色譜對其進(jìn)行分離純化得到抗氧化肽產(chǎn)品。然而，該方法操作復(fù)雜、成本高，難以推廣應(yīng)用。

3、以上背景技術(shù)內(nèi)容的公開僅用于輔助理解本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思及技術(shù)方案，其并不必然屬于本專利申請的現(xiàn)有技術(shù)，在沒有明確的證據(jù)表明上述內(nèi)容在本專利申請的申請日已經(jīng)公開的情況下，上述背景技術(shù)不應(yīng)當(dāng)用于評價本申請的新穎性和創(chuàng)造性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，以解決上述背景技術(shù)問題中的至少一種問題。

2、為解決上述問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

3、一種益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，包括以下步驟：

4、s1、將冷榨核桃粕粉碎，過篩，得到核桃粕粉末；

5、s2、在核桃粕粉末中加入水，使得核桃粕的含水量為50％-70％，攪拌均勻得到半固態(tài)的核桃粕發(fā)酵基質(zhì)；

6、s3、將至少兩種或兩種以上益生菌分別進(jìn)行活化，調(diào)節(jié)菌液濃度至1.0×108cfu/ml，得到兩種或兩種以上益生菌懸液；

7、s4、將步驟s3中得到的至少兩種益生菌懸液按1:1的比例復(fù)配，充分混勻得到益生菌混合菌液；

8、s5、將所述益生菌混合菌液按0.5％-2％的接種量接種于所述核桃粕發(fā)酵基質(zhì)中，于30-40℃條件下，發(fā)酵12-48小時后得到發(fā)酵物，通過超濾法分離提取獲得不同分子量段的多肽；

9、s6、對步驟s5所得不同分子量段的多肽進(jìn)行抗氧化活性分析，篩選得到具有抗氧化效果的多肽。

10、在一些實施例中，步驟s6包括：

11、s60、進(jìn)行體外抗氧化活性測定，對不同分子量段的多肽進(jìn)行體外抗氧化活性測定，篩選出體外抗氧化活性高的多肽組分。

12、在一些實施例中，步驟s6還包括：

13、s61、進(jìn)行核桃多肽序列鑒定，將鑒定后得到的多肽序列分別與keap1蛋白進(jìn)行分子對接，篩選出結(jié)合能高的新型肽；

14、s62、將結(jié)合能高的新型肽進(jìn)行細(xì)胞水平抗氧化試驗，進(jìn)一步檢驗其抗氧化效果。

15、在一些實施例中，步驟s3包括：將凍存的保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱鏈球菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和羅伊氏乳桿菌分別接種到mrs肉湯培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)箱中活化24小時，活化至第三代。

16、在一些實施例中，步驟s3包括：將保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱鏈球菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和羅伊氏乳桿菌分別進(jìn)行活化，調(diào)節(jié)菌液濃度至1.0×108cfu/ml，得到六種益生菌懸液。

17、在一些實施例中，所有益生菌均為乳酸菌。

18、在一些實施例中，所述對不同分子量段的多肽進(jìn)行體外抗氧化活性測定包括：abts自由基清除能力測定和dpph自由基清除能力測定。

19、在一些實施例中，所述進(jìn)行核桃多肽序列鑒定包括：

20、根據(jù)體外抗氧化測定結(jié)果，對抗氧化活性好的mw<1kda的多肽組分進(jìn)行鑒定。

21、在一些實施例中，步驟s5包括：將發(fā)酵物真空冷凍干燥后，溶解于去離子水中，通過超濾膜法對核桃多肽進(jìn)行分級分離。

22、在一些實施例中，步驟s1包括：將冷榨核桃粕粉碎，過60目篩，得到核桃粕粉末。

23、本發(fā)明技術(shù)方案的有益效果是：

24、相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法操作方法簡便、綠色環(huán)保、高效節(jié)能，具有較好的應(yīng)用前景；且用本發(fā)明方法可以得到的抗氧化肽抗氧化活性高，肽段氨基酸序列穩(wěn)定。

25、應(yīng)當(dāng)理解的是，以上的一般描述和后文的細(xì)節(jié)描述僅是示例性和解釋性的，并不能限制本公開。

技術(shù)特征：

1.一種益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于：包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，步驟s6包括：

3.如權(quán)利要求2所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，步驟s6還包括：

4.如權(quán)利要求1所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，步驟s3中，將凍存的保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱鏈球菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和羅伊氏乳桿菌分別接種到mrs肉湯培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)箱中活化24小時，活化至第三代。

5.如權(quán)利要求1所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，步驟s3中，將保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱鏈球菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和羅伊氏乳桿菌分別進(jìn)行活化，調(diào)節(jié)菌液濃度至1.0×108cfu/ml，得到六種益生菌懸液。

6.如權(quán)利要求1所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，所有益生菌均為乳酸菌。

7.如權(quán)利要求2所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，所述對不同分子量段的多肽進(jìn)行體外抗氧化活性測定包括：abts自由基清除能力測定和dpph自由基清除能力測定。

8.如權(quán)利要求3所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，所述進(jìn)行核桃多肽序列鑒定包括：

9.如權(quán)利要求1所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，步驟s5包括：將發(fā)酵物真空冷凍干燥后，溶解于去離子水中，通過超濾膜法對核桃多肽進(jìn)行分級分離。

10.如權(quán)利要求1所述益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法，其特征在于，步驟s1中，將冷榨核桃粕粉碎，過60目篩，得到核桃粕粉末。

技術(shù)總結(jié)
本公開一種益生菌復(fù)合發(fā)酵制備核桃抗氧化肽的方法,包括：S1、將冷榨核桃粕粉碎得到核桃粕粉末；S2、在核桃粕粉末中加入水，得到核桃粕發(fā)酵基質(zhì)；S3、將至少兩種或兩種以上益生菌分別進(jìn)行活化，調(diào)節(jié)菌液濃度，得到兩種或兩種以上益生菌懸液；S4、將至少兩種益生菌懸液按1:1的比例復(fù)配，得到益生菌混合菌液；S5、將益生菌混合菌液按0.5％?2％的接種量接種于核桃粕發(fā)酵基質(zhì)中發(fā)酵得到發(fā)酵物，通過超濾法分離提取獲得不同分子量段的多肽；S6、對所述不同分子量段的多肽進(jìn)行抗氧化活性分析，篩選得到具有抗氧化效果的多肽。本發(fā)明操作方法簡便、綠色環(huán)保、高效節(jié)能，具有較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：李凌飛,楊宇,李曦明,付曉萍,龔加順
受保護(hù)的技術(shù)使用者：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/28