本發(fā)明涉及一種小分子肽及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一種具有抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能的小分子生物活性肽pct-1及其制備方法和在抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能食品中的應(yīng)用，屬于生物。

背景技術(shù)：

1、肥胖、衰老以及癌癥、心血管疾病、阿爾茨海默癥等多種疾病已被證實與自由基的過量產(chǎn)生有密切關(guān)聯(lián)。正常機體可以通過多種抗氧化機制進(jìn)行氧化平衡調(diào)節(jié)，包括清除自由基以阻斷自由基的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、螯合金屬離子抑制自由基產(chǎn)生以及調(diào)節(jié)內(nèi)源性谷胱甘肽過氧化物酶（gsh-px）、超氧化物歧化酶（sod）和過氧化氫酶（cat）等以清除自由基。當(dāng)機體內(nèi)源性氧化平衡被打破后，需要外源性補充抗氧化劑。傳統(tǒng)的抗氧化劑一般來源于化學(xué)合成，存在穩(wěn)定性差、毒副作用強等缺點，而來自于蛋白水解的抗氧化肽具有安全無毒、穩(wěn)定性強等優(yōu)勢，更符合消費需求。

2、人體腸道中含有約1000種、100萬億個微生物，主要包括細(xì)菌、酵母和寄生蟲等。這些腸道微生物攜帶的基因數(shù)量是人體基因數(shù)量的100倍以上，被稱為“看不見的器官”。腸道菌群失衡與肥胖、高血壓、腸道炎癥和心血管疾病等密切相關(guān)，有助于調(diào)節(jié)腸道菌群是《允許保健食品聲稱的保健功能目錄非營養(yǎng)素補充劑（2023年版）》中允許保健品聲稱的功能之一。除直接補充益生菌以外，生物活性肽也被報道具有調(diào)節(jié)腸道菌群功能。

3、左依瑾在論文《羅非魚皮抗氧化肽分離純化過程對其結(jié)構(gòu)及活性的影響》中詳細(xì)描述了羅非魚皮酶解液的抗氧化活性，以及其中的核心功能抗氧化肽組分十肽pgiiglpgpa、八肽avgpvgps和八肽ergppgpp等。王怡菊在論文《南極磷蝦活性肽的分離鑒定及功能驗證》中描述了從南極磷蝦中制備抗氧化肽的過程，證明抗氧化強的組分主要富集在低分子量多肽中，并鑒定發(fā)現(xiàn)七肽apgelpy、六肽difdpl和六肽ldvapl具有良好抗氧化效果。余輝在《細(xì)點圓趾蟹含肉下腳料酶解物中抗氧化肽的分離與鑒定》中研究了對細(xì)點圓趾蟹含肉下腳料的胰蛋白酶酶解液抗氧化活性，并從中分離獲得2個abts+清除能力較強的抗氧化肽三肽yeg和二肽ye。此外，馮子齊等在文章《厚殼貽貝活性肽對酒精誘導(dǎo)小鼠肝損傷及腸道菌群的作用》中描述了厚殼貽貝活性肽對酒精誘導(dǎo)肝損傷小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用；陳心璦在論文《大鯢活性肽對腸道菌群作用的研究》中針對性研究大鯢活性肽對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)和代謝調(diào)節(jié)作用。韓夢瑤在論文《大口黑鱸魚皮膠原蛋白肽的制備及活性研究》中提到大口黑鱸魚皮膠原蛋白肽對免疫低下小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。進(jìn)一步的，jiaojiao?han等在文章《the?novel?peptides?icrd?and?lcgec?screenedfrom?tuna?roe?show?antioxidative?activity?via?keap1/nrf2-are?pathwayregulation?and?gut?microbiota?modulation》中描述了抗氧化肽四肽icrd和五肽lcgec的腸道菌群調(diào)節(jié)作用。上述文獻(xiàn)公開的具有抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能的生物活性肽結(jié)構(gòu)多樣，沒有明顯的序列結(jié)構(gòu)規(guī)律。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種篩選自螺旋藻蛋白肽、具有抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能、可應(yīng)用于抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能食品中的小分子活性肽。

2、為了實現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

3、一種生物活性肽pct-1，所述生物活性肽pct-1的氨基酸序列為lnrtfe，如序列表seq?id?no：1所示，具有抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能。

4、前述生物活性肽pct-1在抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能食品中的應(yīng)用。

5、前述生物活性肽pct-1的一種制備方法，采用固相合成法，具體的：

6、以fmoc保護(hù)的氨基酸為原料，以聚苯乙烯樹脂為固相載體，采用fmoc固相合成策略進(jìn)行固相合成。

7、前述生物活性肽pct-1的另一種制備方法，采用酶解法，具體的：

8、（1）取螺旋藻蛋白，加入螺旋藻蛋白9倍質(zhì)量的水，按照0.5％的酶底比加入復(fù)合蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度為55℃，ph值為8.0，酶解時間為6h，得到酶解產(chǎn)物，其中，所述復(fù)合蛋白酶由堿性蛋白酶和中性蛋白酶按照1：1的質(zhì)量比混合而成；

9、（2）酶解結(jié)束后，用八層紗布對酶解產(chǎn)物進(jìn)行過濾，去除殘渣，得到螺旋藻蛋白肽酶解液；

10、（3）凍干上述螺旋藻蛋白肽酶解液，得到螺旋藻蛋白肽粉末，該螺旋藻蛋白肽粉末中含有較多的生物活性肽pct-1。

11、本發(fā)明的有益之處在于：本發(fā)明從螺旋藻蛋白肽中篩選獲得的生物活性肽pct-1能顯著提高血清中sod和gsh-px的活性，顯著降低血清中mda含量，其體內(nèi)抗氧化活性與陽性對照trolox相當(dāng)；與此同時，與空白對照組相比，pct-1處理可減少腸道菌群α多樣性指數(shù)，改變腸道菌群的整體結(jié)構(gòu)（β多樣性指數(shù)），調(diào)節(jié)腸道菌群各個分類層級的豐度，顯著增加乙酸和丁酸含量；該生物活性肽pct-1可應(yīng)用于抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能食品中。

技術(shù)特征：

1.一種生物活性肽pct-1，其特征在于，所述生物活性肽pct-1的氨基酸序列為lnrtfe，如序列表seq?id?no：1所示，具有抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能。

2.權(quán)利要求1所述生物活性肽pct-1在抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能食品中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述生物活性肽pct-1的制備方法，其特征在于，采用固相合成法，具體的：

4.權(quán)利要求1所述生物活性肽pct-1的制備方法，其特征在于，采用酶解法，具體的：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種生物活性肽PCT?1及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。所述生物活性肽PCT?1的氨基酸序列為LNRTFE，如序列表SEQ?ID?NO：1所示，具有抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能。該生物活性肽PCT?1從螺旋藻蛋白肽中提取得到，能顯著提高血清中SOD和GSH?Px的活性，顯著降低血清中MDA含量，其體內(nèi)抗氧化活性與陽性對照Trolox相當(dāng)，與此同時，與空白對照組相比，該生物活性肽PCT?1還可減少腸道菌群α多樣性指數(shù)，改變腸道菌群的整體結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)腸道菌群各個分類層級的豐度，顯著增加乙酸和丁酸含量，可應(yīng)用于抗氧化和腸道菌群調(diào)節(jié)功能食品中。

技術(shù)研發(fā)人員：李文軍,車團(tuán)結(jié),秦松,蘆晨陽,徐進(jìn)章,焉麗波,解桂珍,闞瑩
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/28