本發(fā)明涉及農(nóng)藥殘留檢測(cè)，具體涉及一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片及其制備方法和應(yīng)用方法。

背景技術(shù)：

1、農(nóng)藥殘留普遍存在于各種農(nóng)產(chǎn)品中，包括茶葉、水果和蔬菜，并已成為世界上最廣泛討論的問(wèn)題之一有些農(nóng)藥殘留，特別是內(nèi)源性農(nóng)藥，很難清除，可引起癌癥、激素紊亂、哮喘、過(guò)敏、過(guò)敏和其他疾病因此，開(kāi)發(fā)可靠的檢測(cè)技術(shù)來(lái)監(jiān)測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留水平至關(guān)重要。傳統(tǒng)的方法，如氣相色譜法和高效液相色譜法，往往需要耗時(shí)的樣品處理，并且很難檢測(cè)到原處的農(nóng)藥殘留針對(duì)上述問(wèn)題，已經(jīng)報(bào)道了多種檢測(cè)方法，包括電化學(xué)方法、表面增強(qiáng)拉曼光譜和比色法。側(cè)向免疫層析法具有預(yù)處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、反應(yīng)速度快、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是一種很有前途的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。

2、一般有機(jī)磷農(nóng)藥前處理常用的技術(shù)：液液萃取、固相萃取技術(shù)、quechers方法，這些檢測(cè)方法存在耗時(shí)長(zhǎng)，抗干擾性差，操作繁瑣，有機(jī)溶劑用量大等問(wèn)題。酶聯(lián)免疫法和膠體金試紙條的前處理方法雖然操作比儀器檢測(cè)方法要簡(jiǎn)單，但前處理方式會(huì)用到勻漿或者切碎等，這樣的前處理方式會(huì)增加基質(zhì)效應(yīng)干擾，并且只能檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品表面的農(nóng)藥殘留，而不能檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品內(nèi)部的農(nóng)藥殘留。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明提出了一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片及其制備方法和應(yīng)用方法，可以同時(shí)以方便和微創(chuàng)的方式檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品表面和內(nèi)部的農(nóng)藥殘留。

2、為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

3、第一方面，本發(fā)明提出了一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的制備方法，包括以下步驟：

4、s1：將聚乙二醇二丙烯酸酯、三乙胺和丙烯酰氯以99：0.5：0.5的質(zhì)量比混合后得到混合溶液；

5、s2：將所述混合溶液注入到硅膠微針模具中，真空放置后利用紫外線(xiàn)照射該混合溶液，得到pegda貼片；

6、s3：將所述pegda貼片浸入濃度為50mmol/l表面修飾的多壁碳納米管懸浮液中進(jìn)行超聲浸泡，室溫放置后揭起上層透明膜，得到微針貼片。

7、進(jìn)一步地，步驟s2中紫外線(xiàn)的照射條件為：照射強(qiáng)度為8-12mw/cm2，例如可以是8、9、10、11、12mw/cm2；波長(zhǎng)為365nm，照射時(shí)間為40-50min，例如可以是40、41、42、45、47、50min；

8、步驟s2中真空放置的時(shí)間為12-18min，例如可以是12、14、15、18min。

9、進(jìn)一步地，步驟s3中表面修飾的多壁碳納米管包括羥基修飾多壁碳納米管、羧基化多壁碳納米管和氨基化多壁碳納米管，優(yōu)選為羥基修飾多壁碳納米管。

10、進(jìn)一步地，步驟s3中超聲浸泡的時(shí)間為25-35min，例如可以是25、27、30、32、35min。

11、進(jìn)一步地，步驟s3中的室溫放置的時(shí)間為10-15h，例如可以是10、11、12、13、15h。

12、第二方面，本發(fā)明提出了一種采用上述方法制備的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片。

13、第三方面，本發(fā)明提出了所述的方法制備的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片在檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中毒死蜱和/或甲基對(duì)硫磷的應(yīng)用。

14、第四方面，本發(fā)明提出了一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的應(yīng)用方法，所述應(yīng)用方法包括：

15、將按照上述方法制備的微針貼片按壓在待測(cè)物的不同部位；

16、按壓后用pbs緩沖液浸泡微針貼片，得到洗脫液；

17、吸取洗脫液與金標(biāo)混合抗體混勻，混勻靜置后將液體轉(zhuǎn)移至膠體金試紙條的樣品墊上，通過(guò)膠體金讀卡儀讀取檢測(cè)結(jié)果。

18、進(jìn)一步地，所述pbs緩沖液的濃度為0.02mol/l，ph為7.4。

19、進(jìn)一步地，微針貼片每次按壓后停頓6-12s。

20、進(jìn)一步地，所述膠體金試紙條按以下步驟制備：

21、制備膠體金：將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的氯金酸溶液加熱至沸騰后再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)加熱直至溶液顏色趨于穩(wěn)定后，得到膠體金溶液；

22、制備膠體金試紙條：將毒死蜱半抗原-牛血清蛋白偶聯(lián)物用pbs緩沖液稀釋至濃度為0.3mg/ml，噴于nc膜上，為t1線(xiàn)；在t1檢測(cè)線(xiàn)上5mm處噴涂甲基對(duì)硫磷半抗原-牛血清蛋白偶聯(lián)物，用pbs緩沖液稀釋至濃度為0.5mg/ml，為t2線(xiàn)；在t2線(xiàn)上5mm處噴涂羊抗鼠二抗，為c線(xiàn)；

23、組裝膠體金試紙條：把nc膜、樣品墊、吸水墊貼在pvc底板上，使樣品墊與nc膜在長(zhǎng)度方向上重合0.3cm，nc膜與吸水墊在長(zhǎng)度方向上重合0.3cm，然后用切條機(jī)切割成寬度為3mm的試紙條，得到膠體金試紙條。

24、進(jìn)一步地，所述金標(biāo)混合抗體按以下步驟制備：

25、向膠體金溶液中加入9μl/ml毒死蜱和甲基對(duì)硫磷抗體，37℃搖床振蕩30min,加入濃度為10%peg-20000振蕩10min，再加入質(zhì)量體積比為5%bsa，振蕩10min；

26、反應(yīng)后,放入高速冷凍離心機(jī)以12000r/min,離心5min，棄上清液,下層沉淀用100μl/ml重懸液溶解,得到金標(biāo)混合抗體。

27、本發(fā)明提供的一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片及其制備方法和應(yīng)用方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比優(yōu)點(diǎn)在于：

28、本發(fā)明提出的微針貼片由經(jīng)表面修改的多壁碳納米管、聚乙二醇二丙烯酸酯、三乙胺和丙烯酰氯制備而成，其中，pegda具有無(wú)毒、生物相容性好、免疫原性低、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，在紫外線(xiàn)照射下，pegda分子鏈末端的丙烯酸酯雙鍵斷裂，并與其他pegda分子結(jié)合形成交聯(lián)點(diǎn)和網(wǎng)絡(luò)，pegda分子之間形成穩(wěn)定的化學(xué)鍵，從而形成一個(gè)整體的水凝膠結(jié)構(gòu)，多壁碳納米管的加入可以提高吸附率、降低基質(zhì)效應(yīng)的干擾。本發(fā)明制成的微針貼片具有出色的膨脹能力，能夠快速有效地吸收農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，將微針貼片按壓農(nóng)產(chǎn)品表面，通過(guò)針尖進(jìn)入蔬菜細(xì)胞內(nèi)部來(lái)收集農(nóng)藥殘留，再通過(guò)洗脫流程得到洗脫液后用膠體金試紙條進(jìn)行檢測(cè)，可以以最小的侵入方式刺穿植物，檢測(cè)內(nèi)部農(nóng)藥，適用于真實(shí)樣品的現(xiàn)場(chǎng)采樣和檢測(cè)，并防止樣品在檢測(cè)過(guò)程中被破壞。

29、本發(fā)明通過(guò)在mwnts的表面進(jìn)行表面處理，可以改善mwnts在有機(jī)溶劑或水溶劑中的分散性差的問(wèn)題，以提高其在溶劑中的分散性。

技術(shù)特征：

1.一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的制備方法，其特征在于，步驟s2中紫外線(xiàn)的照射條件為：照射強(qiáng)度為8-12mw/cm2，波長(zhǎng)為365nm，照射時(shí)間為40-50min；

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的制備方法，其特征在于，步驟s3中表面修飾的多壁碳納米管包括羥基修飾多壁碳納米管、羧基化多壁碳納米管和氨基化多壁碳納米管。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的制備方法，其特征在于，步驟s3中超聲浸泡的時(shí)間為25-35min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的制備方法，其特征在于，步驟s3中的室溫放置的時(shí)間為10-15h。

6.一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片，其特征在于，采用權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法制備。

7.按照權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法制備的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片在檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中毒死蜱和/或甲基對(duì)硫磷的應(yīng)用。

8.一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的應(yīng)用方法，其特征在于，所述應(yīng)用方法包括：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的應(yīng)用方法，其特征在于，

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片的應(yīng)用方法，其特征在于，微針貼片每次按壓后停頓6-12s。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種檢測(cè)農(nóng)藥殘留的微針貼片及其制備方法和應(yīng)用方法，涉及農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提出的微針貼片由經(jīng)表面修改的多壁碳納米管、聚乙二醇二丙烯酸酯、三乙胺和丙烯酰氯制備而成，制成的微針貼片具有出色的膨脹能力，能夠快速有效地吸收農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，將微針貼片按壓在農(nóng)產(chǎn)品表面，通過(guò)針尖進(jìn)入蔬菜細(xì)胞內(nèi)部來(lái)收集農(nóng)藥殘留，再通過(guò)洗脫流程得到洗脫液后用免疫層析試紙條進(jìn)行檢測(cè)，可以以最小的侵入方式刺穿植物或人體的角質(zhì)層，檢測(cè)內(nèi)部農(nóng)藥，適用于真實(shí)樣品的現(xiàn)場(chǎng)采樣和檢測(cè)，并防止樣品在檢測(cè)過(guò)程中被破壞。

技術(shù)研發(fā)人員：魏茂瓊,王麗,沙凌杰,陶匯海,蘭珊珊,林濤,劉宏程
受保護(hù)的技術(shù)使用者：云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19