專利名稱:α的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的作為α4抑制劑(包括α4β7以及α4β1)的苯基丙氨酸衍生物，可介導(dǎo)粘附而被用以治療如哮喘、糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病以及其他涉及白細(xì)胞浸潤至胃腸道或其他表皮組織的疾病，例如皮膚、泌尿道、呼吸道及關(guān)節(jié)滑膜。
本發(fā)明的抑制劑亦可以用于治療白細(xì)胞侵潤至其他組織，包括肺、血管、心臟和神經(jīng)系統(tǒng)以及移植器官，例如腎臟、肝臟、胰臟、心臟、腸以及血管。
背景技術(shù)：
白細(xì)胞粘附于內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)蛋白是免疫及炎癥的基本過程，且涉及多重粘附相互作用。此過程這早期反應(yīng)包括對整聯(lián)蛋白的需求性改變后白細(xì)胞的旋轉(zhuǎn)，其造成隨后的穩(wěn)固粘附(參考Butcher，Cell 671033-1036(1991)；Harlen，Blood 3513-525，1985；Hemler，Annu.Rev.Immunol.8365-400(1990)；Osborn，Cell 623-6(1990)；shimizu et al.，Immunol.Rev.114109-143(1990)；Springer，Nature346425-434，(1990)；以及Springer，Cell 76301-314(1994))。對應(yīng)于趨化因子的反應(yīng)，白細(xì)胞必須經(jīng)過兩個(gè)相鄰內(nèi)皮細(xì)胞移行并進(jìn)入部分由細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖連蛋白(FN)(Wayner et al.，J.CellBiol.1051873-1884，1987)與膠原蛋白(CN)(參見Brnstein etal.，Ann.Rev.Biochem.49957-1003(1980)；Miller，Chemistry of thecollagens and their distribution，in“Extracellular MatrixBioch mistry”，K.A.Piez and A.H.Reddi，editors，Elsevier，Amsterdam，41-78(1983))構(gòu)成的組織。參與這些反應(yīng)的重要鑒別分子屬于整聯(lián)蛋白基因超家族(參見Hemler，Annu.Rev.Immunol.8365-400(1990)Hynes，Cell 48549-554(1987)Shimizu et al.，Immunol.Rev.114109-143(1990)；和Sp ringer，Nature 346425-434(1990))。
整聯(lián)蛋白為由非共價(jià)鍵結(jié)合亞單位，即α與β亞單位組合而成的異二聚物(參見Hemler，Annu.Rev.Immunol.8365-400(1990)；Hynes，Cell 48549-554(1987)；Shimizu et al.，Immunol.Rev.114109-143(1990)；和Springer，Nature 346425-434(1990))。至今，已有8個(gè)整聯(lián)蛋白的β亞單位被鑒定出來，其可與16個(gè)不同的α亞單位形成23個(gè)不同的整聯(lián)蛋白。α4β1整聯(lián)蛋白，又名VLA-4(Very Late Antigeh-4)可以在多種細(xì)胞表達(dá)，包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞(參見Hemler et al.，J.Bio.Chem.26211478-11485(1987)；和Bochner etal.，J.Exp.Med.1731553-1556(1991))，且可能在炎癥反應(yīng)時(shí)在這些細(xì)胞的募集中扮演重要角色。VLA-4為血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)(Elices et al.，Cell 60577-584(1990))以及和連接片段1(CS-1)，一種FN的A鏈的交替轉(zhuǎn)接區(qū)域(Wayne et al.，J.Cell Biol 1091321-1330(1989))的受體。
β7整聯(lián)蛋白亞單位首次由Erle等人克隆(Erle etal.，J.Biol.Chem.26611009-11016(1991))，其只表達(dá)于白細(xì)胞且已知與兩個(gè)不同的α亞單位，α4(Ruegg et al.，J.Cell Biol.117179-189(1992))和αE(Cerf-Bensussan et al.，Eur.J.Immunol.22273-277(1992)；和Kilshaw et al.Eu r.J.Immunol.212591-2597(1991))有關(guān)。
α4β7復(fù)合物具有三個(gè)已知配體(VCAM-1，CS-1，MAdCAM-1)。其中顯示對于α4β7具有獨(dú)特特異性的配體為粘膜地址素細(xì)胞附著分子-1(MAdCAM-1)(參見Andrew et al.，J.Immunol.1533847-3861(1994)；Briskin et al.，Nature 363461-464(1993)；和Shyjan et al.，J.Immunoul.1562851-2857(1996))。MAdCAM-1在皮爾氏斑高內(nèi)皮小靜脈、腸系膜淋巴結(jié)以及腸固有層和乳腺小靜脈高度表達(dá)(Berg et al.，Immunol.Rev.1055-18(1989))。整聯(lián)蛋白α4β7與MAdCAM-1已經(jīng)顯示了在介導(dǎo)淋巴細(xì)胞達(dá)到正常小腸中的重要性(Holzman et al.，Cell5637-46(1989))。
α4β7的第二個(gè)配體為CS-1(參見Guan et al.，Cell 6053-61(1990)；和Wayner et al.，J.Cell Biol.1091321-1330(1989))。CS-1中的細(xì)胞結(jié)合位置是由25個(gè)氨基酸組成，其中羧基端氨基酸殘基EILDVPST形成鑒別基元(參見Komoriya et al.，J.Biol.Chem.26615075-15079(1991)；和Wayner et al.，J.Cell Biol.116489-497(1992))。
α4β7的第三個(gè)配體為血管細(xì)胞附著分子-1(VCSM-1)，一種在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子誘發(fā)的蛋白(參見Elices et al.，Cell60577-584(1990)；Ruegg et al.，J.Cell Biol.117179-189(1992))。目前還不確定MAdCAM-1、VCAM-1與CS-1是否結(jié)合于α4β7的相同位置。采用單克隆抗體檢測，Andrew等人發(fā)現(xiàn)與α4β7與其三種配體的反應(yīng)涉及不同但有重迭的表位(Andrew et al.，J.Immunol.1533847-3862(1994))。VCAM-1與CS-1(參見Elices et al.，Cell60577-584(1990))為α4β7與α4β1共享的配體。此外，也已知α4β1結(jié)合于骨橋蛋白，一種在動脈粥樣硬化斑中的上調(diào)蛋白(Bayless etal.，J.Cell Science 1111165-1174(1998))。
本發(fā)明的實(shí)用性許多體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示α4整聯(lián)蛋白(α4β1/α4β7)在許多疾病的致病機(jī)理中扮演關(guān)鍵性角色?？功?單克隆抗體已被試驗(yàn)于多種疾病模型中?？功?抗體的效力也在試驗(yàn)自體免疫腦脊髓炎的大鼠和小鼠模型中得到證明(參見Baron et al.，J.Exp.Med.17757-68(1993)；和Yednock et al.，Nature 35663-66(1992))。有大量研究是評估α4在過敏性呼吸道中扮演的角色的(Abraham et al.，J.Clin，Invest.93776-787(1994)；Bochneret al.，J.Exp.Med.1731553-1556(1991)；Walsh et al.，J.Immnnol.1463419-3423(1991)；和Weg et al.，J.Exp.Med.177561-566(1993))。例如，抗α4單克隆抗體在幾種肺抗原攻擊模型具有效果(參見Abrahamet al.，J.Clin.Invest.93776-787(1994)；和Weg et al.，J.Exp.Med.177561-566(1993))。當(dāng)施予抗α4抗體或抗α4β7抗體于具有自發(fā)性慢性結(jié)腸炎的狨猴時(shí)，狨猴會顯示出結(jié)腸炎的發(fā)生顯著減低(參見Bell etal.，J Immunol.1514790-4802(1993)；Podolsky et al.，J.Clin.Invest.92372-380(1993)；Hesterberg et al.，Gastroenterology1111373-1380(1996))。在以CD45RB高CD4+T細(xì)胞重組的免疫不全小鼠(scid mice)中根據(jù)組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)單株抗β7抗體或MAdCAM-1會阻斷淋巴細(xì)胞過流至結(jié)腸并減低結(jié)腸發(fā)炎的嚴(yán)重程度(參見Picarella et al.，J.Immunol.1582099-2106(1997))?？功?單克隆抗體抑制胰島炎并可延遲非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的糖尿病的發(fā)作(參見Baron et al.，J Clin.Invest.931700-1708(1994)；Burkly et al.，Diabetes43529-534(1994)；和Yang et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA9010494-10498(1993))。其他與α4有關(guān)的疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(參見Laffon et al.，J.Clin.Invest.88546-552(1991)；和Morales-Ducret et al.，J Immunol.1491424-1431(1992))、動脈粥狀硬化癥(參見Cybulsky et al.，Science 251788-791(1991))、同種異體移植的排斥現(xiàn)象(Isobe et al.，J.Immunol.1535810-5818(1994))以及腎炎(Allen et al.，J.Immunol.1625519-5527(1999))。延遲型過敏反應(yīng)(Issekutz，J，Immunol.1474178-4184(1991))、接觸性過敏反應(yīng)(參見Chisholm et al.，Eur.J.Immunol.23682-688(1993))和Ferguson etal.，J.Immunol.1501172-1182(1993))，以及血管內(nèi)膜增生(Lumsden etal.，J Vasc.Surg.2687-93(1997))也會被抗α4抗體阻斷。(請參考優(yōu)秀的涉及疾病中α4的體內(nèi)研究綜述Lobb et al.，J.Clin.Invest.941722-1728(1995))。
白細(xì)胞粘附到發(fā)炎的滑膜推測是由α4β1/VCAM-1相互作用所支配，然而，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液膜也發(fā)現(xiàn)有α4β7陽性T細(xì)胞增加的情形(McMurray，Semin.Arthritis Rheum.25215-233(1996)。推測這種α4β7表達(dá)的增強(qiáng)可能與這種疾病的發(fā)展和長期存在有關(guān)(參見Lazarovits et al.，J.Immunol.1516482-6489(1993))。在NOD小鼠中，MAdCAM-1會高度表達(dá)于發(fā)炎胰腺內(nèi)小島的內(nèi)皮小靜脈，其提示α4β7在糖尿病扮演的角色(Yang et al.，Diabetes 461542-1547(1997))。在染病的組織中α4β1/α4β7在各種白細(xì)胞上的表達(dá)以及α4β1/α4β7陽性細(xì)胞的存在暗示著這兩種受體可能在細(xì)胞募集至多處發(fā)炎位置中扮演重要角色。例如，抗α4單克隆抗體在如小鼠、大鼠或豚鼠以卵白蛋白誘發(fā)哮喘的幾個(gè)肺臟抗原攻擊模型中具有效果(Pretolani et al.，J.Exp.Med.180795-805(1994)，F(xiàn)ryer et al.，J.Clin.Invest.992036-2044；和Henderson et al.，J.Clin.Invest.1003083-3092(1997))。在淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞上的α4β7與α4β1的表達(dá)以及體內(nèi)試驗(yàn)研究顯示α4β7/α4β1介導(dǎo)人類嗜酸性粒細(xì)胞附著于VCAM-1、CS-1和MAdCAM-1(Walshet al.，Immunology 9112-119(1996))，由此提示α4為治療哮喘的適當(dāng)治療靶。總而言之，上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示整聯(lián)蛋白α4β7與α4β1可能在多種炎癥疾病中扮演重要角色。
在體內(nèi)試驗(yàn)中采用抗整聯(lián)蛋白的單克隆抗體證明許多整聯(lián)蛋白的確是用于炎癥、免疫介導(dǎo)的疾病、心血管疾病及器官移植的有效的治療靶。
此外，也有文獻(xiàn)指出，一種可口服生物利用的、非勝肽小分子α4的拮抗物也可以用于治療或預(yù)防例如哮喘、炎癥性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥及其他疾病(參見WO99/36393)。
本發(fā)明目的即是確定出一種可口服生物利用的且具有強(qiáng)效的α4整聯(lián)蛋白的小分子拮抗劑。本發(fā)明公開了對于α4介導(dǎo)的與MAdCAM-1、VCAM-1或CS-1的粘附具有強(qiáng)抑制作用的小分子，且這些小分子化合物可用于治療或預(yù)防炎癥疾病和/或過敏疾病。
發(fā)明概要本發(fā)明涉及新的式[I]苯基丙氨酸衍生物
其中X1為鹵素原子，X2為鹵素原子，Q為-CH2-基團(tuán)或-(CH2)2-基團(tuán)，Y為C1-6烷基，以及CO2R為可被酯化的羧基；或其藥學(xué)上可接受鹽。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括治療有效劑量的式[I]化合物或其藥學(xué)上可接受鹽。
此外，本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防由α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附引起的疾病的方法，其包括施予式[I]化合物或其藥學(xué)上可接受鹽。
發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物可以基于其中不對稱原子而以光學(xué)異構(gòu)體的形式存在，且本發(fā)明包括這些光學(xué)異構(gòu)體及其混合物。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，可被酯化的羧基包括羧基及酯化的羧基，后者可以在身體內(nèi)被水解提供羧基。這些酯化的羧基的實(shí)例如取代或未取代C2-7烷氧羰基、例如甲氧羰基、芐氧羰基、對-氨基芐氧羰基等等。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，鍵的R/S構(gòu)型不需固定。本發(fā)明的化合物可以為具有一種構(gòu)型的化合物或是具有不同構(gòu)型的混合物。
在本發(fā)明的化合物中，優(yōu)選的化合物是如式[I-1]的化合物 其中的符號定義與前述相同。
在化合物[I-1]更優(yōu)選的實(shí)施例中，X1為氯原子或氟原子，X2為氯原子或氟原子，Y為C1-4的烷基，CO2R為羧基或C2-7烷氧羰基。
在式化合物[I-1]的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，X1為氯原子或氟原子，X2為氯原子或氟原子，Q為-CH2-，Y為甲基，乙基，或正-丙基，CO2R為羧基、甲氧羰基、乙氧羰基、或叔丁氧羰基。
特別優(yōu)選的式[I-1]化合物為其中X1為氟原子，X2為氯原子或氟原子、Q為-CH2-，Y為甲基或乙基，并且CO2R為羧基或C2-7烷氧羰基如甲氧羰基和乙氧羰基。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物選自以下N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯基丙氨酸[即(2S)-2-[(2，6-二氟苯甲?；?氨基]-3-[4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)苯基]丙酸]；N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯基丙氨酸[即(2S)-2-[(2-氯-6-氟苯甲?；?氨基]-3-[4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)苯基]丙酸]；N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯基丙氨酸[即(2S)-2-[(2-氯-6-氟苯甲?；?氨基]-3-[4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)苯基]丙酸]；N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯基丙氨酸[即(2S)-2-[(2，6-二氟苯甲酰基)氨基]-3-[4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)苯基]丙酸]；或是其C1-6的烷基酯；或是其藥學(xué)上可接受鹽。
本發(fā)明的化合物可以以游離形式或是其藥學(xué)可接受鹽的形式使用。藥學(xué)上可接受鹽包括與有無機(jī)堿、有機(jī)堿或堿性氨基酸形成的鹽(例如，堿金屬鹽如鈉鹽及鉀鹽；堿土金屬鹽，如鎂鹽及鈣鹽；或與胺形成的鹽，如銨鹽、三乙基銨鹽、與賴氨酸形成的鹽等等)以及與有無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽(例如，鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、氫溴酸鹽、甲基磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、醋酸鹽、馬來酸鹽)。藥學(xué)上可接受鹽也包括其分子內(nèi)鹽，或其溶合物或水合物。
本發(fā)明化合物的特征為于聯(lián)苯基核4′位置引進(jìn)被C1-6烷氧基取代的C1-2烷基，以及二鹵取代的苯甲?；鶊F(tuán)與2′，6′-二(C1-6烷氧基)-4′-(C1-6烷氧基取代C1-2烷基)聯(lián)苯基核的組合，在先前發(fā)表的文獻(xiàn)中，沒有特別揭露這些特征。
本發(fā)明的化合物對于α4介導(dǎo)的細(xì)胞粘附具有強(qiáng)抑制作用，且口服后顯示良好的生物可利用性，其反映出全面性的改善a)代謝穩(wěn)定性，b)血漿蛋白的結(jié)合，以及C)水溶性。特別是在聯(lián)苯基核的4′位置引進(jìn)被C1-6烷氧基取代的C1-2烷基會降低先前公開中對于一些化合物所觀察到的快速代謝。本發(fā)明化合物降低了肝清除率，因而改善生物利用性。
因此，本發(fā)明化合物顯示良好針對由α4介導(dǎo)的細(xì)胞附著所引起的不利的狀況的體內(nèi)能力。
本發(fā)明化合物可以用于治療或預(yù)防在哺乳類，例如人類的α4(包括α4β1與α4β7)附著介導(dǎo)的狀況的方法中。
另一方面，本發(fā)明化合物可以用于治療患有與白細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞)浸潤至表達(dá)分子MAdCAM-1和/或VCAM-1的組織(包括組織中白細(xì)胞募集和/或蓄積)有關(guān)的疾病的個(gè)體(例如哺乳類，如人或其他靈長類)。例如，炎癥疾病，包括與白細(xì)胞浸潤至胃腸道(包括腸相關(guān)內(nèi)皮)、其他粘膜組織或表達(dá)分子MAdCAM-1的組織(例如腸相關(guān)組織，如小腸與大腸固有層的小靜脈，以及乳腺(例如泌乳時(shí)的乳腺))等有關(guān)的疾病可以依據(jù)本發(fā)明方法治療。相似地，由于白細(xì)胞結(jié)合于表達(dá)分子VCAM-1細(xì)胞(例如內(nèi)皮細(xì)胞)而導(dǎo)致的患有與白細(xì)胞浸潤組織相關(guān)疾病的個(gè)體也可以依本發(fā)明方法治療。
該治療或預(yù)防α4(包括α4β1與α4β7)依賴性粘附介導(dǎo)狀況或與白細(xì)胞浸潤相關(guān)疾病的方法包括施與哺乳類或人類患者有效劑量的本發(fā)明化合物以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
因此，本發(fā)明的化合物可以用于治療或預(yù)防如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)，炎癥狀況哮喘；如鼻炎等過敏狀況；成人呼吸窘迫；愛滋病癡呆；阿爾海默癥；心血管疾??；栓塞或有害性血小板聚集；栓塞溶解后的再閉塞；再灌注的損傷；牛皮癬；如濕疹、接觸性皮膚炎以及異位性皮炎等皮膚炎性狀況；糖尿病(例如胰島素依賴性糖尿病、自體免疫糖尿病)；多發(fā)性硬化癥；系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)；如潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏病(局限性回腸炎)及(例如直腸結(jié)腸切除術(shù)或回腸肛門吻合術(shù)的后發(fā)生的)囊炎等炎癥性腸病；如乳糜瀉、非熱帶性口炎性腹瀉、與血清陰性關(guān)節(jié)病相關(guān)的腸病、淋巴細(xì)胞性或膠原性結(jié)腸炎、以及嗜酸性粒細(xì)胞胃腸炎等與白細(xì)胞浸潤至胃腸道相關(guān)的疾病，與白細(xì)胞浸潤至其他如皮膚、泌尿道、呼吸道以及關(guān)節(jié)滑膜等襯有上皮的組織有關(guān)的疾病，胰腺炎，乳腺炎，肝炎，膽囊炎，膽管炎，膽管周炎(膽管與肝臟周圍組織)，支氣管炎，竇炎，等導(dǎo)致間質(zhì)性纖維化的肺臟炎癥性疾病如過敏性肺炎；膠原病(于SLE與RA中)，結(jié)節(jié)病，骨質(zhì)疏松癥，動脈粥樣硬化癥，腫瘤性疾病包括腫瘤性或癌性生長轉(zhuǎn)移，創(chuàng)傷(創(chuàng)傷愈合的增進(jìn))，如視網(wǎng)膜脫落，過敏性結(jié)膜炎及自身免疫性眼色素層炎等某些眼疾，謝格連氏綜合征，移植后的(慢性及急性)排斥現(xiàn)象，宿主抗移植體或移植體抗宿主的病癥，血管內(nèi)膜增生，血管硬化癥(包括移植后移植體的血管硬化)，如經(jīng)皮轉(zhuǎn)移腔性冠狀血管成造形術(shù)(Percutaneous transluminal coronaryangiopathy，PTCA)及經(jīng)皮轉(zhuǎn)移腔性動脈再造管腔手術(shù)后的再梗塞或再狹窄，腎炎，腫瘤血管生成，惡性腫瘤，多發(fā)性骨髓瘤及骨髓瘤誘發(fā)的骨質(zhì)再吸收，以及如休克、創(chuàng)傷性腦損傷和脊髓損傷等中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。
本方法優(yōu)選是用于哮喘、如鼻炎等過敏性癥狀，如潰瘍性結(jié)腸炎及克隆氏病等炎癥性腸病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，異位性皮炎，多發(fā)性硬化癥及移植后排斥現(xiàn)象等的治療或預(yù)防。
適于用于治療的化合物可采用適當(dāng)?shù)膭游锬Ｐ瓦M(jìn)行體內(nèi)評估。適當(dāng)?shù)难装Y動物模型公開出版物中已有披露。例如NOD小鼠提供胰島素依賴性糖尿病的動物模型。CD45RBHiSCID小鼠模型提供類似克隆氏病與潰瘍性結(jié)腸炎的模型(Powrie et al.，Immunity1553-562(1994))。白頂狨猴可產(chǎn)生自發(fā)性、常為慢性的結(jié)腸炎，其在臨床上與組織學(xué)上類似于人類的潰瘍性結(jié)腸炎(Masara et al.，Gastroenterology 8813-19(1985))。鼠類結(jié)腸炎的糊精硫酸鈉(DSS)模型可由DSS加入飲用水中引入。DSS結(jié)腸的生理學(xué)與組織學(xué)變化在文獻(xiàn)中已被充分描述，且令人聯(lián)想到人類的潰瘍性結(jié)腸炎(Cooper etal.，Laboratory Investig.69238-249(1993))。發(fā)生類似人類炎癥性腸病的腸損傷的IL-10基因敲除小鼠也曾被報(bào)告(Scrober et al.，Cell75203-205(1993))。
雖然本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給予，然而其優(yōu)選地是以藥學(xué)組合物的形式給予，其組合物含有治療有效劑量的通式I化合物以及藥學(xué)上可接受載體或稀釋劑。
載體必須可接受的含義是其不能傷害藥物接受者。藥學(xué)上可接受載體或稀釋劑可以如粘合劑(例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮)、賦形劑(如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鉀、山梨醇、甘氨酸)、潤滑劑(如硬酯酸鎂、滑石、聚乙二醇、二氧化硅)、崩解劑(如馬鈴薯淀粉)、濕潤劑(如月桂基硫酸鈉)等等。
藥學(xué)組合物包括適于以口服、經(jīng)肺給予、經(jīng)眼給予、直腸給予、注射給予(包括皮下、肌肉、和靜脈注射)、關(guān)節(jié)內(nèi)給予、局部給予、鼻腔吸入(例如以氣溶膠)或頰給予等各種形式。這些配方包括本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員已知的長效性配方。給予方式中以口服與注射為佳。
藥學(xué)組合物可以方便地以單位劑量的形式出現(xiàn)，也可以任何本領(lǐng)域人員熟知的方法制備。一般而言，該配制是均一地和緊密地將活性成分引入相關(guān)的液態(tài)載體或細(xì)分的固態(tài)載體中或是兩者皆有，如需要再將產(chǎn)品成形成所需形式。
適于口服的本發(fā)明組合物可以為分散單元如膠囊、扁囊劑、片劑或錠劑，每一個(gè)含有事先決定劑量的本發(fā)明化合物，或是為粉狀或顆粒狀形式，或是為水溶液中的溶劑或懸浮液形式。其他用途的制劑也可以為非水溶液的液體；例如水包油的乳劑或油包水乳劑的形式、氣溶膠形式、或霜?jiǎng)┗蜍浉嘈问交蚪n的透皮貼劑用于經(jīng)皮施與本發(fā)明化合物到需要治療的患者。本發(fā)明的化合物也可以大丸劑、干藥糖錠或糊劑形式施與須治療的患者。
本發(fā)明化合物也可以足夠劑量施與須治療患者而減緩或預(yù)防α4-介導(dǎo)的細(xì)胞粘附。另一方面，本發(fā)明化合物可以足夠劑量施與患者以達(dá)到所需治療及/或預(yù)防效果，或以足以降低或預(yù)防MAdCAM-1/VCAM-1介導(dǎo)的結(jié)合至MAdCAM-1/VCAM-1配體的劑量，從而抑制白細(xì)胞附著以及浸潤和相關(guān)的細(xì)胞反應(yīng)。
本發(fā)明的化合物與組合物可以以有效地至完全或部分減緩不希望的癥狀的量施與患有前述病癥的患者。這些癥狀可能系因白細(xì)胞附著或細(xì)胞活化而造成，而這些一般被期待由于內(nèi)皮細(xì)胞表面增加的VCAM-1及/或MAdCAM-1表達(dá)的結(jié)果而發(fā)生。增加VCAM-1、MAdCAM-1和/或CS-1的表達(dá)增加可能由于正常炎癥反應(yīng)或異常炎癥狀態(tài)所致。不論是何者，有效劑量的本發(fā)明化合物皆可以減低由于內(nèi)皮細(xì)胞增加的VCAM-1及/或MAdCAM-1表達(dá)而增加的細(xì)胞附著現(xiàn)象。減少病程中觀察到的附著達(dá)到50％時(shí)可被視為附著癥狀的有效減低。優(yōu)選地，可以達(dá)到活體外附著減低至90％。最優(yōu)選地，由VCAM-1、MAdCAM-1和/或CS-1介導(dǎo)的附著現(xiàn)象可被有效劑量完全消除。臨床上，某些情況顯示，化合物的效果可以由白細(xì)胞減少浸潤到組織或受創(chuàng)處或發(fā)炎處而被觀察到。為達(dá)到治療效果，可施與本發(fā)明的化合物或組合物以提供有效減緩或消除白細(xì)胞附著或細(xì)胞活化以減輕不期望癥狀的劑量。
要達(dá)到治療效果的化合物[I]劑量依特定化合物、施與途徑、治療對象的年齡、性別、體重及當(dāng)時(shí)狀況、以及治療的特定不適或疾病而變化。對于發(fā)病或可能發(fā)病的哺乳對象而言，化合物[I]適當(dāng)?shù)拿咳談┝炕蚱渌帉W(xué)上可接受鹽的劑量為每公斤哺乳動物體重從0.1至100毫克，優(yōu)選每公斤哺乳動物體重0.3至30mg。當(dāng)由非腸道途經(jīng)施與時(shí)，其劑量范圍可以為每公斤體重0.1至10毫克，以每公斤哺乳動物體重0.3至3毫克為佳。當(dāng)經(jīng)口給予時(shí)，適當(dāng)?shù)拿咳談┝繛槊抗矬w重施與該化合物1至100毫克的范圍，但以每公斤體重施與該化合物2至30毫克為佳，最優(yōu)選的是每公斤體重施與該化合物1至10毫克、一日二到三次。當(dāng)局部施與時(shí)，例如給予皮膚或眼睛，式[I]的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的適當(dāng)劑量為每公斤體重施予0.1至100ug的范圍。
式[I]化合物或其藥學(xué)上可接受鹽可以由下述步驟獲得(1)轉(zhuǎn)化式[II]化合物 其中CO2R1為酯化羧基，且其他符號與前述定義相同，使之成為式(Ia)化合物 其中的符號與前述定義相同，(2)需要時(shí)，可轉(zhuǎn)化式[Ia]化合物的酯化羧基成為羧基，(3)若有進(jìn)一步的需要，可將生成的化合物轉(zhuǎn)化為其藥學(xué)上可接受鹽。
步驟1轉(zhuǎn)化化合物[II]成為化合物[Ia]時(shí)可以用下述方法A至方法D中的一種來進(jìn)行。
步驟2轉(zhuǎn)化酯化羧基CO2R1成為羧基時(shí)可以由常規(guī)方法進(jìn)行，其根據(jù)其要轉(zhuǎn)化的酯化羧基類型而選擇，例如采用堿(即氫氧化堿金屬，如LiOH與NaOH)、或酸(如HCL)的水解、用酸(例如TFA)的處理。
步驟3將生成的化合物[I]轉(zhuǎn)化為其藥學(xué)上可接受鹽可以由常規(guī)方法進(jìn)行，采用堿(例如無機(jī)堿如NaOH，有機(jī)堿如三乙基胺或堿性氨基酸如賴氨酸)或酸(如無機(jī)酸如HCl、HNO3和H2SO4，有機(jī)酸如醋酸及馬來酸，或酸性氨基酸如天門冬酸與谷氨酸)。
化合物[II]轉(zhuǎn)化成為化合物[Ia]可以由下述方法實(shí)現(xiàn)(方法A-D)方法A化合物[Ia]其中Q為一-CH2-，可以由下列步驟獲得(1)氧化化合物[II]以提供化合物[III] 其中各符號于前述定義相同，以及(2)使化合物[III]與式[IV]化合物進(jìn)行還原縮合Y-OH [IV]其中Y與前述相同。
步驟1氧化還原反應(yīng)可以由常規(guī)方法在合適的溶劑中采用氧化劑帶有或不帶堿而進(jìn)行。
氧化劑可以擇自常規(guī)的氧化劑，例如MnO2、SO3·吡啶、KMnO4、PCC、PDC等。
堿可以擇自常規(guī)有機(jī)堿，例如三烷基胺(如Et3N、DIEA)。
溶劑可以擇自任何不影響氧化反應(yīng)的溶劑，例如鹵代甲烷(如CH2Cl2、CHCl3)、芳香碳?xì)浠衔?例如苯、甲苯)、DMSO、水或其混合物。
反應(yīng)可以在溫度范圍介于-50℃至50℃進(jìn)行，優(yōu)選地是在室溫進(jìn)行。
步驟2化合物[III]與[IV]的縮合反應(yīng)可以在溶劑中或無溶劑下的在還原劑和脫水劑存在下進(jìn)行。
還原劑可以擇自常規(guī)還原劑，例如三烷基硅烷(如三乙基硅烷)等。
脫水劑包括硫酸、三氟乙酸等。
溶劑可以由任何不會影響反應(yīng)的溶劑中選出，例如醚(如二噁烷、THF)、芳香碳?xì)浠衔?如苯、甲苯)、鹵代甲烷(如CH2Cl2與CHCl3)或其混合物。
反應(yīng)可以在溫度范圍介于-50℃至50℃進(jìn)行，優(yōu)選地是在0℃至室溫進(jìn)行。
方法B化合物[Ia]可以由下述方法制得(1)將化合物[II]轉(zhuǎn)化成為式[V]化合物 其中Z為一離去基團(tuán)，且其他符號于前述相同。
(2)化合物[V]與化合物[IV]反應(yīng)。
作為離去基團(tuán)的Z優(yōu)選為鹵素原子(如氯原子、溴原子及碘原子)、烷烴磺酰氧基團(tuán)(如甲烷磺?；?或芳基磺酰氧基團(tuán)(如苯磺?；皩妆交酋；?。
步驟1化合物[II]轉(zhuǎn)化成為化合物[V]可以通過鹵素化或磺?；衔颷II]而進(jìn)行。
鹵素化反應(yīng)可以由常規(guī)方法采用在合適的溶劑中鹵化劑加入或不加入堿而進(jìn)行。
鹵素化劑可以擇自常規(guī)鹵化劑，例如三鹵化磷(如三溴化磷、三氯化磷)、以及四鹵甲烷(如CBr4)和三苯基磷的組合。
堿可以擇自常規(guī)無機(jī)堿，例如堿金屬碳酸鹽(如Na2CO3、K2CO3)、堿金屬碳酸氫鹽(如NaHCO3、KHCO3)等。
溶劑可以擇自任何不影響縮合反應(yīng)的溶劑，例如鹵代甲烷(如CH2Cl2與CHCl3)、醚(如二噁烷、乙醚、THF)、DMF、DMSO或其混合物。
反應(yīng)可以在溫度范圍介于-50℃至50℃進(jìn)行，優(yōu)選地是在0℃至室溫進(jìn)行。
磺?；磻?yīng)可以由常規(guī)方法在適當(dāng)溶劑中采用磺?；瘎┖蛪A而進(jìn)行。
磺?；瘎褡酝闊N磺酰鹵化物和芳基磺酰鹵化物，如甲烷磺酰氯、苯磺酰氯、對甲苯磺酰氯等。
堿擇自有機(jī)堿(如三烷基胺，如Et3N、DIEA、DBU與4-甲基嗎啉，以及吡啶)、堿金屬碳酸鹽(如Na2CO3、K2CO3)、堿金屬碳酸氫鹽(如NaHCO3、KHCO3)、堿金屬氫氧化物(如NaOH、KOH)、堿土金屬氫氧化物(如Ba(OH)2)等。
溶劑可以擇自任何不影響反應(yīng)的溶劑，例如鹵代甲烷(如CH2Cl2與CHCl3)、醚(如二噁烷、乙醚、THF)、DMF、DMSO或其混合物。
反應(yīng)可以在溫度范圍介于-50℃至50℃進(jìn)行，優(yōu)選地是在-20℃至0℃至0℃進(jìn)行。
步驟2化合物[V]與化合物[IV]的反應(yīng)可以在合適的溶劑或無溶劑下于堿和/或去鹵化劑如銀化合物(如氧化銀(I)(Ag2O)與氧化銀(AgO))(Ortiz et al.，Synth.Commun.23749-756(1993))存在或不存在下進(jìn)行。
優(yōu)選地是，反應(yīng)可以在適當(dāng)溶劑中在銀化合物存在并無堿下進(jìn)行。
堿可以擇自常規(guī)無機(jī)堿和有機(jī)堿，如堿金屬碳酸鹽(如Na2CO3、K2CO3)、堿金屬碳酸氫鹽(如NaHCO3、KHCO3)，三甲基胺(如Et3N)、吡啶等。
溶劑可以擇自任何不影響縮合反應(yīng)的溶劑，例如芳香碳?xì)浠衔?苯、甲苯)、鹵代甲烷(如CH2Cl2與CHCl3)、醚(如二噁烷、乙醚、THF)、DMF、DMSO或其混合物。
反應(yīng)可以在溫度范圍介于室溫至100℃進(jìn)行，方法C用式[VI]化合物烷基化化合物[II]而制得化合物[Ia]Y-Z [VI]其中符號與前述相同。
烷化反應(yīng)可以于存在有或沒有堿和/或去鹵化劑如銀化合物(如氧化銀(I)(Ag2O)與氧化銀(AgO))(Choi et al.，J.Med.Chem.391907-1916(1996))的情況下于溶劑中或無溶劑下進(jìn)行。反應(yīng)的進(jìn)行與方法B的步驟2相似。
方法D化合物[Ia]可以由化合物[II]與化合物[IV]縮合制得。
縮合反應(yīng)可以在合適的溶劑或無溶劑下于脫水劑存在下進(jìn)行。脫水劑系擇自常規(guī)脫水劑如硫酸、對甲苯磺酸等。
溶劑可以擇自任何不影響縮合反應(yīng)者，例如芳香碳?xì)浠衔?苯、甲苯)、鹵代甲烷(如CH2Cl2與CHCl3)、醚(如二噁烷、乙醚、THF)、DMF、DMSO、MeCN或其混合物。
反應(yīng)可以在溫度范圍介于室溫至100℃進(jìn)行，起始化合物[II]可以由下述方法(方法E-G)之一制得。
方法E
(上述圖示中的符號與前述相同。)化合物[II]可以由式[VII]化合物、其鹽或其反應(yīng)性衍生物與式[VIII]化合物或其鹽縮合而制得。
化合物[VII]與[VIII]的鹽包括例如與無機(jī)或有機(jī)酸形成的鹽(如三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽)、與無機(jī)堿形成的鹽(例如堿金屬鹽如鈉鹽或鉀鹽、堿土金屬鹽如鋇鹽或鈣鹽)。
縮合反應(yīng)可以通過用于通常的肽合成的常規(guī)方法進(jìn)行。
化合物[VII]或其鹽與化合物[VIII]或其鹽的縮合反應(yīng)可以在縮合劑的存在下帶有或不帶堿在合適的溶劑中進(jìn)行。
縮合劑擇自任何可以用于常規(guī)肽合成者，例如BOP-C1、BOP劑、DCC、EDC或CDI?？s合劑可與活化劑并用(如HOBt)。
堿擇自有機(jī)堿(例如DIEA、DMAP、DBU、Et3N、4-甲基嗎啉)、堿金屬碳酸鹽(如Na2CO3、K2CO3)、堿金屬碳酸氫鹽(如NaHCO3、KHCO3)、堿金屬氫氧化物(如NaOH、KOH)等。
溶劑擇自任何不會影響縮合反應(yīng)者，例如AcOEt、CHCl3、CH2Cl2、THF、DMF、水或其混合物。反應(yīng)可以在溫度范圍介于-50℃至50℃進(jìn)行，優(yōu)選地是在0℃至室溫進(jìn)行。
化合物[VIII]或其鹽與化合物[VII]的活性衍生物的縮合反應(yīng)于溶劑中并在堿的存在或不存在下進(jìn)行。
化合物[VII]的活性衍生物的實(shí)例如酰鹵化物(如酰氯化物)、反應(yīng)性酯(如與對硝基酚形成的酯)、其酐、帶有其他羧酸的混合酐(例如帶有醋酸的混合酐)等。
堿擇自有機(jī)堿(DIEA、DMAP、DBU、Et3N)、堿金屬碳酸鹽(如Na2CO3、K2CO3)、堿金屬碳酸氫鹽(如NaHCO3、KHCO3)等。
溶劑擇自不會影響縮合反應(yīng)者，例如AcOEt、水、CHCl3、CH2Cl2、C2H4Cl2、Et2O、THF、DMF、CH3CN、DMSO、苯、甲苯或其混合物。反應(yīng)可以在溫度范圍介于-30℃至室溫進(jìn)行。
方法F (上圖中，L為一離去基團(tuán)且其他符號同前述。)可以由式[IX]化合物與式[X]化合物的反應(yīng)制得化合物[II]。
離去基團(tuán)L可以為例如鹵素原子與三氟甲磺酰氧基團(tuán)。
偶聯(lián)反應(yīng)可以由常規(guī)芳香偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行，例如Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)方法(請參考Suzuki et al.，Synth.Commun.11513(1981)；Suzuki，Pureand Appl.Chem.571749-1758(1985)；Suzuki et al.，Chem.Rev.952457-2483(1995)；Shieh et al.，J.Org.Chem.57379-381(1992)；以及Martin et al.，Acta Chemica Scan dinavica 47221-230(1993))。
偶聯(lián)反應(yīng)可以在溫度范圍介于室溫至150℃進(jìn)行，優(yōu)選以溫度范圍介于80℃至150℃，并在鈀催化劑(例如四(三苯基磷)-鈀、醋酸鈀(II)、氯化鈀(II))，以及膦配體(例如三苯基膦、亞磷三乙酯、亞磷酸三甲酯、亞磷酸三異丙酯)以及堿(例如K2CO3、Et3N、DIEA、Dabco，二異丙胺、嗎啉)的存在下在溶劑中進(jìn)行。溶劑可以擇自任何不影響偶聯(lián)反應(yīng)者，例如甲苯、THF、DME、DMF、DMA、NMP、水或其混合物。
方法G (上圖中的標(biāo)示與前述相同。)式[II]化合物亦可以由下述步驟制得(1)將化合物[X]轉(zhuǎn)化成為相應(yīng)的有機(jī)錫化合物例如式[XI]化合物)，以及(2)將生成的化合物與式[XII]化合物反應(yīng) 其中標(biāo)示與前述相同。
步驟1化合物[IX]轉(zhuǎn)化成對應(yīng)的有機(jī)錫化合物可以由，例如將化合物[IX]與六烷基二錫(如六甲基二錫)于溫度范圍介于室溫至150℃、優(yōu)選溫度范圍介于80℃至110℃，并同時(shí)在四(三苯基膦)鈀與添加劑(如氯化鋰)的存在下進(jìn)行。溶劑可以擇自任何不影響偶聯(lián)反應(yīng)者，例如二噁烷、甲苯、DME、DMF、水或其混合物。
步驟2偶聯(lián)反應(yīng)可以由常規(guī)芳基偶聯(lián)反應(yīng)而制得，例如Stille偶聯(lián)反應(yīng)(請參考Stille et al.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.25508-524(1986))。
偶聯(lián)反應(yīng)可以在，例如溫度范圍介于室溫至150℃、優(yōu)選溫度范圍介于80℃至120℃，并同時(shí)在適當(dāng)溶劑中在四(三苯基膦)鈀的存在下進(jìn)行。溶劑可以擇自任何不影響偶聯(lián)反應(yīng)者，例如甲苯、DME、DMF、水或其混合物。
化合物[IX]可以由下述步驟制得(1)將式[XIII]化合物 其中Z1為鹵素原子且其他標(biāo)示與前述相同，與式[XIV]化合物 其中CO2R1定義與前述相同，或其鹽進(jìn)行縮合反應(yīng)，采用與方法E相似的常規(guī)方法，以及(2)用常規(guī)方法轉(zhuǎn)化生成的化合物的氫氧基團(tuán)成為離去基團(tuán)。例如轉(zhuǎn)化氫氧基成為三氟甲烷磺酰氧基可以采用三氟甲磺酸酐，于-30℃至0℃。并在適當(dāng)溶劑(CH2Cl2、CHCl3、THF或其混合物)中在堿(如吡啶、NEt3、DIEA)的存在下進(jìn)行。
化合物[VIII]可以由下述方法制得(1)將式[XV]化合物 其中P為氨基基團(tuán)的保護(hù)基且其標(biāo)示與前述相同，與化合物[X]通過常規(guī)芳基偶聯(lián)方法進(jìn)行縮合反應(yīng)，以及(2)由生成的化合物的氨基基團(tuán)移除該保護(hù)基。
氨基基團(tuán)的保護(hù)基擇自常規(guī)氨基基團(tuán)的保護(hù)基，例如取代或未取代芳基-C2-7烷氧羰基(如芐氧基羰基、對硝基芐氧基羰基)、C2-7烷氧基羰基(如叔-丁氧基羰基)等。
偶聯(lián)反應(yīng)與方法F中化合物[IX]與化合物[X]的反應(yīng)相似。
由氨基移除保護(hù)基可以由常規(guī)方法進(jìn)行，其根據(jù)何種保護(hù)基將移除而選擇，例如，催化還原反應(yīng)采用催化劑(鈀或活性炭)，并用酸(如TFA、HCL)處理等。
可以通過將式[XVI]化合物 其中的標(biāo)示均與前述相同，與三氟甲磺酸酐按照與化合物[IX]的制備步驟(2)相似的步驟進(jìn)行而制得化合物[XV]，其中L為三氟甲烷磺酰氧基，。
化合物[X]可以由常規(guī)方法(請參考Kuivila et al.，J.Am.Chem.Soc.832159(1961)；Gerrard，The Chemistry of Boron，Academic Press，New Yoork(1961)；Muetterties，The Chemistry ofBoron and its Compounds，Wiley，New York(1967)；以及Alamansa etal.，J.Am Chem.Soc.11611723-11736(1994))制得。例如化合物[X]可以由(1)將式[XVII]化合物 其中Q與前述定義相同，與烷基鋰(如n-BuLi)，于溫度范圍介于-100℃至室溫，并溶于適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如乙醚、THF或其混合物)中進(jìn)行反應(yīng)，(2)使生成的化合物與硼酸三甲酯，于溫度范圍介于-100℃至室溫，并溶于適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如乙醚、THF或其混合物)中進(jìn)行反應(yīng)，以及(3)用常規(guī)方法水解生成的化合物。
水解可以于溫度范圍介于0℃至室溫，并溶于適當(dāng)溶劑(例如乙醚、THF、二噁烷、水或其混合物)，且在酸(如醋酸或檸檬酸)和水的存在下進(jìn)行。
貫穿本發(fā)明說明書和權(quán)利要求
書，鹵素原子指氯原子、氟原子、溴原子或碘原子。并且C1-6烷基代表具有碳原子數(shù)1到6優(yōu)選1到4的直鏈、支鏈或環(huán)烷基團(tuán)，例如甲基、乙基、正丙基、正丁基、異丙基、環(huán)丙基、叔-丁基等。C2-7烷氧羰基代表具有碳原子數(shù)2至7、優(yōu)選地是碳原子數(shù)2-5，的直鏈、支鏈或環(huán)烷氧羰基團(tuán)，例如甲氧羰基、乙氧羰基、正丙氧羰基、正丁氧羰基、異丙氧羰基、環(huán)丙氧羰基、叔-丁氧羰基等。
簡稱的說明BOP-C1雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯BOP劑苯并三唑-1基氧基-三(二甲基氨基)-膦鎓六氟磷酸鹽DCC1，3-二環(huán)己烷碳二亞胺EDC1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺THF四氫呋喃DMFN，N-二甲基甲酰胺DMSO二甲基亞砜DMAN，N-二甲基乙酰胺NMP1-甲基-2-吡咯烷酮DIEA二異丙基乙胺DMAP4-(N，N-二甲基氨基)吡啶DBU1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯Dabco1，4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷CDI羰基二咪唑HOBT1-氫氧基苯并三唑TFA三氟乙酸DME1，2-二甲氧基乙烷PCC吡啶鎓氯鉻酸鹽
PDC吡啶鎓二鉻酸鹽Ac乙?；鵐e甲基Et乙基Pr丙基Bu丁基Ph苯基EtOAc乙酸乙酯實(shí)施例實(shí)施例1N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1)將二-叔丁基二碳酸酯(56.82g)分份加入溶于二氯甲烷/水(280ml/280ml)的L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽(55.08g)與NaHCO3(22.52g)的混合物中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?小時(shí)并以AcOEt稀釋。有機(jī)層以水清洗、干燥(Na2SO4)并蒸干。殘留物由乙醚與己烷的混合物重結(jié)晶得到N-(叔-丁氧基羰基)-L-酪氨酸乙酯(62.71g)。熔點(diǎn)87-88℃；MS(APCI)m/z 327(M+NH4)，310(M+H)。
(2)將吡啶(48ml)于氬氣環(huán)境下加入到上述所得產(chǎn)物(61.63g)的二氯甲烷(1800ml)溶液中。溶液降溫至-35至-30℃并于攪拌中滴入三氟甲磺酸酐(35ml)。加入后，混合物于-30至-20℃攪拌2小時(shí)。將冰水加入混合物以分離有機(jī)層，以5％檸檬酸水溶液、水以及鹽水清洗。生成的二氯甲烷溶液以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物以柱層析純化(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯4∶1)，產(chǎn)生N-(叔-丁氧基羰基)-O-(三氟甲磺酰基)-L-酪氨酸乙酯(87.94g)。熔點(diǎn)47-49℃；IR(Nujol)3390，1737，1691cm-1；MS(APCI)m/z(M+NH4)。
(3)將Et3N(41g)加入溶于DMF(350ml)的前述產(chǎn)物(76.51g)與2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯硼酸(62-27g)混合物中，并用氬脫氣體。加入Pd(PPh3)4(19.5g)至混合物中并于80-90℃與氬氣環(huán)境下攪拌1小時(shí)。冷卻該混合物，并用乙酸乙酯與水稀釋，以硅藻土(Celite)過濾并以乙酸乙酯清洗。過濾物以水稀釋并分離。有機(jī)層以水與鹽水清洗，以Na2SO4干燥，經(jīng)活性炭處理并蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯3∶2至2∶3)純化并由異丙醇重結(jié)晶，以得到N-(叔-丁氧基羰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(69.4g)。熔點(diǎn)142-143℃；IR(Nujol)3507，3323，1731，1689，1606-1；MS(APCI)m/z 477(M+NH4)。
(4)將4N HCl-二噁烷(50ml)于0℃加入前述產(chǎn)物(10.0g)溶于二噁烷(50ml)的溶液中，并于室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)?；旌衔镆砸颐严♂?。生成的沉淀物用過濾收集，并以乙醚清洗而得到4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(8.26g)。IR(Nujol)3321，1735cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 360(M+H)。
(5)將2，6-二氯苯甲酰氯(0.6ml)于0℃加入溶于含NaHCO3(955ml)的乙酸乙酯/水(60ml/60ml)的前述產(chǎn)物(1.5g)的混合物中，再于0℃將混合物攪拌0.5小時(shí)?；旌衔镆砸宜嵋阴?、水以及少量二氯甲烷稀釋。有機(jī)層以鹽水清洗，以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物重結(jié)晶得到N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1.93g)。熔點(diǎn)121℃；IR(Nujol)3249，1725，1641cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 532(M+H)。
(6)將二氧化錳(976mg)加入溶于二氯甲烷(10ml)的前述產(chǎn)物(508mg)中。于室溫將混合物攪拌2.5小時(shí)后再回流14小時(shí)。冷卻混合物，經(jīng)硅藻土過濾并以二氯甲烷清洗。濾液蒸發(fā)得到N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲?；交?-L-苯丙氨酸乙酯(352mg)。IR(Nujol)1734，1691，1655cm-1；MS(APCI)m/z530(M+H)。
(7)將濃硫酸(0.5ml)加入溶于含有Et3SiH(226mg)的乙醇(4ml)的前述產(chǎn)物(345mg)中。于室溫?cái)嚢?8小時(shí)后，混合物用乙酸乙酯與水的混合物處理。有機(jī)層依次以水與鹽水清洗，以MgSO4干燥并蒸發(fā)。殘留物再以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯2∶1)純化，并由二異丙醚與異丙醇的混合物重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(254mg)。熔點(diǎn)91-94℃；IR(Nujol)3290，1729，1652，1463，1123cm-1；MS(APCI+Q1MS)m/z 560(M+H)。
實(shí)施例2N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L苯丙氨酸甲酯(1)如實(shí)施例1-(1)所述方法由L-酪氨酸甲酯鹽酸鹽(2.69g)獲得N-(叔-丁氧基羰基)-L-酪氨酸甲酯(2.69g)。熔點(diǎn)105-106℃；IR(Nujol)3415，3321，1761，1691cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 313(M+NH4)，296(M+H)。
(2)如實(shí)施例1-(2)所述方法將上述產(chǎn)物(3.3g)轉(zhuǎn)化為N-(叔-丁氧基羰基)-O-(三氟甲磺?；?-L-酪氨酸甲酯(4.62g)。IR(Neat)3366，1747，1715cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 445(M+NH4)。
(3)如實(shí)施例1-(3)所述方法將上述產(chǎn)物(4.56g)轉(zhuǎn)化為N-(叔-丁氧基羰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(3.21g)。熔點(diǎn)100℃；IR(Nujol)3360，1739，1683，1661cm-1；MS(APCI)m/z 463(M+NH4)。
(4)如實(shí)施例1-(4)所述方法將上述產(chǎn)物(3.19g)轉(zhuǎn)化為4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(2.45g)。熔點(diǎn)211-213℃(dec.)；IR(Nujol)3301，1739cm-1；MS(APCI+Q1MS)m/z346(M+H)。
(5)如實(shí)施例1-(5)所述方法將上述產(chǎn)物(1.08g)轉(zhuǎn)化為N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(874mg)。熔點(diǎn)116-120℃；IR(Nujol)3230，3069，1749，1732，1641cm-1；MS(APCI+Q1MS)m/z 518(M+H)。
(6)將PBr3(680mg)的二噁烷(2ml)溶液于室溫以小部份分次加入溶于含有NaHCO3(304mg)的二噁烷(10ml)的前述產(chǎn)物(937mg)中。攪拌20分鐘后，混合物以冰冷卻，再以乙酸乙酯萃取。有機(jī)層依次以水與鹽水清洗，以MgSO4干燥與蒸發(fā)。殘留物再以柱層析(硅膠，洗脫液乙酸乙酯/氯仿1∶10)純化得到N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(4-溴甲基-2，6-二甲氧基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(598mg)。MS(APCI+QIMS)m/z 584，582，580(M+H)。
(7)將前述產(chǎn)物(571mg)的含有AgO(659mg)的乙醇(20ml)混合物于室溫以超聲波振蕩處理7小時(shí)。混合物經(jīng)硅藻土過濾并以乙醇清洗。濾液蒸發(fā)后的殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液乙酸乙酯/CHCl31∶20)純化得到標(biāo)題化合物(318mg)。MS(APCI+Q1MS)m/z 546(M+H)。
實(shí)施例3N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸將氫氧化鋰(30mg)于5℃加入實(shí)施例1化合物(207mg)的THF/水(8ml/2ml)溶液中?；旌衔镉?℃攪拌20小時(shí)，以6N鹽酸(1ml)冷卻并以乙酸乙酯萃取。有機(jī)層以水與鹽水清洗，以MgSO4干燥并蒸發(fā)。殘留物由甲醇、乙醚及己烷的混合物中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(147mg)。實(shí)施例2的化合物(301mg)亦以相同方法水解得到標(biāo)題化合物(238mg)。熔點(diǎn)196-198℃；IR(Nujol)3300，3270，1705，1651，1462，1126cm-1；MS(ESI-Q1MS)m/z 530(M-H)。
實(shí)施例4N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯將碘甲烷(871mg)加入實(shí)施例1-(5)化合物或參考實(shí)施例3-(3)化合物(304mg)的含有Ag2O(868mg)的CH3CN(30ml)溶液中。混合物于室溫?cái)嚢?8.5小時(shí)，再于50℃以超聲波振蕩5小時(shí)。混合物以硅藻土過濾，并將濾液蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液乙酸乙酯/正己烷1∶2)純化得到標(biāo)題化合物(222mg)。IR(Neat+CHCl3)3285，1736，1663cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 546(M+H)。
實(shí)施例5N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3的方法將實(shí)施例4的化合物(210mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(139mg)。熔點(diǎn)232-235℃；IR(Nujol)3336，1717，1685cm-1；MS(ESI-QIMS)m/z 516(M-H)。
實(shí)施例6N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-正丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1)將四溴化碳(CBr4，2.8g)于0℃加入實(shí)施例1-(5)或參考實(shí)施例3-(3)所得化合物(3.0g)溶于含有PPh3(1.77g)的二氯甲烷(80ml)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?小時(shí)并蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液乙酸乙酯/正己烷1∶1)純化得到N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-溴甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(3.15mg)。IR(Nujol)1731，1654cm-1；MS(APCI)m/z 596(M+H)。
(2)將前述產(chǎn)物(304mg)溶于含有AgO(515mg)的正丙醇(12ml)混合物于45℃以超聲波振蕩28小時(shí)。混合物以硅藻土過濾，并將濾液蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液；正己烷/乙酸乙酯3∶1)純化得到標(biāo)題化合物(258mg)。IR(Nujol)1733，1655cm-1；MS(APCI)m/z574(M+H)。
實(shí)施例7N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-正丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3方法將實(shí)施例6的化合物(150mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(142mg)。熔點(diǎn)183-186℃；IR(Nujol)1719，1684cm-1；MS(APCI)m/z544(M-H)。
實(shí)施例8N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-異丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯如實(shí)施例6-(2)所述的方法，除了改用異丙醇取代正丙醇，將實(shí)施例6-(1)化合物(231mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(179mg)。IR(Nujol)3270，1731，1658cm-1；MS(APCI)m/z 574(M+H)。
實(shí)施例9N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-異丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法將實(shí)施例8化合物(122mg)水解為標(biāo)題化合物(117mg)。IR(Nujol)3341，3070，1718，1681cm-1；MS(ESI)m/z544(M-H)。
實(shí)施例10N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1)如實(shí)施例1-(5)所述方法將實(shí)施例1-(4)所得產(chǎn)物(2.1g)用2，6-二氟苯甲酰氯?；?，得到N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(2.75g)。熔點(diǎn)70-72℃；IR(Nujol)3400，3263，1735，1654，1624cm-1；MS(APCI)m/z500(M+H)。
(2)將Et3N(4.8ml)與SO3·吡啶(5.6g)依次于室溫加入前述產(chǎn)物(1.72g)的DMSO(20ml)溶液中。整個(gè)混合物于室溫?cái)嚢?5分鐘。反應(yīng)混合物注入冰水，接著混合物以乙酸乙酯萃取。有機(jī)層依次以5％鹽酸水溶液、水以及鹽水清洗，以Na2SO4干燥的然后再蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯5∶1至1∶1)純化得到N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲酰基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1.54g)。熔點(diǎn)114-116℃；IR(Nujol)3332，1735，1695，1657，1644，1623cm-1；MS(APCI)m/z 498(M+H)。
(3)如實(shí)施例1-(7)所述的方法，將前述產(chǎn)物(716mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(428mg)。熔點(diǎn)87-89℃；IR(Neat+CHCl3)3300，1739，1668cm-1；MS(APCI)m/z 528(M+H)。
實(shí)施例11N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(1)如實(shí)施例1-(5)所述方法，將實(shí)施例2-(4)所得產(chǎn)物(1.00g)用2，6-二氟苯甲?；然秕；?，得到N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(873mg)。IR(Nujol)3257，1743，1655，1624cm-1；MS(APCI+Q1MS)m/z 503(M+NH4)，486(M+H)。
(2)如實(shí)施例2-(6)與(7)所述的方法，將前述產(chǎn)物(860mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(220mg)。
實(shí)施例12N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例10的化合物(200mg)水解為標(biāo)題化合物(160mg)。如實(shí)施例3所述的方法，亦將實(shí)施例11的化合物(220mg)水解為標(biāo)題化合物(167mg)。熔點(diǎn)156-158℃；IR(Nujol)1735，1655cm-1；MS(ESI)m/z 498(M-H)。
實(shí)施例13N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1)如實(shí)施例6-(1)所述方法，將實(shí)施例10-(1)或參考實(shí)施例4-(3)所得產(chǎn)物(1.41g)轉(zhuǎn)化為N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-溴甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1.22g)。IR(Nujol)3317，1740，1653，1623cm-1；MS(APCI)m/z 564(M+H)。
(2)如實(shí)施例6-(2)所述的方法，改用甲醇代替正丙醇，將前述產(chǎn)物(231mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(96mg)。IR(Nujol)3347，1754，1655，1626cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 514(M+H)。
實(shí)施例14N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例13的化合物(96mg)水解為標(biāo)題化合物(62mg)。IR(Nujol)3303，3275，1724，1709，1655，1626cm-1；MS(ESI-QIMS)m/z 484(M-H)。
實(shí)施例15N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-正丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯如實(shí)施例6-(2)所述方法，將實(shí)施例13-(1)所得產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。IR(Neat)3302，1739，1674，1624cm-1；MS(APCI)m/z 542(M+H)。
實(shí)施例16N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-異丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯如實(shí)施例6-(2)所述的方法，改用異丙醇代替正丙醇，將實(shí)施例13-(1)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。IR(Nujol)3332，1756，1653，1625cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 542(M+H)。
實(shí)施例17N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-正丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例15的化合物水解為標(biāo)題化合物。IR(Nujol)1735，1660，1624cm-1；MS(ESI)m/z 512(M-H)。
實(shí)施例18N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-異丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例16的化合物水解為標(biāo)題化合物。IR(Nujol)1735，1655，1624cm-1；MS(ESI-QIMS)m/z 512(M-H)。
實(shí)施例19N-(2-氯化-6-氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1)將ECD·HCl(549mg)、HOBt(383mg)以及4-甲基嗎啉(0-48ml)于室溫依次加入實(shí)施例1-(4)所得化合物(863mg)與2-氯-6-氟苯甲酸(456mg)溶于DMF(15ml)的溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?4小時(shí)并以水稀釋。混合物以乙酸乙酯萃取，其有機(jī)層依次以飽和碳酸氫鈉、水以及鹽水清洗。生成的有機(jī)層再以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯1∶1純化得到N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(950mg)。熔點(diǎn)101-104℃；IR(Nujol)2921，2853，1733，1652，1605cm-1；MS(APCI)m/z516(M+H)。
(2)如實(shí)施例1-(6)所述的方法，將前述產(chǎn)物(630mg)氧化得到N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲酰基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(466mg)。IR(Nujol)3279，1735，1691，1657cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 514(M+H)。
(3)如實(shí)施例1-(7)所述的方法，將前述產(chǎn)物(466mg)轉(zhuǎn)化得到標(biāo)題化合(454mg)。IR(Nujol)3289，1735，1663，1605cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 544(M+H)。
實(shí)施例20N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸將0.5N氫氧化鋰(1.54ml)與3％過氧化氫(65ul)于5℃加入實(shí)施例19所得化合物(210mg)溶于THF(5ml)的溶液中?；旌衔镉?℃攪拌14小時(shí)并以1N鹽酸酸化?；旌衔餄饪s、再以水稀釋，并將結(jié)果沉淀物收集過濾，以水清洗而得到標(biāo)題化合物(171mg)。熔點(diǎn)182-184℃；IR(Nujol)3295，1729，1711，1653cm-1；MS(ESI)m/z514(M-H)。
實(shí)施例21N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(1)如實(shí)施例19-(1)所述方法，將實(shí)施例2-(4)所得產(chǎn)物(49g)用2-氯-6-氟苯甲酸酰化，得到N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸甲酯(58g)。IR(Nujol)1735，1651cm-1；MS(APCI)m/z 519(M+NH4)。
(2)如實(shí)施例1-(6)所述的方法，將前述產(chǎn)物(58g)氧化為N-(2-氯-6-氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-甲?；交?-L-苯丙氨酸甲酯(45.8g)。IR(Nujol)3275，1743，1691cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 500(M+H)。
(3)實(shí)施例1-(7)所述的方法，除采用甲醇代替乙醇，將前述產(chǎn)物(2.0g)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(1.4g)。IR(Neat+CHCl3)3285，1745，1665，1605cm-1；MS(APCI+QIMS)m/z 533(M+NH4)，516(M+H)。
實(shí)施例22N-(2-氯-6-氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(1)如實(shí)施例6-(1)所述方法，將實(shí)施例19-(1)或參考實(shí)施例5-(3)所得產(chǎn)物(3.29g)轉(zhuǎn)化得到N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-溴甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(2.91g)。IR(Nujol)3315，1735，1662，1603cm-1；MS(APCI)m/z582，580，578(M+H)。
(2)如實(shí)施例2-(7)所述的方法，除改采甲醇代替乙醇，將前述產(chǎn)物(250mg)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(190mg)。IR(Nujol)1736，1659cm-1；MS(APCI)m/z 530(M+H)。
實(shí)施例23；N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例22的化合物(130mg)水解為標(biāo)題化合物(100mg)。熔點(diǎn)170-175℃；IR(Nujol)1720，1680cm-1；MS(ESI)m/z 500(M-H)。
如上述方法，也將實(shí)施例21的化合物(27.9g)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(25.3g)。
實(shí)施例24N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-正丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯如實(shí)施例2-(7)所述的方法，除改采用正丙醇代替乙醇，將實(shí)施例22-(1)的化合物轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。IR(Neat+CHCl3)，1737，1667cm-1；MS(APCI)m/z 558(M+H)。
實(shí)施例25N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-異丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯如實(shí)施例2-(7)所述的方法，除改采用異丙醇代替乙醇，將實(shí)施例22-(1)的化合物轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。IR(Neat+CHCl3)3305，1737，1665，1605cm-1；MS(APCI)m/z 558(M+H)。
實(shí)施例26N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-正丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例24的化合物水解為標(biāo)題化合物。IR(Nujol)1713，1654cm-1；MS(APCI)m/z 528(M-H)。
實(shí)施例27N-(2-氯-6-氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-異丙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例25的化合物水解為標(biāo)題化合物。IR(Neat+CHCl3)3400，3280，1737，1660，1605cm-1；MS(ESI)m/z528(M-H)。
實(shí)施例28N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-(2-乙氧基乙基)苯基)-L-苯丙氨酸叔丁酯(1)如實(shí)施例1-(5)所述方法，L-酪酸叔丁酯(2.5g)?；?，得到N-(2，6-二氯苯甲?；?-L-酪氨酸叔丁酯(4.3g)。熔點(diǎn)177-178℃；IR(Nujol)1721，1652cm-1；MS(APCI)m/z 427(M+NH4)，410(M+H)。
(2)如實(shí)施例1(2)所述方法，將前述產(chǎn)物(4.3g)轉(zhuǎn)化得到N-(2，6-二氯苯甲?；?-O-(三氟甲磺酰基)-L-酪氨酸叔丁酯(5.6g)。烷點(diǎn)92-93℃；IR(Nujol)1716，1643cm-1；MS(APCI)m/z 559(M+NH4)。
(3)將Pd(PPh3)4(866mg)加入脫除氣體的前述產(chǎn)物(4.07g)、2，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯硼酸(2.71g，粗品)以及Et3N(2.27g)溶于DMF(100ml)的懸浮液中?；旌衔镉跉鍤猸h(huán)境下，加熱至80-90℃維持2小時(shí)。生成的混合物以乙酸乙酯稀釋，以水清洗，并以硅藻土過濾。有機(jī)層分離，以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物以柱層析(基本硅膠(Chromatorex-NH，F(xiàn)uji Silysia Chem-LTD)；洗脫液乙酸乙酯，然后再以硅膠；洗脫液乙酸乙酯/正己烷3∶2至2∶1)純化，并由乙醚重結(jié)晶得到N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸叔丁酯(2.5g)。熔點(diǎn)96-98℃；IR(Nujol)1727，1645cm-1；MS(APCI)m/z 591(M+NH4)。
(4)如實(shí)施例4所述的方法，將前述產(chǎn)物(254mg)烷基化為標(biāo)題化合物(116mg)。IR(Neat+CHCl3)3301，1730，1669cm-1；MS(APCI)m/z 619(M+NH4)。
實(shí)施例29N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-乙氧基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸將4N鹽酸-二噁烷(3ml)于室溫加入實(shí)施例28所得化合物(109mg)溶于二氯甲烷(2ml)的溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?天并蒸干。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯1∶1)純化得到標(biāo)題化合物(88mg)。IR(Nujol)3320，3067，1736，1715，1683cm-1；MS(ESI)m/z 544(M-H)。
實(shí)施例30N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-乙氧基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸叔丁酯(1)如實(shí)施例1-(5)所述方法，用2，6-二氟苯甲?；然秕；疞-酪氨酸叔丁酯(10.0g)，得到N-(2，6-二氟苯甲酰基)-L-酪氨酸叔丁酯(15.9g)。熔點(diǎn)145-148℃；IR(Nujol)1728，1638cm-1；MS(APCI)m/z 395(M+NH4)，378(M+H)。
(2)如實(shí)施例1-(2)所述方法，將前述產(chǎn)物(15.9g)轉(zhuǎn)化得到N-(2，6-二氟苯甲?；?-O-(三氟化甲磺酰基)-L-酪氨酸叔丁酯(21.04g)。IR(Neat+CHCl3)1732，1658cm-1；MS(APCI)m/z 527(M+NH4)。
(3)如實(shí)施例28-(3)所述方法，將前述產(chǎn)物(5.61g)轉(zhuǎn)化得到N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸叔丁酯(3.54g)。IR(Neat+CHCl3)3307，1731，1660cm-1；MS(APCI)m/z 559(M+NH4)，542(M+H)。
(4)如實(shí)施例4所述的方法，將前述產(chǎn)物(250mg)烷基化為標(biāo)題化合物(230mg)。IR(Neat+CHCl3)1731，1675cm-1；MS(APCI)m/z588(M+NH4)，570(M+H)。
實(shí)施例31N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-乙氧基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸如實(shí)施例29所述的方法，將實(shí)施例30的化合物(200mg)水解為標(biāo)題化合物(161mg)。熔點(diǎn)63-70℃；IR(Nujol)1737，1660，1624，cm-1；MS(APCI)m/z 512(M-H)。
實(shí)施例32N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-甲氧基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸乙酯(1)如實(shí)施例28-(3)所述方法，將實(shí)施例1-(2)所得產(chǎn)物(43.83g)轉(zhuǎn)化得到N-(叔-丁氧基羰基)-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸乙酯(38.03g)。熔點(diǎn)112-114℃；IR(Nujol)3487，3327，1729，1688，1607cm-1；MS(APCI)m/z 491(M+NH4)。
(2)如實(shí)施例1-(4)所述方法，將前述產(chǎn)物(3.04g)轉(zhuǎn)化得到4-[2，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(2.57g)。IR(Nujol)3400，1730cm-1；MS(APCI)m/z 374(M+H)。
(3)如實(shí)施例1-(5)所述方法，用2，6-二氟苯甲酰氯酰化前述產(chǎn)物(2.57g)，得到N-(2，6-二氟苯甲酰)-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸乙酯(2.35g)。熔點(diǎn)115-117℃；IR(Nujol)3568，3355，1753，1655，1627cm-1；MS(APCI)m/z 514(M+H)。
(4)如實(shí)施例4所述的方法，將前述產(chǎn)物(329mg)烷基化為標(biāo)題化合物(294mg)。IR(Nujol)3341，1755，1655，1625cm-1；MS(APCI)m/z 528(M+H)。
實(shí)施例33N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-[2，6-二甲氧基-4-(2-甲氧基乙基)苯基]-L-苯丙氨酸如實(shí)施例3所述的方法，將實(shí)施例32的化合物(187mg)水解為標(biāo)題化合物(143mg)。IR(Neat+CHCl3)1739，1667cm-1；MS(APCI)m/z 498(M-H)。
實(shí)施例34N-(2，6-二氯苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例1的標(biāo)題化合物亦可由下述另一途徑獲得。
(1)將甲磺?；?0.523ml)與Et3N(1.02ml)于5℃加入實(shí)施例1-(5)或參考實(shí)施例3-(3)所得化合物(3.00g)溶于二氯甲烷(50ml)的溶液中?；旌衔镉?10℃至0℃攪拌1小時(shí)，以水稀釋并以二氯甲烷萃取兩次。有機(jī)層以鹽水洗滌、以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物用乙酸乙酯-己烷研制并過濾收集后得到N-(2，6-二氯苯甲酰基(2，6-二甲氧基-4-甲磺酰氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(3.34g)。熔點(diǎn)109℃；IR(Nujol)3273，2923，2854，1733，1655，1583，1463cm-1；MS(APCI)m/z 610(M+H)。
(2)將前述產(chǎn)物(101mg)溶于乙醇(2ml)的懸浮液于90℃攪拌45分鐘。混合物冷卻、以水稀釋并以乙酸乙酯萃取。有機(jī)層以鹽水清洗、以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯2∶1)純化得到標(biāo)題化合物(89mg)。
實(shí)施例35N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例1的標(biāo)題化合物亦可由下述方法的另一途徑獲得。
將硫酸(1ml)加入實(shí)施例1-(5)或參考實(shí)施例3-(3)所得化合物(532mg)溶于乙醇(10ml)的懸浮液中?；旌衔镉诨亓飨聰嚢?4小時(shí)。生成的混合物冷卻、以水稀釋并以乙酸乙酯萃取。有機(jī)層以水、鹽水清洗，以Na2SO4干燥并蒸發(fā)。殘留物以柱層析(硅膠，洗脫液正己烷/乙酸乙酯2∶1)純化得到標(biāo)題化合物(476mg)。
實(shí)施例36N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例10的標(biāo)題化合物亦可由下述方法的另一途徑獲得。
(1)如實(shí)施例34-(1)所述方法，將實(shí)施例10-(1)或參考實(shí)施例4-(3)所得產(chǎn)物(73.4g)磺?；玫絅-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲磺酰基氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(77.7g)。熔點(diǎn)125-126℃；IR(Nujol)3335，2922，2853，1756，1753，1653，1583，1525，1464cm-1；MS(APCI)m/z595(M+NH4)。
(2)如實(shí)施例34-(2)所述方法，將前述產(chǎn)物(77.7g)轉(zhuǎn)化得到標(biāo)題化合物(70.5g)。
實(shí)施例37N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例19的標(biāo)題化合物亦可由下述方法的另一途徑獲得。
(1)如實(shí)施例34-(1)所述方法，將實(shí)施例19-(1)或參考實(shí)施例5-(3)所得產(chǎn)物(12.4g)磺酰化得到N-(2氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲磺胺基氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯(14.0g)。熔點(diǎn)104-107℃；IR(Nujol)3286，1734，1655，1605，1583，1541，1460cm-1；MS。(APCI)m/z 611(M+NH4)。
(2)如實(shí)施例34-(2)所述方法，將前述產(chǎn)物(14.0g)轉(zhuǎn)化得到標(biāo)題化合物(13.0g)。
參考實(shí)施例12，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯硼酸于0.5小時(shí)內(nèi)將正丁基鋰(1.6M于正己烷中，750ml)于-50℃于氬氣環(huán)境下，分次加入3，5-二甲氧基芐醇(80g)的THF(1900ml)溶液中?；旌衔锷郎刂潦覝?小時(shí)，再冷卻至-60℃。再將(MeO)3B(200ml)加入混合物。生成的混合物升溫至室溫并攪拌過夜。將檸檬酸(300g)的水(1200ml)溶液于0℃分次加入反應(yīng)混合物。分離水層，以氯化鈉飽和并以乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液以MgSO4干燥并蒸發(fā)。結(jié)晶的殘留物用乙酸乙酯研制并過濾收集，得到標(biāo)題化合物(75.1g)。溶點(diǎn)92-98℃；IR(Nujol)3460，3408，3218，1613，1578，1288，1231，1123，1055，960，779cm-1；MS(APCI)m/z 230(M+NH4)。
參考實(shí)施例22，6-二甲氧基-4-(2-羥基乙基)苯硼酸(1)將3，5-二甲氧基苯基醋酸(5.32g)的二噁烷(20ml)溶液于0℃分次加入LiAlH4(1.05g)的二噁烷(100ml)溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?.5小時(shí)，于50℃攪拌2小時(shí)?；旌衔镆詽饪s的氫氧化銨冷卻，以硅藻土過濾。濾液蒸發(fā)得到3，5-二甲氧基苯乙醇(5.1g)。IR(Neat)3400，1600cm-1；MS(GC-EI)182(M+)，151(M-MeO)。
(2)如參考實(shí)施例1所述的方法，將前述產(chǎn)物(27.16g)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(39.1g)。
參考實(shí)施例3N-(2，6-二氯化苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例1-(5)的化合物也可通過下列途徑獲得(1)如實(shí)施例1-(5)所述的方法，從L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽(110.0g)得到N-(2，6-二氯苯甲?；?-L-酪氨酸乙酯(171.4g)。熔點(diǎn)141-142℃；IR(Nujol)3381，3329，1718，1659cm-1；MS(APCI)m/z 382(M+H)。
(2)如實(shí)施例1-(2)所述的方法，將前述產(chǎn)物(130g)轉(zhuǎn)化為N-(2，6-二氯苯甲酰基)-O-(三氟甲磺?；?-L-酪氨酸乙酯(174.9g)。IR(Neat)1737，1651cm-1；MS(APCI)m/z514(M+H)。
(3)如實(shí)施例1-(3)所述的方法，將前述產(chǎn)物(174.9g)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(119.7g)。
參考實(shí)施例4N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例10-(1)化合物也可通過以下途徑獲得。
(1)如實(shí)施例1-(5)所述的方法，用2，6-二氟苯甲?；然秕；疞-酪氨酸乙酯鹽酸鹽(10.0g)得到N-(2，6-二氟苯甲酰基)-L-酪氨酸乙酯(13.2g)。熔點(diǎn)149-150℃；IR(Nujol)3424，3277，1721，1660，1624cm-1；MS(APCI)m/z 350(M+H)。
(2)如實(shí)施例1-(2)所述的方法，將前述產(chǎn)物(12.18g)轉(zhuǎn)化為N-(2，6-二氟苯甲?；?-O-(三氟甲磺酰基)-L-酪氨乙酯(16.0g)。熔點(diǎn)76-78℃；IR(Nujol)3290，1739，1657，1625，1539，1502，1467，1423，1249，1214，1140，1009，891，793cm-1；MS(APCI)m/z482(M+H)。
(3)如實(shí)施例1-(3)所述的方法，將前述產(chǎn)物(7.7g)與2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯硼酸反應(yīng)得到標(biāo)題化合物(7.6g)。
參考實(shí)施例5N-(2-氯-6-氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-羥基甲基苯基)-L-苯丙氨酸乙酯實(shí)施例19-(1)的標(biāo)題化合物也可以通過以下途徑獲得。
(1)如實(shí)施例19-(1)所述的方法，將L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽(102g)?；玫絅-(2-氯-6-氟苯甲酰基)-L-酪氨酸乙酯(137.2g)，熔點(diǎn)144-145℃；IR(Nujol)3425，3260，1720，1659，1615cm-1；MS(APCI)m/z366(M+H)。
(2)如實(shí)施例1-(2)所述的方法，將前述產(chǎn)物(136.2g)轉(zhuǎn)化為N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-O-(三氟甲磺?；?-L-酪氨酸乙酯(189.8g)。IR(Neat)3283，1738，1657，1605cm-1；MS(APCI)m/z 498(M+H)。
(3)如實(shí)施例1-(3)所述的方法，將前述產(chǎn)物(189.8g)轉(zhuǎn)化得到標(biāo)題化合物(142.3g)。
權(quán)利要求
1.如式(I) 的苯丙氨酸衍生物，其中，X1為鹵素原子；X2為鹵素原子；Q為-CH2-基團(tuán)或-(CH2)2-基團(tuán)；Y為-C1-6的烷基；CO2R為羧基或C2-7烷氧羰基基團(tuán)；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.權(quán)利要求
1所述的化合物，其中化學(xué)結(jié)構(gòu)為下列式[I-1] 其中，符號如權(quán)利要求
1所定義。
3.權(quán)利要求
2所述的化合物，其中X1為氯原子或氟原子；X2為氯原子或氟原子；Y為C1-4的烷基。
4.權(quán)利要求
3所述化合物，其中X1為氯原子或氟原子；X2為氯原子或氟原子；Q為-CH2-基團(tuán)；Y為甲基、乙基、或正-丙基；以及CO2R為羧基、甲氧羰基、乙氧羰基或叔丁氧羰基。
5.權(quán)利要求
3所述的化合物，其中X1為氟原子；X2為氯原子或氟原子；Q為-CH2-基團(tuán)；Y為甲基或乙基；以及CO2R為羧基或C2-7的烷氧羰基。
6.N-(2，6-二氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸；N-(2-氯-6-氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-乙氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸；N-(2-氯-6-氟苯甲酰基)-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸；N-(2，6-二氟苯甲?；?-4-(2，6-二甲氧基-4-甲氧基甲基苯基)-L-苯丙氨酸；或其C1-6烷基酯；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7.藥物組合物，其包含治療有效劑量的權(quán)利要求
1-6任一項(xiàng)的化合物以及藥學(xué)上可接受載體或稀釋劑。
8.權(quán)利要求
1-6任一項(xiàng)的化合物用于制備治療由α4介導(dǎo)細(xì)胞粘附所介導(dǎo)的病癥的藥物的用途。
9.權(quán)利要求
8所述的用途，其中所述的病癥選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；哮喘；過敏病癥；成人呼吸窘迫綜合征；愛滋病癡呆；阿爾茨海默癥；心血管疾??；栓塞或有害性血小板聚集；檢塞溶解后的再閉塞；再灌注損傷；牛皮癬；濕疹；接觸性皮炎；異位性皮類；糖尿?。欢喟l(fā)性硬化癥；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；炎性腸??；與白細(xì)胞浸潤至胃腸道有關(guān)的疾??；與白細(xì)胞浸潤至襯有上皮的組織有關(guān)的疾?。灰认傺?；乳腺炎；肝炎；膽囊炎；膽管炎或膽管周炎；支氣管炎；竇炎；肺臟炎癥性疾?。荒z原病；結(jié)節(jié)病；骨質(zhì)疏松癥；骨關(guān)節(jié)炎；動脈粥樣硬化癥；腫瘤性疾病；創(chuàng)傷；眼疾；謝格連氏綜合征；移植后的排斥現(xiàn)象；宿主抗移植體或移植體抗宿主的病癥；血管內(nèi)膜增生；血管硬化癥；手術(shù)后的再梗塞或再狹窄；腎炎；腫瘤血管生成；惡性腫瘤；多發(fā)性肌瘤及肌瘤誘發(fā)骨質(zhì)再吸收；以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。
10.權(quán)利要求
9所述的用途，其中所述病癥為哮喘；過敏病癥；炎性腸病；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；異位性皮炎；多發(fā)性硬化癥或移植后排斥現(xiàn)象。
11.一種制備如式[I] 的苯丙氨酸衍生物的方法，其中X1為鹵素原子，X2為鹵素原子，Q為-CH2-基團(tuán)或-(CH2)2-基團(tuán)，Y為C1-6的烷基以及CO2R為羧基或C2-7烷氧羰基基團(tuán)，或其藥學(xué)上可接受的鹽，其包含轉(zhuǎn)化式[II]化合物 其中CO2R1為酯化羧基，且其他符號與前述定義相同，使之成為式[Ia]化合物 其中的符號與前述定義相同，必要時(shí)，接著將生成的式[Ia]化合物的酯化羧基轉(zhuǎn)化成為羧基，以及必要時(shí)，接著將生成化合物轉(zhuǎn)化成為其藥學(xué)上可接受的鹽。
12.權(quán)利要求
11所述的方法，其中轉(zhuǎn)化化合物(II)成為化合物[Ia]包含氧化化合物[II]，接著用式[IV]化合物Y-OH [IV]還原性地縮合生成的化合物，其中Y為C1-6烷基。
13.權(quán)利要求
11所述的方法，其中轉(zhuǎn)化化合物(II)成為化合物(Ia)的步驟包含轉(zhuǎn)化化合物(II)成為式[V]化合物 其中X1為鹵素原子，X2為鹵素原子，Q為-CH2-基團(tuán)或-(CH2)2-基團(tuán)，Z為離去基團(tuán)，以及CO2R1為酯化羧基，接著使化合物[V]與式[IV]化合物Y-OH [IV]反應(yīng)，其中Y為C1-6烷基。
14.權(quán)利要求
11所述的方法，其中轉(zhuǎn)化化合物(II)成為化合物[Ia]的步驟包含用式[VI]化合物Y-Z [VI]烷基化化合物[II]，其中Y為C1-6烷基并且Z為離去基團(tuán)。
15.權(quán)利要求
11所述的方法，其中轉(zhuǎn)化化合物[II]成為化合物[Ia]的步驟包含使式[II]化合物與式[IV]化合物Y-OH [IV]縮合，其中Y為C1-6烷基。
專利摘要
本發(fā)明涉及如式[I]的苯丙氨酸衍生物，其中X
文檔編號A61K31/165GKCN1229334SQ01814987
公開日2005年11月30日 申請日期2001年8月27日
發(fā)明者筑本美喜子, 野村純宏, 川口隆行, 久米俊行, I·瑟卡 申請人:田邊制藥株式會社導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan