專(zhuān)利名稱(chēng):鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽制備方法，尤其是指一種鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合 制備方法。
背景技術(shù)：
鳥(niǎo)氨酸(Ornithine)，是一種氨基酸，是在精氨酸(Arginine)產(chǎn)生尿素(尿的構(gòu) 成)時(shí)的新陳代謝產(chǎn)生的，是重要的醫(yī)藥中間體及原料藥和食品添加劑，主要用于治療肝 硬化，疾病的恢復(fù)以及增強(qiáng)體能。
國(guó)內(nèi)公開(kāi)號(hào)為CN1590367的一種L-鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的制備方法，其主要內(nèi)容包括 L-精氨酸溶于水中，加入相轉(zhuǎn)移催化劑冠醚和石灰乳氫氧化鈣，在攪拌回流加熱后加入助 催化劑膽堿，然后待反應(yīng)混合物冷卻后以6N硫酸調(diào)PH值。再經(jīng)過(guò)濾去除硫酸鈣，其濾液經(jīng) 減壓濃縮后用飽和氫氧化鋇溶液調(diào)PH值，再經(jīng)過(guò)濾去除硫酸鋇沉淀，其濾液以3N鹽酸調(diào) PH，再經(jīng)真空濃縮后加入乙醇，待冷卻后濾出。此方法的產(chǎn)品收率可達(dá)78 82%，純度為 彡 99. 0%，比旋光度[A]d2°+23. 0 +24. 50。
目前大多數(shù)的生產(chǎn)方法過(guò)多依賴(lài)化學(xué)試劑，對(duì)環(huán)境破壞大，成本高，產(chǎn)品收率以及 純度得不到保證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種經(jīng)濟(jì)環(huán)保的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法。充分利用生物酶 制得產(chǎn)品，區(qū)別現(xiàn)在大多數(shù)過(guò)多依賴(lài)化學(xué)試劑的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的上述技術(shù)問(wèn)題主要是通過(guò)下述技術(shù)方案得以解決的
鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法的步驟包括
A、將精氨酸干品作為底物溶于去離子水中配成轉(zhuǎn)化液，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至7 10之間，升溫至38°C 45°C，加入從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，放入38°C 45°C恒溫水域搖床中轉(zhuǎn)化10 40小時(shí)；
B、將步驟A得到的溶液取樣，點(diǎn)板，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入5 20ml/ L的新鮮黃豆中提取的脲酶，30°C 35°C保溫反應(yīng)40 70分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至 PH5 6之間，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中加入其2 5倍體積的酒 精，60°C 90°C條件下回流Ih后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后得鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品；
C、將步驟B得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品溶解于去離子水中，升溫至70°C 80°C，加 入粗品重量3 10%的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中加入其 2 5倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液，干 燥后得成品。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟A中，溶液中加入
牛肝酶液的量是以每IL轉(zhuǎn)化液中，加入20ml 120ml的牛肝酶液。
根據(jù)本方法轉(zhuǎn)化效率及后序提取、精制加工等工藝的要求，有效的控制酶在轉(zhuǎn)化液中的濃度，不僅可以提高轉(zhuǎn)化效率，亦可充分利用酶活力，使反應(yīng)體系達(dá)到一個(gè)最佳的平 衡環(huán)境，確保產(chǎn)品的后序提取，精制加工的要求。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟A中，轉(zhuǎn)化液底物 濃度控制在50 300g/L。底物濃度的控制決定反應(yīng)底物向目標(biāo)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率，及符合后 序加工工藝的要求，因此有效的控制反應(yīng)底物的濃度，不僅可以提高反應(yīng)轉(zhuǎn)化效率，易可充 分的利用酶活力，使反應(yīng)環(huán)境符合反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的要求，從而達(dá)到穩(wěn)定工藝，提高生產(chǎn)效率， 節(jié)約能源的目的。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟A中，觸媒為Mn2+ 離子，Mn2+離子濃度控制在0. 2 0. 6mmol/L0 Mn2+觸媒可以是硫酸錳、醋酸錳、氯化錳等。
Mn2+的在反應(yīng)體系中的濃度決定酶活的釋放，及反應(yīng)向產(chǎn)物方向的轉(zhuǎn)移，濃度過(guò) 低、過(guò)高都會(huì)抑制酶活，促使反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟B中，點(diǎn)板展開(kāi)劑 為正丙醇和氨水，其質(zhì)量百分比為正丙醇氨水=65 75 35 25。上述溶液的質(zhì)量百 分比為有效成分的質(zhì)量百分比。
展開(kāi)劑的選擇及配比決定對(duì)成分的溶解及組分之間的分離效果，且不與組分間發(fā) 生反應(yīng)，本展開(kāi)劑的組分選擇及配比可使產(chǎn)物與底物其他相關(guān)雜質(zhì)有效的分離，呈現(xiàn)清晰 的獨(dú)立斑點(diǎn)。
最為優(yōu)選，所述的正丙醇和氨水的質(zhì)量百分比為正丙醇氨水=72 28。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟C中，鳥(niǎo)氨酸鹽酸 鹽粗品按重量比10% 30%的濃度溶解于去離子水中。
此步驟為精制過(guò)程，生產(chǎn)過(guò)程中，一次性產(chǎn)品出來(lái)很難直接達(dá)到合格，因此需要一 個(gè)精制過(guò)程。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟A中，牛肝酶液的 制備方法為取新鮮牛肝于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎、細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，將牛 肝漿溶解于1 4倍質(zhì)量比的去離子水中，加入Mn2+離子，且濃度控制在0. 2 0. 6mmol/ L,共熱至30 70°C之間，保溫0. 5 2小時(shí)，過(guò)濾、收集濾液，濾液經(jīng)高速離心后，立即存放 于4°C冰箱中待用。Mn2+觸媒可以是硫酸錳、醋酸錳、氯化錳等。
上述鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，作為優(yōu)選，所述的步驟B中脲酶的制 備方法為將新鮮黃豆粉碎后，與30%體積百分比的乙醇混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分比為 1 2 3，然后在0 10°C下震蕩10分鐘，高速離心后取上清液，30 35°C使用，保溫 40 70分鐘。
本發(fā)明有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明方法的收率可達(dá)80-85%，產(chǎn)品純度可達(dá)99%以上。
本發(fā)明所采用的酶均來(lái)自于廉價(jià)易得的資源，動(dòng)物酶從市售牛肝中提取，植物酶 來(lái)自于黃豆的萃取液。
本發(fā)明方法與化學(xué)法相比具有工藝控制穩(wěn)定，反應(yīng)步驟少，生產(chǎn)效率高，成本低等 優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明方法與發(fā)酵法相比，采用酶技術(shù)制備鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽產(chǎn)品，克服了發(fā)酵法菌 種保藏及發(fā)酵過(guò)程控制染菌的難題，且發(fā)酵法環(huán)境污染大，生產(chǎn)污水量大，由于菌種發(fā)酵每升發(fā)酵液的產(chǎn)量極低，工藝不穩(wěn)定等問(wèn)題成為了發(fā)酵法制備該產(chǎn)品的難題。
本發(fā)明特點(diǎn)在于工藝控制穩(wěn)定，反應(yīng)步驟少，生產(chǎn)成本低，環(huán)境污染小，能耗低，所 得產(chǎn)品純度高等優(yōu)點(diǎn)，具有產(chǎn)業(yè)化的前景。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體的說(shuō)明。
實(shí)施例1
精氨酸酶的制備
取新鮮牛肝100g，于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎，細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，取 IOOg牛肝漿溶解于400ml去離子水中，加入催化劑，催化劑為硫酸錳，有效催化成分為Mn2+ 離子，且濃度控制在0. 2mmol/L，共熱至30°C，保溫0. 5小時(shí)，過(guò)濾、收集濾液，濾液經(jīng)高速離 心后，立即存放于4°C冰箱中待用。
脲酶的制備
取新鮮黃豆100g，粉碎后，與30%體積百分比的乙醇混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分 比為1 3，然后在10°C下震蕩10分鐘，高速離心后取上清液，30°C使用，保溫40分鐘，保 存在4°C以下。
轉(zhuǎn)化反應(yīng)
將IOOg精氨酸干品溶于2000ml去離子水中，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至10，升溫至 45°C，加入120ml從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，觸媒為醋酸錳，有效催化成分 為Mn2+離子，Mn2+離子濃度控制在0. 6mmol/L，放入45°C恒溫水域搖床中轉(zhuǎn)化40小時(shí)；
將上述溶液取樣，點(diǎn)板，點(diǎn)板展開(kāi)劑為正丙醇和氨水，正丙醇和氨水質(zhì)量百分比為 正丙醇氨水=65 35，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入5ml/L的新鮮黃豆中提取的 脲酶，30°C保溫反應(yīng)40分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至PH5，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出 后，向濃縮液中加入其2倍體積的酒精，60°C條件下回流Ih后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后得鳥(niǎo) 氨酸鹽酸鹽粗品；
將得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品取IOOg按重量比10%的濃度溶解于去離子水中，升 溫至70°C，加入粗品重量3%的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中 加入其2倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液， 干燥后得成品。
實(shí)施例2
精氨酸酶的制備
取新鮮牛肝100g，于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎，細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，取 IOOg牛肝漿溶解于100ml去離子水中，加入催化劑，催化劑為醋酸錳，有效催化成分為Mn2+ 離子，且濃度控制在0. 6mmol/L,共熱至70°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾、收集濾液，濾液經(jīng)高速離心 后，立即存放于4°C冰箱中待用。
脲酶的制備
取新鮮黃豆100g，粉碎后，與30%體積百分比的乙醇混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分 比為1 2，然后在0°C下震蕩10分鐘，高速離心后取上清液，35°C使用，保溫70分鐘，保存 在4°C以下。[0044]轉(zhuǎn)化反應(yīng)
將IOOg精氨酸干品溶于300ml去離子水中，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至7，升溫至38°C， 加入20ml從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，觸媒為氯化錳，有效催化成分為Mn2+離 子，Mn2+離子濃度控制在0. 2mmol/L，放入38°C恒溫水域搖床中轉(zhuǎn)化10小時(shí)；
將上述溶液取樣，點(diǎn)板，點(diǎn)板展開(kāi)劑為正丙醇和氨水，正丙醇和氨水質(zhì)量百分比為 正丙醇氨水=75 25，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入20ml/L的新鮮黃豆中提取的 脲酶，35°C保溫反應(yīng)70分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至PH6，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出 后，向濃縮液中加入其5倍體積的酒精，90°C條件下回流Ih后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后得鳥(niǎo) 氨酸鹽酸鹽粗品；
將得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品取IOOg按重量比30%的濃度溶解于去離子水中，升 溫至80°C，加入粗品重量4%的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中 加入其5倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液， 干燥后得成品。
實(shí)施例3
精氨酸酶的制備
取新鮮牛肝100g，于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎，細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，取 IOOg牛肝漿溶解于200ml去離子水中，加入催化劑，催化劑為氯化錳，有效催化成分為Mn2+ 離子，且濃度控制在0. 4mmol/L，共熱至35°C，保溫1小時(shí)，過(guò)濾、收集濾液，濾液經(jīng)高速離心 后，立即存放于4°C冰箱中待用。
脲酶的制備
取新鮮黃豆100g，粉碎后，與30%體積百分比的乙醇混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分 比為1 2.9，然后在2°C下震蕩10分鐘，高速離心后取上清液，35°C使用，保溫60分鐘，保 存在4°C以下。
轉(zhuǎn)化反應(yīng)
將IOOg精氨酸干品溶于1800ml去離子水中，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至8，升溫至44°C， 加入70ml從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，觸媒為硫酸錳，有效催化成分為Mn2+離 子，Mn2+離子濃度控制在0. 25mmol/L，放入43°C恒溫水域搖床中轉(zhuǎn)化35小時(shí)；
將上述溶液取樣，點(diǎn)板，點(diǎn)板展開(kāi)劑為正丙醇和氨水，正丙醇和氨水質(zhì)量百分比為 正丙醇氨水=68 32，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入18ml/L的新鮮黃豆中提取的 脲酶，31°C保溫反應(yīng)45分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至PH6，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出 后，向濃縮液中加入其4. 5倍體積的酒精，65°C條件下回流Ih后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后得 鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品；
將得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品取IOOg按重量比15%的濃度溶解于去離子水中，升 溫至77°C，加入粗品重量10%的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中 加入其2倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液， 干燥后得成品。
實(shí)施例4
精氨酸酶的制備
取新鮮牛肝100g，于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎，細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，取IOOg牛肝漿溶解于300ml去離子水中，加入催化劑，催化劑為硫酸錳和醋酸錳和氯化錳，有 效催化成分為Mn2+離子，且濃度控制在0. 5mmol/L，共熱至50°C，保溫1. 5小時(shí)，過(guò)濾、收集 濾液，濾液經(jīng)高速離心后，立即存放于4°C冰箱中待用。
脲酶的制備
取新鮮黃豆100g，粉碎后，與30%體積百分比的乙醇混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分 比為1 2，然后在8°C下震蕩10分鐘，高速離心后取上清液，32°C使用，保溫45分鐘，保存 在4°C以下。
轉(zhuǎn)化反應(yīng)
將IOOg精氨酸干品溶于1500ml去離子水中，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至7，升溫至39°C， 加入35ml從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，觸媒為硫酸錳和醋酸錳和氯化錳，有 效催化成分為Mn2+離子，Mn2+離子濃度控制在0. 2mmol/L，放入44°C恒溫水域搖床中轉(zhuǎn)化15 小時(shí)；
將上述溶液取樣，點(diǎn)板，點(diǎn)板展開(kāi)劑為正丙醇和氨水，正丙醇和氨水質(zhì)量百分比為 正丙醇氨水=70 30，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入18ml/L的新鮮黃豆中提取的 脲酶，31°C保溫反應(yīng)65分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至PH5，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出 后，向濃縮液中加入其2 5倍體積的酒精，85°C條件下回流Ih后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后 得鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品；
將得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品取IOOg按重量比15%的濃度溶解于去離子水中，升 溫至80°C，加入粗品重量5%的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中 加入其4倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液， 干燥后得成品。
實(shí)施例5
精氨酸酶的制備
取新鮮牛肝100g，于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎，細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，取 IOOg牛肝漿溶解于250ml去離子水中，加入催化劑，催化劑為醋酸錳和氯化錳，有效催化成 分為Mn2+離子，且濃度控制在0. 3mmol/L,共熱至55°C，保溫1. 5小時(shí)，過(guò)濾、收集濾液，濾液 經(jīng)高速離心后，立即存放于4°C冰箱中待用。
脲酶的制備
取新鮮黃豆100g，粉碎后，與30%體積百分比的乙醇混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分 比為1 2. 5，然后在5°C下震蕩10分鐘，高速離心后取上清液，33°C使用，保溫30分鐘，保 存在4°C以下。
轉(zhuǎn)化反應(yīng)
將IOOg精氨酸干品溶于700ml去離子水中，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至8，升溫至41°C， 加入60ml從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，觸媒為硫酸錳和醋酸錳，有效催化成 分為Mn2+離子，Mn2+離子濃度控制在0. 5mmol/L，放入40°C恒溫水域搖床中轉(zhuǎn)化30小時(shí)；
將上述溶液取樣，點(diǎn)板，點(diǎn)板展開(kāi)劑為正丙醇和氨水，正丙醇和氨水質(zhì)量百分比為 正丙醇氨水=72 28，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入10ml/L的新鮮黃豆中提取的 脲酶，33°C保溫反應(yīng)50分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至PH5，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出 后，向濃縮液中加入其3倍體積的酒精，80°C條件下回流Ih后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后得鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品；
將得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品取IOOg按重量比20%的濃度溶解于去離子水中，升 溫至75°C，加入粗品重量9%的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中 加入其3倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液， 干燥后得成品。
在本文所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明精神和部分實(shí)驗(yàn)作舉例說(shuō)明。本發(fā)明 所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類(lèi)似的 方式替代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求
書(shū)所定義的范圍。
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權(quán)利要求
一種鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其步驟包括A、將精氨酸干品作為底物溶于去離子水中配成轉(zhuǎn)化液，用2N鹽酸調(diào)節(jié)PH至7～10之間，升溫至38℃～45℃，加入從新鮮牛肝中提取的牛肝酶液，加入觸媒，放入38℃～45℃恒溫水浴搖床中轉(zhuǎn)化10～40小時(shí)；所述的觸媒為Mn2+離子，Mn2+離子濃度控制在0.2～0.6mmol/L；B、將步驟A得到的溶液取樣，點(diǎn)板，待精氨酸斑點(diǎn)轉(zhuǎn)化完全消失后，加入5～20ml/L的新鮮黃豆中提取的脲酶，30℃～35℃保溫反應(yīng)40～70分鐘后，滴加6N鹽酸酸化至PH5～6之間，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中加入其2～5倍體積的酒精，60℃～90℃條件下回流1h后，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾后得鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品；點(diǎn)板展開(kāi)劑為正丙醇和氨水，其質(zhì)量百分比為正丙醇∶氨水＝65～75∶35～25；C、將步驟B得到的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品溶解于去離子水中，升溫至70℃～80℃，加入粗品重量3～10％的活性炭，脫色過(guò)濾，濃縮至有少量晶體析出后，向濃縮液中加入其2～5倍體積的酒精，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾去母液后用少量乙醇清洗晶體表面殘留母液，干燥后得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其特征在于，所述的步 驟A中，溶液中加入牛肝酶液的量是以每IL轉(zhuǎn)化液中，加入20ml 120ml的牛肝酶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其特征在于，所述的步 驟A中，轉(zhuǎn)化液底物濃度控制在50 300g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其特征在于，所述的觸 媒為硫酸錳或醋酸錳或氯化錳。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其特征在于，所述的步 驟C中，鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽粗品按重量比10% 30%的濃度溶解于去離子水中。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1或2或3或4或5所述的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其特 征在于，所述的步驟A中，牛肝酶液的制備方法為取新鮮牛肝于冰凍粉碎機(jī)內(nèi)進(jìn)行粉碎、 細(xì)胞破壁，然后在4°C保存待用，將牛肝漿溶解于1 4倍質(zhì)量比的去離子水中，加入Mn2+離 子，且濃度控制在0. 2 0. 6mmol/L，共熱至30 70°C之間，保溫0. 5 2小時(shí)，過(guò)濾、收集 濾液，濾液經(jīng)高速離心后，立即存放于4°C冰箱中待用。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1或2或3或4或5所述的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法，其特 征在于，所述的步驟B中脲酶的制備方法為將新鮮黃豆粉碎后，與30%體積百分比的乙醇 混合，黃豆與乙醇質(zhì)量百分比為1 2 3，然后在0 10°C下震蕩10分鐘，高速離心后取 上清液，30 35°C使用，保溫40 70分鐘。
專(zhuān)利摘要
本發(fā)明涉及一種鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽制備方法，尤其是指一種鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法。本發(fā)明提供一種經(jīng)濟(jì)環(huán)保的鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽的雙酶耦合制備方法。充分利用生物酶制得產(chǎn)品，區(qū)別現(xiàn)在大多數(shù)過(guò)多依賴(lài)化學(xué)試劑的生產(chǎn)方法。本發(fā)明采用新鮮黃豆中提取的脲酶和新鮮牛肝中提取的牛肝酶液制備鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽。
文檔編號(hào)C12P13/00GKCN101348808 B發(fā)布類(lèi)型授權(quán) 專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朇N 200810120055
公開(kāi)日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2008年7月17日
發(fā)明者吳培立, 周玉平, 孫軍, 張勇, 張姝, 潘慶偉, 王雷, 繆銘, 黎法國(guó) 申請(qǐng)人:寧波市鎮(zhèn)海海德生化科技有限公司;王雷導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專(zhuān)利引用 (2), 非專(zhuān)利引用 (2),