專利名稱:副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種生物培養(yǎng)基的制備方法，具體地說(shuō)，是一種副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法。用于生物工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，繁殖副雞嗜血桿菌用的培養(yǎng)基一般使用固體的巧克力培養(yǎng)基，也有使用心腦浸湯、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)，但制備的菌體量少，一般含菌量為108CFU/ml，(CFU為菌落形成單位)需濃縮后才能制備疫苗，成本高。副雞嗜血桿菌CVCC258和CVCC269是《中國(guó)菌種目錄》在編菌種(英文版，1992年10月機(jī)械工業(yè)出版社出版，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)編著)，中國(guó)獸醫(yī)微生物保藏中心作為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)下設(shè)機(jī)構(gòu)保證常年為國(guó)內(nèi)外教學(xué)、科研、生產(chǎn)單位提供《中國(guó)菌種目錄》中的微生物，列入《中國(guó)菌種目錄》的微生物將長(zhǎng)期保存，一直對(duì)外供應(yīng)，公眾能從中國(guó)獸醫(yī)微生物保藏中心買到的微生物菌種(CVCC中國(guó)獸醫(yī)微生物保藏中心，該中心20多年來(lái)為生產(chǎn)、科研、教學(xué)提供了6萬(wàn)多株各類獸醫(yī)微生物菌種)。副雞嗜血桿菌CVCC258和CVCC269是禽傳染性鼻炎的病源。CVCC258是1984年從發(fā)病雞中分離，血清型C型；CVCC269是從發(fā)病雞中分離，血清型A型。
經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN1297041Y，
公開(kāi)日為2001年5月30日，發(fā)明名稱為一種利用雞胚制作雞傳染性鼻炎等細(xì)菌的培養(yǎng)基，該專利利用雞胚制作雞傳染性鼻炎等細(xì)菌的培養(yǎng)基，利用雞胚浸出液制作細(xì)菌培養(yǎng)基。取適齡雞胚，搗碎后煮沸，去除殘?jiān)?，上清液中按比例加入其他營(yíng)養(yǎng)素即成。其不足之處是副雞嗜血桿菌經(jīng)其培養(yǎng)后含菌量少，成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法，使其提高制備抗原含菌量，降低成本，能為臨床制備副雞嗜血桿菌疫苗提供高質(zhì)量的抗原。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明具體步驟如下1)雞胸肌肉100克，洗凈，絞碎，加入800毫升蒸餾水，煮沸10分鐘，過(guò)濾去除肉渣，將雞肉湯調(diào)整容量至900毫升。
2)在無(wú)菌的條件下，取動(dòng)物血(綿羊或雞)100毫升，放入-40℃冰箱凍融3次即成裂解血。
3)在900毫升雞肉湯中加入蛋白胨5克，酵母浸膏2克，葡萄糖5克，氯化鈉10克，溶解后調(diào)pH值為7.4，在高壓滅菌器中121℃滅菌20分鐘，冷卻后加入裂解血100毫升，即成副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基。
副雞嗜血桿菌是一種酶系統(tǒng)不完備、需要血液中的生長(zhǎng)因子才能生長(zhǎng)的細(xì)菌，該菌需要V因子。V因子是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸及煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，在細(xì)菌呼吸過(guò)程中起遞氫作用。動(dòng)物血液經(jīng)裂解后能釋放出V因子，同時(shí)血清中含有菌體生長(zhǎng)的各種營(yíng)養(yǎng)素，副雞嗜血桿菌在該培養(yǎng)基中能得到充分生長(zhǎng)。
本發(fā)明采用制備雞肉湯，在雞肉湯中加入蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、氯化鈉等營(yíng)養(yǎng)素，將無(wú)菌動(dòng)物血裂解處理后，加入滅菌后的雞肉湯中，即成副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基。制備的副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基適宜于副雞嗜血桿菌的生長(zhǎng)，在該培養(yǎng)基中副雞嗜血桿菌37℃培養(yǎng)36小時(shí)，菌體量最高可達(dá)1011CFU/ml，為臨床制備副雞嗜血桿菌疫苗提供高質(zhì)量的抗原。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1取雞胸肌肉100克，洗凈絞碎，加入800毫升蒸餾水，煮沸10分鐘，過(guò)濾去除肉渣，將雞肉湯調(diào)整容量至900毫升。在無(wú)菌的條件下，取綿羊血100毫升，放入-40℃冰箱凍融3次即成裂解血。在900毫升雞肉湯中加入蛋白胨5克，酵母浸膏2克，葡萄糖5克，氯化鈉10克，溶解后調(diào)pH值為7.4，在高壓滅菌器中121℃滅菌20分鐘，冷卻后加入無(wú)菌動(dòng)物裂解血100毫升，即成副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基。
實(shí)施例2取雞胸肌肉100克，洗凈絞碎，加入800毫升蒸餾水，煮沸10分鐘，過(guò)濾去除肉渣，將雞肉湯調(diào)整容量至900毫升。在無(wú)菌的條件下，取雞血100毫升，放入-40℃冰箱凍融3次即成裂解血。以下制備方法同實(shí)施例1。
以上實(shí)施例1、2制備的副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基適宜于副雞嗜血桿菌的生長(zhǎng)，在該培養(yǎng)基中副雞嗜血桿菌37℃培養(yǎng)36小時(shí)，菌體量最高達(dá)1011CFU/ml，為臨床制備副雞嗜血桿菌疫苗提供高質(zhì)量的抗原。
權(quán)利要求
1.一種副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，具體步驟如下1)將雞胸肌肉洗凈，絞碎，加入蒸餾水，煮沸，過(guò)濾去除肉渣，調(diào)整雞肉湯容量；2)在無(wú)菌的條件下，取動(dòng)物血，放入冰箱凍融即成裂解血；3)在雞肉湯中加入蛋白胨，酵母浸膏，葡萄糖，氯化鈉，溶解后，在高壓滅菌器中滅菌，冷卻后加入裂解血，即成副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法，其特征是，所述的步驟1)中，雞胸肌肉100克，加入蒸餾水800毫升，煮沸10分鐘，雞肉湯容量調(diào)整至900毫升。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法，其特征是，所述的步驟2)中，取綿羊或雞血100毫升，放入-40℃冰箱凍融3次。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法，其特征是，所述的步驟3)中，在900毫升雞肉湯中加入蛋白胨5克，酵母浸膏2克，葡萄糖5克，氯化鈉10克，溶解后調(diào)pH值為7.4，在高壓滅菌器中121℃滅菌20分鐘，冷卻后加入裂解血100毫升，即成副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基。
專利摘要
一種生物工程領(lǐng)域的副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基的制備方法，本發(fā)明包括以下步驟1)將雞胸肌肉洗凈，絞碎，加入蒸餾水，煮沸，過(guò)濾去除肉渣，調(diào)整雞肉湯容量；2)在無(wú)菌的條件下，取動(dòng)物血，放入冰箱凍融即成裂解血；3)在雞肉湯中加入蛋白胨，酵母浸膏，葡萄糖，氯化鈉，溶解后，在高壓滅菌器中滅菌，冷卻后加入裂解血，即成副雞嗜血桿菌液體培養(yǎng)基。本發(fā)明提高培養(yǎng)物含菌量，降低成本，能為臨床制備副雞嗜血桿菌疫苗提供高質(zhì)量的抗原。
文檔編號(hào)C12N1/20GKCN1724647SQ200510027329
公開(kāi)日2006年1月25日 申請(qǐng)日期2005年6月30日
發(fā)明者劉永德, 汪毅, 葉陳梁, 吳祖立 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan