本發(fā)明涉及微生物，尤其涉及一組耐鎘型降解石油烴菌群的復配方法及應用。

背景技術：

1、石油烴即石油中的烴類化合物，為石油的主要組成部分，石油中的芳香烴類物質(zhì)對人及動物的毒性極大，鎘(cd)是一種高度致癌的金屬，即使在低濃度下也能引起毒性反應。在對土壤中石油烴檢測的同時，往往伴隨著重金屬cd污染的出現(xiàn)，二者通過各種方式進入人體中，對人們帶來嚴重的健康問題。

2、對于上述問題，目前較為經(jīng)濟高效的方式為使用微生物菌劑，但是容易出現(xiàn)菌株對于重金屬cd污染脅迫下降解效能下降的問題，進而導致菌株死亡，無法實現(xiàn)在含鎘環(huán)境下對于石油烴的有效降解。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提出一組耐鎘型降解石油烴菌群的復配方法及應用，能夠在含鎘環(huán)境下實現(xiàn)對于石油烴的有效降解。

2、為了達到上述目的，本發(fā)明的采用如下技術方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種耐鎘型降解石油烴菌群的復配方法，包括：活化食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌，并制備食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液，食油假單胞菌的16srrna序列如seq?id?no：1所示，蒙氏假單胞菌的16s?rrna序列如seq?id?no：2所示。將食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液接種至石油烴降解培養(yǎng)基中，采用石油烴降解培養(yǎng)基培養(yǎng)食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌，得到培養(yǎng)后的食油假單胞菌和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌。分別對培養(yǎng)后的食油假單胞菌和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌進行耐鎘馴化，得到馴化后的食油假單胞菌液和馴化后的蒙氏假單胞菌液。通過馴化后的食油假單胞菌液和馴化后的蒙氏假單胞菌液復配得到耐鎘型降解石油烴菌群。

4、在第一方面的一種實現(xiàn)方式中，活化食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌，并制備食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液，包括：分別將食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌接種至lb液體培養(yǎng)基中，并培養(yǎng)至生長對數(shù)期。分別對生長至對數(shù)期的食油假單胞菌和生長至對數(shù)期的蒙氏假單胞菌進行多次離心后，收集食油假單胞菌菌體和蒙氏假單胞菌菌體。分別通過msm液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)食油假單胞菌菌體和蒙氏假單胞菌菌體的od600至1.0，得到食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液。

5、在第一方面的一種實現(xiàn)方式中，將食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液接種至石油烴降解培養(yǎng)基中，采用石油烴降解培養(yǎng)基培養(yǎng)食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌，包括：按照1：25~1：10的體積比，將食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液加入石油烴降解培養(yǎng)基中，并于第3-6天提取培養(yǎng)后的食油假單胞菌和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌。

6、在第一方面的一種實現(xiàn)方式中，石油烴降解培養(yǎng)基的配制方法為：以50ul：9.95ml的比例向石油烴中加入msm液體培養(yǎng)基，得到所述石油烴降解培養(yǎng)基。

7、在第一方面的一種實現(xiàn)方式中，分別對培養(yǎng)后的食油假單胞菌和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌進行耐鎘馴化，包括：分別通過msm液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)培養(yǎng)后的食油假單胞菌和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌的od600至1.0，得到培養(yǎng)后的食油假單胞菌液和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌液。分別向10?ml的lb液體培養(yǎng)基加入0ml、0.4?ml、0.8?ml、1.2?ml、1.6?ml以及2?ml濃度為1g/l的cd2+溶液，得到cd2+梯度濃度為0?mg/l、40?mg/l、80?mg/l、120?mg/l、160?mg/l以及200mg/l的含鎘lb液體培養(yǎng)基。再分別將培養(yǎng)后的食油假單胞菌液和培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌液依次以1：25~1：10的體積比接種至cd2+梯度濃度為0?mg/l、40?mg/l、80?mg/l、120?mg/l、160mg/l以及200?mg/l的含鎘lb液體培養(yǎng)基中。觀察含鎘lb液體培養(yǎng)基中食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌的生長情況，分別提取生長情況最好的耐鎘食油假單胞菌和耐鎘蒙氏假單胞菌。

8、在第一方面的一種實現(xiàn)方式中，通過馴化后的食油假單胞菌液和馴化后的蒙氏假單胞菌液復配得到耐鎘型降解石油烴菌群，包括：分別通過msm液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)耐鎘食油假單胞菌和耐鎘蒙氏假單胞菌的od600至1.0，得到耐鎘食油假單胞菌液和耐鎘蒙氏假單胞菌液。按照體積比1：0.8~1：1.2將耐鎘食油假單胞菌液和耐鎘蒙氏假單胞菌液混合，得到耐鎘型降解石油烴菌群。

9、第二方面，本發(fā)明提供一組耐鎘型降解石油烴菌群的應用，基于第一方面提供的方法復配得到的一組耐鎘型降解石油烴菌群，用于降解石油烴。

10、在第二方面的一種實現(xiàn)方式中，該耐鎘型降解石油烴菌群用于降低含鎘污染土壤和含鎘污染水體中的石油烴。

11、本發(fā)明的有益效果為：

12、本發(fā)明提供的耐鎘型降解石油烴菌群的復配方法，對食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌進行活化后，分別對上述兩種菌進行石油烴降解實驗和耐鎘馴化，篩選出生長情況最好的耐鎘食油假單胞菌和耐鎘蒙氏假單胞菌，從而進行復配得到耐鎘型降解石油烴菌群，該菌群相對于單菌，既能實現(xiàn)對于石油烴的有效降解，還能適應于含鎘的降解環(huán)境，進而能夠在含鎘環(huán)境下實現(xiàn)對于石油烴的有效降解。

技術特征：

1.一組耐鎘型降解石油烴菌群的復配方法，其特征在于，包括：

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化食油假單胞菌和蒙氏假單胞菌，并制備食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液，包括：

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述食油假單胞菌液和所述蒙氏假單胞菌液接種至石油烴降解培養(yǎng)基中，采用石油烴降解培養(yǎng)基培養(yǎng)所述食油假單胞菌和所述蒙氏假單胞菌，包括：

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述石油烴降解培養(yǎng)基的配制方法為：

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，分別對所述培養(yǎng)后的食油假單胞菌和所述培養(yǎng)后的蒙氏假單胞菌進行耐鎘馴化，包括：

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述通過馴化后的食油假單胞菌液和馴化后的蒙氏假單胞菌液復配得到耐鎘型降解石油烴菌群，包括：

7.基于權利要求1~6任一項所述方法復配得到的一組耐鎘型降解石油烴菌群的應用，其特征在于，用于降解石油烴。

技術總結
本發(fā)明提供了一組耐鎘型降解石油烴菌群的復配方法及應用，屬于微生物技術領域，既能實現(xiàn)對于石油烴的有效降解，還能適應于含鎘的降解環(huán)境，進而能夠在含鎘環(huán)境下實現(xiàn)對于石油烴的有效降解。該方法先制備食油假單胞菌液和蒙氏假單胞菌液，再分別通過石油烴降解培養(yǎng)基和耐鎘馴化，得到馴化后的食油假單胞菌液和馴化后的蒙氏假單胞菌液；最后復配上述兩種菌液得到耐鎘型降解石油烴菌群。

技術研發(fā)人員：王建,孫少林,周賢,李凱,高彥征
受保護的技術使用者：南京農(nóng)業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/19