專利名稱:產(chǎn)生肌苷的微生物以及使用其生產(chǎn)肌苷的方法
產(chǎn)生肌苷的微生物以及使用其生產(chǎn)肌苷的方法技術(shù)領(lǐng)域：
[0001]本發(fā)明涉及一種產(chǎn)生肌苷的微生物以及使用其生產(chǎn)肌苷的方法。肌苷屬于嘌呤核苷，是一種在5’ -肌苷酸合成中非常重要的原料。更具體地說，本發(fā)明涉及一種產(chǎn)生高濃度肌苷的棒狀桿菌屬重組微生物，其中產(chǎn)氨短桿菌CJIPM01 (KCCM-10610)的特征被顯示， 編碼核苷水解酶II的基因(此后被稱為‘rih II’ )被失活，并且編碼5-核苷酸酶的基因 (此后被稱為‘ushA’ )的表達被增強。
背景技術(shù)：
[0002]作為核苷合成相關(guān)的酶，已知核苷水解酶II參與核苷的降解，并且已知5’ -核苷酸酶參與核苷的合成。[0003]編碼核苷水解酶II的基因是在核苷補救合成途徑中編碼酶的基因，該酶不可逆地催化核糖和相應堿基，即嘌呤和嘧啶。該基因含有核苷序列和編碼308個氨基酸的蛋白質(zhì)，并對嘌呤核苷和嘧啶核苷兩者具有底物特異性(Microbiology，2006，vol. 152， ppll69-1177)。[0004]編碼5’_核苷酸酶的基因是在核苷生物合成途徑(從頭合成途徑)中編碼催化核苷諸如AMP，GMP，IMP和XMP的去磷酸化作用的酶的基因。該基因編碼705個氨基酸的蛋白質(zhì)。[0005]肌苷是在作為風味增強調(diào)料而受矚目的5’ -肌苷酸的化學合成和通過酶轉(zhuǎn)移合成中的重要底物。而且，肌苷是一種核酸生物合成的中間體，其不僅是一種動物和植物中的重要生理因子，而且還被應用到包括食品和醫(yī)藥工業(yè)等各個領(lǐng)域。已經(jīng)報道核苷及其衍生物作為抗生素、抗腫瘤和抗病毒物質(zhì)具有許多用途(J. Virol，vol ；72，pp4858_4865)。[0006]生產(chǎn)肌苷的常規(guī)方法為使用微生物諸如芽孢桿菌(Agric. Biol. Chem.，46， 2347(1982)；韓國專利號 27280 或者產(chǎn)氨短桿菌(Agric. Biol. Chem.，42，399 (1978))直接發(fā)酵，或者5’-肌苷酸的熱分解(日本專利早期公開號S43-3320)。但是，熱分解需要大量的的熱量，這使其難以實踐。按照直接發(fā)酵法，產(chǎn)生肌苷的菌株的活性非常低，因此生產(chǎn)成本增加并且發(fā)酵時間較長，從而導致產(chǎn)率很低。[0007]為了通過使用高濃度高產(chǎn)量的微生物來直接發(fā)酵生產(chǎn)肌苷，開發(fā)適于在其培養(yǎng)液中高濃度積累肌苷的菌株是非常重要的。[0008]本發(fā)明的發(fā)明人持續(xù)研究了使用微生物通過直接發(fā)酵生產(chǎn)高產(chǎn)率/高收率的肌苷。最后，本發(fā)明的發(fā)明人通過證實當編碼核苷水解酶II的rih II基因被失活并且編碼 5’ -核苷酸酶的ushA基因被增強時產(chǎn)生肌苷的微生物可高產(chǎn)率/高產(chǎn)量的生產(chǎn)5’ -肌苷酸而完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容
[0009]技術(shù)問題[0010]本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而建立。因此，本發(fā)明的一個目的在于提供一種棒狀桿菌屬3重組微生物，其中編碼核苷水解酶II的rih II基因被失活，并且編碼5’-核苷酸酶的ushA 基因被增強。[0011]本發(fā)明的另一目的在于提供一種使用上述微生物生產(chǎn)肌苷的方法。[0012]技術(shù)方案[0013]本發(fā)明的上述目的和其他目的可通過本發(fā)明的下列實施例來實現(xiàn)。[0014]此后，將對本發(fā)明進行詳細描述。[0015]為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明通過對在CJIP2401(KCCM_10610)的核苷合成途徑中涉及的基因進行操作，提供了具有核苷生產(chǎn)能力的微生物，其為能夠高濃度積累 5’ -肌苷的產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872的突變株。[0016]在本發(fā)明中使用的菌株為親本菌株產(chǎn)氨短桿菌CJIPM01(KCCM_10610)[韓國專利公開號10-2004-0099466]，是產(chǎn)氨短桿菌MP377(KFCC1 1141)的突變株。產(chǎn)氨短桿菌 MP377 (KFCC1 1141)的突變株[韓國專利申請?zhí)?0-2000-0013303]來源于產(chǎn)氨短桿菌 KFCC-10814 [韓國專利號127853]，是產(chǎn)氨短桿菌6872的突變株。因此，本發(fā)明的微生物具有以下所述的主要特征并具有與產(chǎn)氨短桿菌CJIPM01 (KCCM-10610)相似的效果。[0017]1)腺嘌呤營養(yǎng)缺陷型(Adenine auxotroph)[0018]2)鳥嘌呤缺乏型(Guanine leaky type)[0019]3)生物素營養(yǎng)缺陷型(Biotin auxotroph)[0020]4)對8g/mL溶菌酶敏感[0021]5)對;3500g/mL 3，4_ 脫氫脯氨酸(dihydroproline)具有抗性[0022]6)對300g/mL 6_巰基嘌呤具有抗性[0023]7)對 10mg/L 5_ 氟色氨酸(f luorotryptophan)具有抗性[0024]在本發(fā)明中，編碼核苷水解酶II的rih II基因是從野生型產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872 中分離并優(yōu)選具有由SEQ. ID. NO 1表示的序列。[0025]在本發(fā)明中，編碼5’-核苷酸酶的ushA基因被從野生型產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872中分離并優(yōu)選具有由SEQ. ID. NO 2表示的序列。[0026]本發(fā)明提供了一種棒狀桿菌屬重組微生物，其中編碼核苷水解酶II的rih II基因被失活。[0027]本發(fā)明還提供了一種棒狀桿菌屬微生物，其中編碼核苷水解酶II蛋白質(zhì)的rih II基因被失活并且編碼5’ -核苷酸酶的ushA基因的表達被增強。[0028]在本發(fā)明中，“失活”可由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法來誘導。本文中的術(shù)語 “失活”的意思是指與野生型菌株相比編碼核苷水解酶II的rih II基因表達被降低到很低的水平，或者該基因不表達或者該基因表達的產(chǎn)物不具有活性，或者盡管被表達但活性降低。[0029]在本發(fā)明中，“失活”可由選自下組的一種或多種突變方法誘導，該組由在rih II 基因中插入一個或多個堿基對，在該基因中敲除一個或多個堿基對，通過在該基因中插入無義密碼子轉(zhuǎn)換或顛換堿基對所組成。[0030]在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，含有失活基因的微生物可通過培養(yǎng)使用含有部分rih II基因的載體轉(zhuǎn)化的棒狀桿菌屬微生物而得到。[0031]該基因的部分可通過使用由SEQ. ID. NO 3和NO 4表示的引物來合成。[0032]在本發(fā)明中，rih II基因通過將重組載體插入到棒狀桿菌中而失活。但是，作為代替重組載體的方法，可使用任何已知方法包括病毒傳染都可被用于使rih II基因失活， 但并不總限于此。[0033]在本發(fā)明中，基因表達的增強可通過任何對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說常規(guī)的方法來進行。這里，基因表達的加強指的是與野生型菌株相比編碼5’ -核苷酸酶的ushA基因的上調(diào)。[0034]在本發(fā)明中，基因表達的增強通過含有編碼5’_核苷酸酶的ushA基因的啟動子區(qū)域的整個表達系統(tǒng)的活化來誘導。[0035]在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，含有增強基因的微生物可通過培養(yǎng)含有由SEQ. ID. NO 2表示的載體轉(zhuǎn)化以表達包括編碼5’ -核苷酸酶的ushA基因的啟動子區(qū)的整個表達系統(tǒng)的棒狀桿菌屬微生物而得到。[0036]本發(fā)明進一步提供了產(chǎn)氨短桿菌CJIG650(保藏號KCCM_10828P)，所述菌株具有失活的rih II基因并高濃度產(chǎn)生5’ -肌苷酸和肌苷，其為產(chǎn)氨短桿菌CJIPM01(KCCM 10610)的突變株。[0037]本發(fā)明還提供了產(chǎn)氨短桿菌CJIG651 (保藏號KCCM_10^9P)，所述菌株具有失活的rih II基因和增強的ushA基因并高濃度產(chǎn)生肌苷，其為產(chǎn)氨短桿菌 CJIG650 (KCCM-10828P)的突變株。[0038]本發(fā)明還提供了通過培養(yǎng)產(chǎn)氨短桿菌CJIG650 (KCCM-10828P)和 CJIG651 (KCCM-10829P)以及在培養(yǎng)液中積累肌苷來高濃度高產(chǎn)量生產(chǎn)肌苷的方法。[0039]本發(fā)明的菌株的構(gòu)建過程如下。[0040]使用產(chǎn)生5’ -肌苷酸的棒狀桿菌屬微生物例如產(chǎn)氨短桿菌ATCC6872的染色體進行測序。結(jié)果證實，編碼核苷酸水解酶II的rih II基因大約為13^bp(SEQ. ID. NO :1)。進行PCR以得到基因片段來構(gòu)建重組載體。產(chǎn)生5’ -肌苷酸的棒狀桿菌屬微生物被載體轉(zhuǎn)化并且從轉(zhuǎn)化菌株中選擇高濃度產(chǎn)生5’ -肌苷酸和肌苷的菌株。通過對產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872的染色體進行測序，可以確定編碼5，-核苷酸的ushA基因大約為21Mbp(SEQ. ID. NO 2)。進行PCR以得到基因片段來構(gòu)建重組載體。產(chǎn)生5’-肌苷酸的棒狀桿菌屬微生物被載體轉(zhuǎn)化并且從轉(zhuǎn)化菌株中選擇只高濃度產(chǎn)生肌苷的菌株。[0041]本發(fā)明的微生物優(yōu)選通過使用含有編碼核苷酸水解酶II的rih II基因的重組載體和含有編碼編碼核苷酸酶的ushA基因的重組載體轉(zhuǎn)化產(chǎn)生5’ -肌苷酸的棒狀桿菌屬微生物得到。含有編碼核苷酸水解酶II基因的重組載體包括500bp的rih II的結(jié)構(gòu)基因序列，而含有5’ -核苷酸酶基因的重組載體大約包括300bp的啟動子、ushA結(jié)構(gòu)基因序列和大約300bp的終止子。本發(fā)明的微生物是通過插入以產(chǎn)生5’-肌苷酸的棒狀桿菌屬微生物的染色體構(gòu)建含有rih II基因的重組載體來斷裂基因以及通過以質(zhì)粒形式過表達ushA基因的方式而產(chǎn)生的。[0042]含有核苷酸水解酶II基因的重組載體通過下列過程構(gòu)建；通過PCR得到的rih II基因被分離并純化；并通過連接將純化的基因插入到PCR2. 1-T0P0載體中。這里重組載體優(yōu)選為通過將一部分核苷水解酶II的結(jié)構(gòu)基因插入到PCR2. 1-T0P0載體中構(gòu)建的 pTOPO-rih II載體。含有5’ -核苷酸酶基因的重組載體構(gòu)建如下；通過PCR得到的ushA 基因使用EcoRY和BamHI消化；并通過使用DNA T4連接酶將基因片段插入到使用相同的DNA限制酶預先消化的載體中。可適用的載體不限于特定的一種，并且對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說任何常規(guī)載體都可被使用。但是，pECCGl 17載體[Biotechnology letters vol 13， No. 10，p. 721-726(1991)或者韓國專利公開號92-7401]是優(yōu)選的，通過將ushA基因插入到peCCG117載體中構(gòu)建的pECCG 117-ushA載體是特別優(yōu)選地。[0043]使用重組載體例如pTOPO-rih II，可通過常規(guī)電轉(zhuǎn)化將線性DNA片段插入到微生物(例如產(chǎn)氨短桿菌CJIPM01(KCCM-10610))中，并在含有用作選擇標記的抗生素卡那霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該微生物，接著進行選擇。pTOPO-rih II載體在選擇性轉(zhuǎn)化的菌株中的插入可通過PCR來確認。[0044]為了在選擇的轉(zhuǎn)化菌株中過表達ushA基因，使用pECCGl 17-ushA載體通過電轉(zhuǎn)化將線性DNA片段插入到所選的轉(zhuǎn)化菌株中，并在含有用作選擇標記的抗生素的氯霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)該微生物，接著進行選擇。pECCG117-ushA載體在選擇的轉(zhuǎn)化菌株中的插入可通過 PCR來確認。[0045]本發(fā)明的微生物可在含有適當碳源、氮源、氨基酸和維生素的常規(guī)培養(yǎng)基中在有氧條件下適當?shù)卣{(diào)節(jié)溫度和PH來培養(yǎng)。[0046]作為碳源，可選自下組中糖類的一種，該組由葡萄糖、果糖以及預先滅菌處理的糖蜜(糖蜜被轉(zhuǎn)化為還原糖)所組成。示例性的氮源為無機氮源諸如氨、氯化銨和硫酸銨，有機氮源諸如蛋白胨、NZ-胺、肉湯、酵母膏、玉米浸出液、酪蛋白水解產(chǎn)物、魚及其分解產(chǎn)物、 以及脫脂豆餅及其降解產(chǎn)物。這里的培養(yǎng)基可另外包括無機化合物諸如磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸鐵、硫酸鎂和硫酸鈣等。另外，維生素和營養(yǎng)缺陷型堿基也可被加入。 培養(yǎng)在有氧條件下優(yōu)選在20-40°C下通過搖瓶培養(yǎng)或者液體深層發(fā)酵培養(yǎng)進行。pH優(yōu)選在整個培養(yǎng)過程被調(diào)節(jié)為中性左右。培養(yǎng)時間優(yōu)選為4-5天。通過直接發(fā)酵積累的肌苷可通過常規(guī)方法回收。[0047]根據(jù)本發(fā)明的方法，肌苷可高產(chǎn)量生產(chǎn)。
[0048]參照附圖最佳理解本發(fā)明的優(yōu)選實施例的應用，其中[0049]圖1是說明來自野生型產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872的編碼核苷水解酶II的rih II基因片段的克隆過程以及克隆的載體pTOPO-rih II的示意圖。[0050]圖2是說明來自野生型產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872的編碼5’ -核苷酸酶的ushA基因片段的克隆過程以及克隆的載體pECCG117-ushA的示意圖。[0051]最佳實施方式[0052]本發(fā)明的實踐和現(xiàn)有優(yōu)選實施例如下面的例子中顯示的那樣闡釋的。[0053]但是，可以理解的是在本發(fā)明的教導下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)進行修改和改進。[0054]實施例1 :rih II基因的克隆[0055]在該實施例中，使用野生型產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872的染色體DNA作為模板并且以SEQ. ID. NO :3和NO 4表示寡核苷酸作為引物通過PCR擴增的rih II基因片段 (SEQ. ID. NO 1),以構(gòu)建含有一部分編碼核苷水解酶II的rih II基因和抗生素標記的載體 (rih II基因斷裂載體)。按照下列方式進行PCR;96°C下變性30秒，52°C下退火30秒，并72°C下聚合30秒(30個循環(huán))。擴增的rih II基因片段被克隆到pCR2. 1-T0P0(Invitrogen Co. ,USA)質(zhì)粒中。結(jié)果得到pTOPO-rih II載體。rih II基因片段的克隆過程以及克隆的載體pTOPO-rih II在圖1中示出。[0056]產(chǎn)氨短桿菌CJIP2401(KCCM-10610)使用構(gòu)建的pT0P0_rih II載體通過電轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化。然后，回收在含有卡那霉素05mg/L)的CM固體培養(yǎng)基(肉湯10g/L，酵母膏10g/L，細菌蛋白胨10g/L，氯化鈉2. 5g/L，細菌瓊脂粉1. 7%,pH 7. 0)上生長的單菌落。[0057]菌落在含有相同抗生素的CM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接著分離質(zhì)粒。質(zhì)粒的大小首先被測定，然后使用包括PCR2. 1-T0P0的多個克隆區(qū)域的兩端的引物進行菌落PCR，通過測定插入的DNA的大小來確認轉(zhuǎn)化。[0058]用于使rih II基因失活的引物如下。[0059]引物 rih II-F(SEQ. ID. NO 3)[0060]5’ -TGCTGGCGATGCACTTGAAT-3[0061]引物 rih II-B (SEQ. ID. NO 4)[0062]5 ‘ -TGTGCGACCAATGGTGGGGCC-3[0063]上面選擇的含有rih II基因的菌株被命名為產(chǎn)氨短桿菌CJIG650，其于2006年 12 月 15 日被保藏在 KFCC (Korean Federation of CultureCollection)的 KCCM (韓國微生物保存中心)(保藏號=KCCM 10828P)。[0064]實施例2 =UshA基因的克隆[0065]在該實施例中，使用野生型產(chǎn)氨短桿菌ATCC 6872染色體DNA作為模板并使用由 SEQ. ID. NO 5禾口 NO 6表示的引物通過PCR擴增2115bp的ushA基因片段(SEQ. ID. NO :2)。 按照下列方式進行PCR ；96°C下變性30秒，52°C下退火30秒，并72°C下聚合30秒(30個循環(huán))。得到的基因片段使用EcoRV和BamHI消化。通過使用T4連接酶將基因片段與使用相同的DNA限制酶消化的線性pECCG117載體連接。結(jié)果，得到pECCGl 17_ushA載體。ushA 基因片段的克隆過程以及以及克隆的載體pECCG117-ushA在圖2中示出。[0066]使用構(gòu)建的pECCG117_ushA載體通過電轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化在實施例1中制備的突變菌株。 然后，回收在含有氯霉素(7. 5mg/L)的CM固體培養(yǎng)基(肉湯10g/L，酵母膏10g/L，細菌蛋白胨10g/L，氯化鈉2. 5g/L，細菌瓊脂粉1. 7%, pH 7. 0)上生長的單菌落。將這些菌落在含有相同抗生素的CM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接著分離質(zhì)粒。首先測定質(zhì)粒的大小，然后使用包括 PECCG117的多個克隆區(qū)域的兩端的引物進行菌落PCR，通過測定插入的DNA的大小來確認轉(zhuǎn)化。[0067]用于過表達ushA基因的引物如下。[0068]弓 I 物 ushA-F (SEQ. ID. NO 5)[0069]5’ -GTGTCTAAGTTTCGCCGTTTTGGC-3[0070]引物 ushA-B (SEQ. ID. NO 6)[0071]5 ’ -GCCGGATCCCTAGAATTTGATGTGGCTAACCTCG-3[0072]上面選擇的含有ushA基因的菌株被命名為產(chǎn)氨短桿菌CJIG651，其于2006年12 月 15 日被保藏在 KFCC (Korean Federation of CultureCollection)的 KCCM (韓國微生物保存中心)(保藏號KCCM 10829P)。[0073]實施例3 在三角瓶中進行發(fā)酵試驗[0074]將3mL種子培養(yǎng)基分配到已高壓滅菌的直徑為18mm的試管中。將產(chǎn)氨短桿菌 CJIG650 (KCCM-10828P), CJIG651 (KCCM-10829P)和親本菌株(KCCM-10610)分別接種在試管中，接著30°C搖瓶培養(yǎng)M小時以制備種子培養(yǎng)液。將27mL發(fā)酵培養(yǎng)基分配到120°C高壓滅菌10分鐘的500mL三角瓶中搖瓶培養(yǎng)。在接種3mL種子培養(yǎng)基后，培養(yǎng)4-5天。每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)(RPM)被調(diào)節(jié)為200并且溫度設(shè)定為32°C，pH調(diào)節(jié)為7. 2。[0075]種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的成分如下。[0076]種子培養(yǎng)基葡萄糖5%，蛋白胨0. 5%，肉湯0. 5%，酵母膏1%，氯化鈉0. 25%， 腺嘌呤 100mg/L，鳥嘌呤 100mg/L，pH7. 2。[0077]搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基谷氨酸鈉0. 1 %，氯化銨1 %，硫酸鎂1.2%，氯化鈣0. 01 %，硫酸鐵20mg/L，硫酸鎂20mg/L，硫酸鋅20mg/L，硫酸銅5mg/L，L-半胱氨酸2;3mg/L，丙氨酸2%ig/ L,尼克酸8mg/L,生物素45 μ g/L，鹽酸硫胺素5mg/l，腺嘌呤30mg/L,磷酸(85% ) 1. 9%，由果糖、葡萄糖和糖蜜的混合物轉(zhuǎn)化的還原糖8%。[0078]對肌苷酸(IMP)或肌苷在CJIG650 (KCCM-10828P)，CJIG651 (KCCM-10829P)和親本菌株(KCCM-10610)培養(yǎng)基中的積累情況進行相互比較。結(jié)果顯示于表1中。如表 1所示，在親本菌株(KCCM-10610)培養(yǎng)基中僅有肌苷酸被積累，并且其中根本沒有積累肌苷。但是，本發(fā)明的菌株CJIG650(KCCM-10^8P)產(chǎn)生高濃度的肌苷酸和肌苷，而菌株 CJIG651 (KCCM-10829P)產(chǎn)生高濃度的肌苷。[0079]因此，本發(fā)明的菌株 CJIG650 (KCCM-10828P)和 CJIG651 (KCCM-10829P)被確認為能夠產(chǎn)生高濃度肌苷的菌株。[0080]表 1[0081]
權(quán)利要求
1.一種通過使具有由SEQ. ID. NO :1表示的序列的編碼核苷水解酶II的基因失活而高濃度產(chǎn)生肌苷的產(chǎn)氨短桿菌(Corynebacterium ammoniagenes)。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1的產(chǎn)氨短桿菌，其特征在于，失活通過使用包括一部分由SEQ. ID. NO 1表示的序列和抗生素標記的載體轉(zhuǎn)化微生物來誘導。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1的產(chǎn)氨短桿菌，其特征在于，微生物為產(chǎn)氨短桿菌CJIG650，其保藏號為 KCCM-10^8P。
4.一種通過培養(yǎng)權(quán)利要求
3所述的微生物中的一種微生物以及從培養(yǎng)液中得到積累的肌苷酸和肌苷來產(chǎn)生肌苷酸和肌苷的方法。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1的產(chǎn)氨短桿菌，其特征在于，通過過表達進一步增強編碼5’-核苷酸酶的基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求
5的產(chǎn)氨短桿菌，其特征在于，基因的過表達通過使用含有由SEQ. ID. NO 2表示的序列的載體轉(zhuǎn)化微生物誘導。
7.根據(jù)權(quán)利要求
5的產(chǎn)氨短桿菌，其特征在于，微生物為產(chǎn)氨短桿菌CJIG651，其保藏號為 KCCM-10^9P。
8.—種通過培養(yǎng)權(quán)利要求
7所述的微生物中的一種微生物以及從培養(yǎng)液中得到積累的肌苷來生產(chǎn)肌苷的方法。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種產(chǎn)生肌苷的微生物以及使用其生產(chǎn)肌苷的方法。肌苷屬于嘌呤核苷，是一種在5’-肌苷酸合成中非常重要的原料。更具體地說，本發(fā)明涉及通過使編碼核苷水解酶II的基因失活，并且使編碼5’-核苷酸酶的基因被增強表達來高濃度產(chǎn)生肌苷的棒狀桿菌屬重組微生物，該微生物仍保留了產(chǎn)氨短桿菌CJIP2401(KCCM-10610)的特征。
文檔編號C12N1/20GKCN101583709 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200880002307
公開日2012年7月4日 申請日期2008年1月15日
發(fā)明者樸英薰, 李熙種, 李珍南, 趙光命 申請人:Cj第一制糖株式會社導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2), 非專利引用 (1),