專利名稱:一種超聲波酶解魚鰾制備抗氧化寡肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魚鰾酶解制備抗氧化寡肽的方法，特別涉及一種超聲波酶解魚鰾制備抗氧化寡肽的方法。
背景技術(shù)：
魚鰾，又名魚泡、魚肚、魚白、壓胞，是魚體重要的比重調(diào)節(jié)器官，生活在海水上層和中層的硬骨魚類，大多數(shù)都有鰾，魚鰾的體積約占身體的5%左右，其形狀有卵圓形、圓錐形、心臟形、馬蹄形等等。魚鰾的主要營養(yǎng)成分為高級膠原蛋白、粘多糖、多種維生素及鈣、 鋅、鐵、硒等多種微量元素，其中蛋白質(zhì)含量一般在80%以上，而脂肪含量較低，是理想的高蛋白低脂肪食品。魚鰾中含有多種無機(jī)元素，尤其微量元素Zn、Cu、Fe、Se含量極為豐富， 這些微量元素對保持健康起著重要作用。
魚鰾中的營養(yǎng)成分含量因種類不同而變化，以不同魚鰾的脂肪含量變化最大，蛋白質(zhì)含量的變化最小。氨基酸的分析結(jié)果顯示，甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸和天冬氨酸等6種氨基酸構(gòu)成了魚鰾蛋白質(zhì)的優(yōu)勢氨基酸。除了甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和天冬氨酸4種氨基酸在不同魚鰾中的含量差異最大外，大多數(shù)氨基酸的含量變化不大?，F(xiàn)代中醫(yī)藥學(xué)認(rèn)為，魚鰾味甘性平，有滋陰養(yǎng)血、止血、補(bǔ)腎固精的功能。《本草求原》載魚鰾可“養(yǎng)精脈，定手戰(zhàn)，固精?！濒~鰾還有良好的保健作用，可促進(jìn)精囊分泌果糖，為精子提供能量；能促進(jìn)胃腸的消化吸收，提高食欲，防治厭食、消化不良、腹脹、便秘；能增加肌肉組織的韌性和彈力，增強(qiáng)體力，消除疲勞；能滋潤皮膚，使皮膚細(xì)膩光滑；能增強(qiáng)腦力和神經(jīng)系統(tǒng)功能，促進(jìn)生長發(fā)育，提高思維和智力，維持腺體正常分泌，并可防止智力減遲，神經(jīng)傳導(dǎo)遲緩，反應(yīng)遲鈍，產(chǎn)后乳汁分泌不足，老年性癡呆，健忘、失眠等，能提高機(jī)體抵抗力和免疫力，抗疲勞，抑制腫瘤生長。
魚鰾現(xiàn)在的加工應(yīng)用主要有魚鰾干制品的加工，其方法是從魚腹內(nèi)摘下魚鰾，清洗干凈，然后用明礬溶液浸漬后剝膜，石灰水浸泡去脂，清洗，浙水后干燥。這種加工方法生產(chǎn)的魚鰾附加值低，并且有明顯的地域化特點(diǎn)，主要集中在沿海地區(qū)，而內(nèi)地少有食用，這制約了魚鰾的銷售。
申請?zhí)?200810091845. 0，申請日 2008. 3. 30，公開號 CN101545001A，
公開日2009. 9. 30，申請人為段振華申請了一項(xiàng)專利，介紹了一種魚鰾寡肽溶液的制備方法1.將尖魚肚干品進(jìn)行清洗破碎處理；2.用尖魚肚5倍重的飲用水浸泡5-50min后，超聲波處理 IO-SOmin ；3.按固液比1 10_1 60補(bǔ)入飲用水，用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行搗碎和打漿處理5min ;4.將制備的漿液進(jìn)行恒溫酶解，酶量比為1 1_1 7，在溫度40_60°C、pH值 5. 0-8. 0、酶量為0. 1-0. 9%條件下，酶解3-9h，酶解完畢在80-100°C滅酶處理8-15min ； 5.高速離心酶解液，取上清液過濾后裝瓶、封口，高速離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為4000-20，OOOrpm，離心時(shí)間為5-15min ；6.用高壓蒸汽滅菌器對瓶裝溶液進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度100_135°C， 滅菌時(shí)間20-50min，冷卻后即制備成魚鰾寡肽溶液。此方法制備出的是只用于補(bǔ)充氨基酸的普通寡肽。而目前使用魚鰾酶解制備抗氧化肽的技術(shù)還沒有見報(bào)道，本專利主要通過控制魚鰾的酶解條件生產(chǎn)出具有抗氧化性的寡肽。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種超聲波酶解魚鰾制備抗氧化寡肽的方法，制備的是抗氧化寡肽， 不僅能夠用于補(bǔ)充氨基酸，而且還能清除自由基。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為，一種超聲波酶解魚鰾制備抗氧化寡肽的方法，包括以下操作步驟
步驟1，
將魚鰾粉碎為魚鰾粉末；
步驟2，
向魚鰾粉末中加入pH值為6.0的磷酸鹽緩沖液和胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液；其中，魚鰾粉末質(zhì)量為磷酸鹽緩沖液質(zhì)量的6%，胰蛋白酶質(zhì)量為魚鰾粉末質(zhì)量的 1. 6 2. 0% ；
步驟3，
先將魚鰾溶液在50°C恒溫水浴中酶解5 lOmin，再將魚鰾溶液超聲處理進(jìn)行酶解，控制超聲功率110 220W，超聲時(shí)間1 9min，超聲溫度30 65°C，超聲處理后繼續(xù)在 50°C的恒溫水浴中酶解30 90min ；酶解結(jié)束后，滅酶、冷卻、過濾得到上清液；
步驟4，
將上清液用IOOOODa超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)冷凍干燥，得到魚鰾抗氧化寡肽。
其中，磷酸鹽緩沖液由摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸二氫鈉水溶液和摩爾濃度為 0. 2mol/L的磷酸氫二鈉水溶液混合而成，磷酸二氫鈉水溶液與磷酸氫二鈉水溶液的體積比為 87.7 12. 3。
本發(fā)明的有益效果是，應(yīng)用超聲波酶解魚鰾蛋白質(zhì)，提高了酶解效率，提高了酶解過程中肽的釋放量，縮短了酶解過程中所需要的時(shí)間，操作簡單，生產(chǎn)周期短，并且本發(fā)明制備的抗氧化寡肽對人體的自由基有很好的清除作用，能起到防止衰老，炎癥，以及動脈硬化而引發(fā)的心腦血管疾病，也可以作為一種營養(yǎng)添加劑應(yīng)用于食品中。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
將魚鰾剪成小塊，放入粉碎機(jī)粉碎成60目的魚鰾粉末；稱取24g魚鰾粉末，向魚鰾粉末中加入400ml G00g)pH值為6. O的磷酸鹽緩沖液(其中，磷酸鹽緩沖液由350. 8ml摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸二氫鈉水溶液和49. 2ml摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸氫二鈉水溶液混合而成)和0. 384g胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液；將魚鰾溶液在50°C恒溫水浴中酶解5min，再將魚鰾溶液超聲處理進(jìn)行酶解，控制超聲功率220W，超聲時(shí)間5min，超聲溫度40°C，超聲處理后繼續(xù)在50°C的恒溫水浴中酶解45min ；酶解結(jié)束后，將水浴溫度升高到100°C進(jìn)行滅酶，滅酶后冷卻至室溫，過濾得到上清液，用微量凱式定氮法測得上清液的蛋白質(zhì)含量為6. 02mg/ml ；最后將上清液用IOOOODa超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)在_20°C， 0. 43bar條件下冷凍干燥得到魚鰾抗氧化寡肽。
4[0020] 上述胰蛋白酶由無錫杰能科生物有限公司生產(chǎn)。
測得產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力為74. 11 %，清除羥自由基的能力是76. 58%，清除ABTS溶液的能力為77. 54%。
實(shí)施例2
將魚鰾剪成小塊，放入粉碎機(jī)粉碎成60目的魚鰾粉末；稱取24g魚鰾粉末，向魚鰾粉末中加入400ml (400g)的pH值為6. 0的磷酸鹽緩沖液(其中，磷酸鹽緩沖液由350. 8ml 摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸二氫鈉水溶液和49. 2ml摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸氫二鈉水溶液混合而成)和0. 384g胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液；將魚鰾溶液在50°C恒溫水浴中酶解lOmin，再將魚鰾溶液超聲處理進(jìn)行酶解，控制超聲功率220W，超聲時(shí)間9min， 超聲溫度30°C，超聲處理后繼續(xù)在50°C的恒溫水浴中酶解45min ；酶解結(jié)束后，將水浴溫度升高到100°C進(jìn)行滅酶，滅酶后冷卻至室溫，過濾得到上清液，用微量凱式定氮法測得上清液的蛋白質(zhì)含量為6. 13mg/ml ；最后將上清液用IOOOODa超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)在-20°C，0. 43bar條件下冷凍干燥得到魚鰾抗氧化寡肽。
上述胰蛋白酶由無錫杰能科生物有限公司生產(chǎn)。
測得產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力為71.13%，清除羥自由基的能力是72. 36%，清除ABTS溶液的能力為72. 61%。
實(shí)施例3
將魚鰾剪成小塊，放入粉碎機(jī)粉碎成60目的魚鰾粉末；稱取24g魚鰾粉末，向魚鰾粉末中加入400ml (400g)的pH值為6. O的磷酸鹽緩沖液(其中，磷酸鹽緩沖液由350. 8ml 摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸二氫鈉水溶液和49. 2ml摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸氫二鈉水溶液混合而成)和0. 48g胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液；將魚鰾溶液在50°C恒溫水浴中酶解lOmin，再將魚鰾溶液超聲處理進(jìn)行酶解，控制超聲功率220W，超聲時(shí)間7min， 超聲溫度45°C，超聲處理后繼續(xù)在50°C的恒溫水浴中酶解30min ；酶解結(jié)束后，將水浴溫度升高到100°C進(jìn)行滅酶，滅酶后冷卻至室溫，過濾得到上清液，用微量凱式定氮法測得上清液的蛋白質(zhì)含量為6. Omg/ml ；最后將上清液用IOOOODa超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)在-20°C，0. 43bar條件下冷凍干燥得到魚鰾抗氧化寡肽。
上述胰蛋白酶由無錫杰能科生物有限公司生產(chǎn)。
測得產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力為68. 36%，清除羥自由基的能力是67. 92%，清除ABTS溶液的能力為69. 01%。
實(shí)施例4
將魚鰾剪成小塊，放入粉碎機(jī)粉碎成60目的魚鰾粉末；稱取24g魚鰾粉末，向魚鰾粉末中加入400ml (400g)的pH值為6. O的磷酸鹽緩沖液(其中，磷酸鹽緩沖液由350. 8ml 摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸二氫鈉水溶液和49. 2ml摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸氫二鈉水溶液混合而成)和0. 384g胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液；將魚鰾溶液在50°C恒溫水浴中酶解8min，再將魚鰾溶液超聲處理進(jìn)行酶解，控制超聲功率110W，超聲時(shí)間lmin， 超聲溫度65°C，超聲處理后繼續(xù)在50°C的恒溫水浴中酶解90min ；酶解結(jié)束后，將水浴溫度升高到100°C進(jìn)行滅酶，滅酶后冷卻至室溫，過濾得到上清液，用微量凱式定氮法測得上清液的蛋白質(zhì)含量為5. 96mg/ml ；最后將上清液用IOOOODa超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)在-20°C，0. 43bar條件下冷凍干燥得到魚鰾抗氧化寡肽。[0032]上述胰蛋白酶由無錫杰能科生物有限公司生產(chǎn)。
測得產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力為64. 23%，清除羥自由基的能力是64. 52%，清除ABTS溶液的能力為65. 03%。
本發(fā)明將超聲波應(yīng)用于酶解，充分利用了超聲波的空化作用使溶液中的微粒劇烈振動，產(chǎn)生猛烈的碰撞使溶液溫度升高，起到了很好的攪拌作用，加速了化學(xué)反應(yīng)，提高了酶解效率，提高酶解過程中肽的釋放量，縮短了酶解過程所需要的時(shí)間。
權(quán)利要求
1.一種超聲波酶解魚鰾制備抗氧化寡肽的方法，其特征在于，包括以下操作步驟步驟1，將魚鰾粉碎為魚鰾粉末；步驟2，向魚鰾粉末中加入PH值為6.0的磷酸鹽緩沖液和胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液； 其中，魚鰾粉末質(zhì)量為磷酸鹽緩沖液質(zhì)量的6%，胰蛋白酶質(zhì)量為魚鰾粉末質(zhì)量的1.6 2. 0% ；步驟3，先將魚鰾溶液在50°C恒溫水浴中酶解5 lOmin，再將魚鰾溶液超聲處理進(jìn)行酶解，控制超聲功率110 220W，超聲時(shí)間1 9min，超聲溫度30 65°C，超聲處理后繼續(xù)在50°C 的恒溫水浴中酶解30 90min ；酶解結(jié)束后，滅酶、冷卻、過濾得到上清液；步驟4，將上清液用IOOOODa超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)冷凍干燥，得到魚鰾抗氧化寡肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述制備抗氧化寡肽的方法，其特征在于所述磷酸鹽緩沖液由摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸二氫鈉水溶液和摩爾濃度為0. 2mol/L的磷酸氫二鈉水溶液混合而成，磷酸二氫鈉水溶液與磷酸氫二鈉水溶液的體積比為87. 7 12.3。
專利摘要
本發(fā)明提供一種超聲波輔助酶解魚鰾制備抗氧化寡肽的方法，先將魚鰾粉碎為魚鰾粉末；再向魚鰾粉末中加入pH值為6.0的磷酸鹽緩沖液和胰蛋白酶，攪拌均勻，得到魚鰾溶液；然后將魚鰾溶液在水浴中酶解，再將魚鰾溶液進(jìn)行超聲處理進(jìn)行酶解，超聲處理后繼續(xù)在恒溫水浴中酶解；酶解結(jié)束后，滅酶、冷卻、過濾得到上清液；將上清液用10000Da超濾膜超濾，超濾后的溶液經(jīng)冷凍干燥，得到魚鰾抗氧化寡肽。本發(fā)明制備的抗氧化寡肽對人體的自由基有很好的清除作用，能起到防止衰老，炎癥，以及動脈硬化而引發(fā)的心腦血管疾病，也可以作為一種營養(yǎng)添加劑應(yīng)用于食品中。
文檔編號C12P21/06GKCN102363800SQ201110363710
公開日2012年2月29日 申請日期2011年11月16日
發(fā)明者常虹, 成長玉, 段振華 申請人:海南大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan