專利名稱:海洋生物源降壓肽的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海洋生物源降壓肽的制備工藝，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
高血壓嚴(yán)重威脅著人類的健康，全世界高血壓患者約有9.72億人，每年因高血壓而死亡的人高達(dá)1200萬，每年用于治療高血壓及其并發(fā)癥的費(fèi)用也高達(dá)上萬億美元，人工合成的降壓藥物的療效得到醫(yī)學(xué)界的普遍認(rèn)可，但在臨床應(yīng)用過程中產(chǎn)生多種副作用，高安全性降壓肽成為研究的熱點(diǎn)。人體的升壓系統(tǒng)體腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renialangiotensin system,簡(jiǎn)稱RAS)和降壓系統(tǒng)激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(kallikrein-kininsystem，簡(jiǎn)稱KKS)在血壓調(diào)節(jié)及心血管功能方面扮演著重要角色。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)通過對(duì)RAS系統(tǒng)和KKS系統(tǒng)的調(diào)控達(dá)到升高血壓的作用。降壓肽抑制ACE酶，使得血管緊張素I (Ang I )無法轉(zhuǎn)化為具有強(qiáng)升壓作用的血管緊張素II (Ang II)，同時(shí)保持具有血管舒張作用緩激肽的生物活性，從而達(dá)到降壓的目的。由于海洋生態(tài)環(huán)境的特殊性(如高壓、低溫等)，使得海洋生物源蛋白質(zhì)具有多種特異性氨基酸的組成和序列，海洋生物源蛋白質(zhì)水解后暴露出降壓的活性位點(diǎn)，從而使海洋生物源活性肽具有降壓效果。同時(shí)，海洋生物源蛋白活性肽具有低抗原性的特點(diǎn)，安全性高，無毒副作用。因此海洋生物源蛋白質(zhì)是制備降壓肽的重要藥源，海洋生物源降壓肽的開發(fā)將成為高血壓非藥物治療的重要組成部分。
海洋生物源降壓肽上世紀(jì)90年代在國(guó)外得到廣泛的研究，進(jìn)入21世紀(jì)以后，國(guó)內(nèi)關(guān)于海洋生物源降壓肽的研究也多了起來。如公開號(hào)為CN102051399A的發(fā)明專利，公開了一種金槍魚中降血壓肽的提取方法，以金槍魚組織為原料，采用胃蛋白酶或者木瓜蛋白酶酶解，離心后，用大孔樹脂或葡聚糖凝膠樹脂純化，得到降壓肽產(chǎn)品。公開號(hào)為CN101240312A的發(fā)明專利，公開了一種源于魚皮ACE抑制肽的制備方法，它以羅非魚魚皮為原料，水提羅非魚魚皮中的魚皮蛋白，采用木瓜蛋白酶或中性蛋白酶進(jìn)行水解，離心過濾、離子交換、濃縮、超濾膜純化、SephadexG-15凝膠層析純化，冷凍干燥制得到ACE抑制肽產(chǎn)品。這些方法利用蛋白酶制備降壓肽，三廢少，是清潔工藝，生產(chǎn)的產(chǎn)品安全性高。但這些方法涉及的分離技術(shù)主要為離子樹脂層析法、凝膠柱層析法，從產(chǎn)品開發(fā)的角度來看，開發(fā)成本過高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)目前海洋生物源降壓肽制備工藝中存在的生產(chǎn)成本高、生產(chǎn)能力小、能耗大等問題，提供一種工藝簡(jiǎn)單安全、成本低、生產(chǎn)的產(chǎn)品純度高、分子量低、活性高的海洋生物源降壓肽的制備工藝，以充分利用海洋生物副產(chǎn)品，變廢為寶，開發(fā)高附加值的海洋生物源降壓肽。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
海洋生物源降壓肽的制備工藝，包括如下步驟:[0007](I)預(yù)處理
將海洋生物副產(chǎn)品投入清洗機(jī)中，加入海洋生物副產(chǎn)品重量10倍的堿溶液，堿溶液的質(zhì)量體積濃度為1_5%，攪拌10-12小時(shí)，用水洗凈；再加入相當(dāng)于海洋生物副產(chǎn)品重量10倍的酸溶液，酸溶液的體積百分比濃度為0.5-5%，攪拌8-10小時(shí)，水洗凈，除掉海洋生物副產(chǎn)品的脂肪和其它雜質(zhì)；
(2)海洋生物源蛋白質(zhì)的提取
將經(jīng)過預(yù)處理并洗凈的海洋生物副產(chǎn)品置于反應(yīng)釜中，加入相當(dāng)于海洋生物副產(chǎn)品重量十倍的水和相當(dāng)于海洋生物副產(chǎn)品投料重量0.3(3)海洋生物源蛋白質(zhì)的純化
將海洋生物源蛋白質(zhì)置于陶瓷膜設(shè)備中，經(jīng)濾袋處理后，進(jìn)行微濾除雜，除掉樣品的顆粒狀雜質(zhì)和大分子雜質(zhì)；再用納濾膜去除掉小分子雜質(zhì)和無機(jī)鹽，得到高純海洋生物源蛋白質(zhì)；
(4)海洋生物源降壓肽的制備
向高純海洋生物源蛋白質(zhì)中添加相當(dāng)于蛋白投料重量0.3 — 0.9%的蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度為40-60°C，酶解反應(yīng)pH值控制在5-8，酶解3_6小時(shí)；酶解結(jié)束后升溫到80°C，保溫15(5)快速干燥
利用噴霧干燥 快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，得到海洋生物源降壓肽粉成品。
所述的步驟(I)預(yù)處理所使用的堿為碳酸氫鈉或氫氧化鈉，所使用的酸為硫酸或鹽酸。
所述的步驟(2)中所用的蛋白酶為胃蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種。
所述的步驟(2)中調(diào)節(jié)pH用堿為氫氧化鈉；調(diào)節(jié)pH用酸為硫酸或鹽酸。
所述的步驟(3)中所使用的濾袋的孔徑為l_20Mm。
所述的步驟(3)中所使用的陶瓷膜的孔徑為0.05-0.1Mffl，膜壓力為0.3MPa，溫度為 30 — 35°C。
所述的步驟(3)中所使用的納濾膜相對(duì)分子質(zhì)量為300D — 2kD，膜壓力為0.9MPa，溫度為25-30°C。
所述的步驟(4)中所用的蛋白酶為木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、魚鱗魚皮蛋白酶、海產(chǎn)品蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶中的一種或者兩種組合。
所述的步驟(4)中調(diào)節(jié)pH用堿為氫氧化鈉；調(diào)節(jié)pH用酸為硫酸。
所述的步驟(5)中噴霧干燥的出風(fēng)溫度為70_90°C、進(jìn)風(fēng)溫度為140_180°C。
所述的海洋生物副產(chǎn)品為魚鱗和魚皮。
所述的預(yù)處理步驟前，先對(duì)海洋生物副產(chǎn)品進(jìn)行清洗以除掉顆粒雜質(zhì)。
采用上述方案后，本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明直接利用陶瓷膜純化海洋生物源蛋白質(zhì)提取液，達(dá)到去除顆粒雜質(zhì)和大分子雜質(zhì)的效果，改變傳統(tǒng)的離心機(jī)分離協(xié)同膜分離集成的分離純化工藝技術(shù)，簡(jiǎn)化工藝，縮短時(shí)間，節(jié)約成本，分離效率高，利于規(guī)模化放大生產(chǎn)。[0030]2、本發(fā)明利用納濾膜分離純化海洋生物源蛋白質(zhì)，不用真空濃縮器濃縮，達(dá)到去除小分子雜質(zhì)和濃縮樣品的效果，分離效果好，得到蛋白質(zhì)含量超過90%的海洋生物源蛋白質(zhì)，同時(shí)簡(jiǎn)化工藝、減少能耗,節(jié)約成本,利于規(guī)模化工業(yè)化生產(chǎn)。
3、本發(fā)明利用酶工程技術(shù)制備降壓肽，條件溫度，質(zhì)量可控，得到平均相對(duì)分子量小于5KD、蛋白質(zhì)含量超過90%的海洋生物源降壓肽。
總之，本發(fā)明采用上述工藝后，所制得海洋生物源降壓肽成本低、降壓活性高、平均相對(duì)分子量低、純度高，并充分利用了海洋生物副產(chǎn)品，變廢為寶，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。


圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所揭示的是一種海洋生物源降壓肽的制備工藝，如圖1所示，本發(fā)明包括如下步驟:海洋生物副產(chǎn)品——水洗——除掉海洋生物副產(chǎn)品的脂肪和其它雜質(zhì)——酶法提取海洋生物源蛋白質(zhì)——膜分離技術(shù)分離純化海洋生物源蛋白質(zhì)——蛋白酶酶解海洋生物源蛋白質(zhì)決速干燥海洋生物源降壓肽。
以下通過具體實(shí)施例說明。
實(shí)例一:1、以優(yōu)質(zhì)魚鱗作為原料，所選用的魚鱗可以是海洋魚類魚鱗也可以是淡水魚類魚鱗。取魚鱗500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚鱗投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為5%碳酸氫鈉溶液，攪拌11小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為5%鹽酸溶液，攪拌8小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚鱗置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入3kg的胃蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為1.5，酶解溫度50°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為10 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.1 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為30°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為2KD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為0.9MPa，溫度為25°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入2.7kg的魚鱗魚皮蛋白酶和0.3kg的風(fēng)味蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為7，反應(yīng)溫度50°C，反應(yīng)6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為70°C、進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為91%，平均相對(duì)分子量小于4KD，ACE抑制活性為54.9%。
實(shí)例二:[0045]1、以優(yōu)質(zhì)魚鱗作為原料，所選用的魚鱗可以是海洋魚類魚鱗也可以是淡水魚類魚鱗。取魚鱗500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚鱗投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為5%碳酸氫鈉溶液，攪拌11小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為5%硫酸溶液，攪拌8小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚鱗置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入1.5kg的胃蛋白酶，利用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為1，酶解溫度40°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為10 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.05 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為33°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為300D的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為0.9MPa，溫度為25°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入1.5kg的木瓜蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為5.5，反應(yīng)溫度60°C，反應(yīng)5小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為70°C、進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為94%，平均相對(duì)分子量小于2KD，ACE抑制活性為59.9%。
實(shí)例三:
1、以優(yōu)質(zhì)魚鱗作為原料，所選用的魚鱗可以是海洋魚類魚鱗也可以是淡水魚類魚鱗。取魚鱗500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚鱗投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為1%氫氧化鈉溶液，攪拌11小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為I %鹽酸溶液，攪拌9小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚鱗置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入4.5kg的酸性蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為2.5，酶解溫度40°C，酶解3小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為10 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.1 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為33°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為2KD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為25°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入4.5kg的中性蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為7，反應(yīng)溫度50°C，反應(yīng)4小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為70°C、進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為90%，平均相對(duì)分子量小于4KD，ACE抑制活性為74.5%。
實(shí)例四 :
1、以優(yōu)質(zhì)魚鱗作為原料，所選用的魚鱗可以是海洋魚類魚鱗也可以是淡水魚類魚鱗。取魚鱗500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚鱗投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為1%氫氧化鈉溶液，攪拌11小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為I %硫酸溶液，攪拌9小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚鱗置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入3kg的酸性蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為2.5，酶解溫度50°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為10 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.1 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為33°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為2KD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為25°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入2.25kg的中性蛋白酶和2.25kg菠蘿蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值,并控制反應(yīng)體系pH為7，反應(yīng)溫度50°C,反應(yīng)4小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為70°C、進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為90%，平均相對(duì)分子量小于1KD，ACE抑制活性為82.7%。
實(shí)例五:
1、以優(yōu)質(zhì)魚鱗作為原料，所選用的魚鱗可以是海洋魚類魚鱗也可以是淡水魚類魚鱗。取魚鱗500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚鱗投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為3%碳酸氫鈉溶液，攪拌10小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為0.5%硫酸溶液，攪拌10小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚鱗置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入1.5kg的堿性蛋白酶，利用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為9，酶解溫度50°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為I μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.05 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為30°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為IKD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為28°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入3kg的胰蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為8，反應(yīng)溫度40°C，反應(yīng)3小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為80°C、進(jìn)風(fēng)溫度為150°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為92%，平均相對(duì)分子量小于5KD，ACE抑制活性為67.4%。
實(shí)例六:
1、以優(yōu)質(zhì)魚皮作為原料，所選用的魚皮可以是海洋魚類魚皮也可以是淡水魚類魚皮。取魚皮500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚皮投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為5%氫氧化鈉溶液，攪拌12小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為2.5%鹽酸溶液，攪拌9小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚皮置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入4.5kg的胃蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為1.5，酶解溫度35°C，酶解4小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為20 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.1 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為35°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為2KD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為28°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入2.7kg海產(chǎn)品蛋白酶和0.3kg風(fēng)味蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為7，反應(yīng)溫度50°C，反應(yīng)3小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為80°C、進(jìn)風(fēng)溫度為150°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為91%，平均相對(duì)分子量小于5KD，ACE抑制活性為72.6%。
實(shí)例七:
1、以優(yōu)質(zhì)魚皮作為原料，所選用的魚皮可以是海洋魚類魚皮也可以是淡水魚類魚皮。取魚皮500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚皮投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為5%氫氧化鈉溶液，攪拌10小時(shí)，用水洗 凈。加入5000kg體積百分比濃度為2.5%硫酸溶液，攪拌9小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚皮置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入3kg的酸性蛋白酶，利用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)pH值，并控制反應(yīng)體系pH為2.5，酶解溫度50°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為20 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.05 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為35°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為500D的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為28°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入4.5kg菠蘿蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為7，反應(yīng)溫度50°C，反應(yīng)4小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為80°C、進(jìn)風(fēng)溫度為150°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為91%，平均相對(duì)分子量小于2KD，ACE抑制活性為63.1 %。
實(shí)例八:
1、以優(yōu)質(zhì)魚皮作為原料，所選用的魚皮可以是海洋魚類魚皮也可以是淡水魚類魚皮。取魚皮500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚皮投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為4%氫氧化鈉溶液，攪拌11小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為0.5%鹽酸溶液，攪拌10小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚皮置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入3kg的堿性蛋白酶，利用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為9，酶解溫度40°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為10 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.05 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為35°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為IKD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為30°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入0.75kg胰蛋白酶和0.75kg糜蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)pH值,并控制反應(yīng)體系pH為8，反應(yīng)溫度40°C ,反應(yīng)3小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為90°C、進(jìn)風(fēng)溫度為160°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為93%，平均相對(duì)分子量小于5KD，ACE抑制活性為71.4%。
實(shí)例九:
1、以優(yōu)質(zhì)魚皮作為原料，所選用的魚皮可以是海洋魚類魚皮也可以是淡水魚類魚皮。取魚皮500kg投入攪拌清洗機(jī)中，加入5000kg的水，清洗3次，除掉顆粒雜質(zhì)。將水洗后的魚皮投入清洗機(jī)中，加入5000kg質(zhì)量體積濃度為4%氫氧化鈉溶液，攪拌11小時(shí)，用水洗凈。加入5000kg體積百分比濃度為0.5%硫酸溶液，攪拌10小時(shí)，用水洗凈，除掉魚鱗表面的粘性物質(zhì)、脂肪和其它雜質(zhì)。
2、將洗凈的魚皮置于反應(yīng)釜中，加入5000kg的水，加入4.5kg的堿性蛋白酶，利用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為9，酶解溫度50°C，酶解6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后，升溫到80°C，保溫20分鐘滅酶，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
3、提取液經(jīng)過孔徑為10 μ m濾袋預(yù)處理后，進(jìn)入陶瓷膜設(shè)備的儲(chǔ)存罐中，利用孔徑為0.05 μ m陶瓷膜去除去除大分子雜質(zhì)，膜壓力為0.3MPa，溫度為35°C。
4、純化后樣品利用相對(duì)分子質(zhì)量為IKD的納濾膜去除小分子雜質(zhì)，膜壓力為
0.9MPa，溫度為30°C，得到海洋生物源蛋白質(zhì)。
5、將海洋生物源蛋白質(zhì)裝入反應(yīng)釜中，加入1.5kg糜蛋白酶，利用氫氧化鈉和硫酸調(diào)節(jié)PH值，并控制反應(yīng)體系pH為8，反應(yīng)溫度40°C，反應(yīng)3小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液。
6、利用噴霧干燥機(jī)快速干燥海洋生物 源降壓肽溶液，出風(fēng)溫度為90°C、進(jìn)風(fēng)溫度為160°C，噴霧干燥結(jié)束，得到海洋生物源降壓肽粉成品，粉成品的蛋白質(zhì)含量為93%，平均相對(duì)分子量小于5KD，ACE抑制活性為68.8%。
權(quán)利要求
1.一種海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:它包括如下步驟: (1)預(yù)處理 將海洋生物副產(chǎn)品投入清洗機(jī)中，加入海洋生物副產(chǎn)品重量10倍的堿溶液，堿溶液的質(zhì)量體積濃度為1-5%，攪拌10-12小時(shí)，用水洗凈；再加入相當(dāng)于海洋生物副產(chǎn)品重量10倍的酸溶液，酸溶液的體積百分比濃度為0.5-5%，攪拌8-10小時(shí)，水洗凈，除掉海洋生物副產(chǎn)品的脂肪和其它雜質(zhì)；所述的海洋生物副產(chǎn)品為魚鱗和魚皮； (2)海洋生物源蛋白質(zhì)的提取 將經(jīng)過預(yù)處理并洗凈的海洋生物副產(chǎn)品置于反應(yīng)釜中，加入相當(dāng)于海洋生物副產(chǎn)品重量十倍的水和相當(dāng)于海洋生物副產(chǎn)品投料重量0.32.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(I)預(yù)處理所使用的堿為碳酸氫鈉或氫氧化鈉，所使用的酸為硫酸或鹽酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(2)中調(diào)節(jié)pH用堿為氫氧化鈉；調(diào)節(jié)pH用酸為硫酸或鹽酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(3)中所使用的濾袋的孔徑為l_20Mffl。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(3)中所使用的陶瓷膜的孔徑為0.05-0.1Mm，膜壓力為0.3MPa，溫度為30 — 35°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(3)中所使用的納濾膜相對(duì)分子質(zhì)量為300D7.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(4)中調(diào)節(jié)pH用堿為氫氧化鈉；調(diào)節(jié)pH用酸為硫酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:所述的步驟(5)中噴霧干燥的出風(fēng)溫度為70-90°C、進(jìn)風(fēng)溫度為140-180°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的海洋生物源降壓肽的制備工藝，其特征在于:在步驟(I)預(yù)處理步驟前，先 對(duì)海洋生物副產(chǎn)品進(jìn)行清洗以除掉顆粒雜質(zhì)。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種海洋生物源降壓肽的制備工藝，它包括如下步驟(1)預(yù)處理海洋生物副產(chǎn)品，除掉海洋生物副產(chǎn)品的表面雜質(zhì)和脂肪；(2)酶法提取海洋生物源蛋白質(zhì)；(3)膜分離的工藝技術(shù)分離純化提取液，得到海洋生物源蛋白質(zhì)；(4)蛋白酶酶解海洋生物源蛋白質(zhì)，酶解結(jié)束后滅酶，得到海洋生物源降壓肽溶液；(5)噴霧干燥快速干燥海洋生物源降壓肽溶液，得到蛋白質(zhì)含量大于90％的海洋生物源降壓肽粉成品。采用上述工藝后，所制得海洋生物源降壓肽成本低、降壓活性高，平均相對(duì)分子量低、純度高，并充分利用了海洋生物副產(chǎn)品，變廢為寶，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P21/06GKCN102251003 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 201110177150
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2011年6月28日
發(fā)明者陳俊德, 易瑞灶, 劉穎, 陳暉 , 陳思謹(jǐn), 張怡評(píng), 孫繼鵬, 許諾華 申請(qǐng)人:國(guó)家海洋局第三海洋研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2), 非專利引用 (2),