專利名稱:發(fā)酵罐的制作方法
本發(fā)明涉及一種容納被攪動(dòng)的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物的連續(xù)發(fā)酵罐容器。
細(xì)胞體外發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)品的商業(yè)化的最新進(jìn)展使得對(duì)發(fā)酵罐的設(shè)計(jì)和發(fā)酵方法的改進(jìn)有愈來(lái)愈大的興趣。
發(fā)酵通常以分批或連續(xù)的方式進(jìn)行，連續(xù)生產(chǎn)是有利的，因?yàn)樗岣吡私o定發(fā)酵罐的生產(chǎn)率，並減少了在分批發(fā)酵罐中通常必要的清潔和消毒所必須的非生產(chǎn)停工時(shí)間。
在一些已知的連續(xù)發(fā)酵罐容器中，要攪動(dòng)在適當(dāng)培養(yǎng)介質(zhì)中的細(xì)胞懸浮液，并將它維持在適于發(fā)酵的溫度上。連續(xù)地從發(fā)酵罐中抽取懸浮培養(yǎng)物，並通過(guò)不斷地輸送新的培養(yǎng)介質(zhì)來(lái)平衡。這樣一些發(fā)酵罐的一個(gè)重要缺點(diǎn)是由于培養(yǎng)物的排放，會(huì)引起細(xì)胞不斷的損失。在一種已知的發(fā)酵罐中，排放懸浮培養(yǎng)物要通過(guò)一個(gè)從培養(yǎng)物上清液中分離出細(xì)胞的連續(xù)離心分離裝置，然后將細(xì)胞送回到懸浮培養(yǎng)物中。
在另一種已知的發(fā)酵罐中，有一個(gè)由過(guò)濾材料制成的旋轉(zhuǎn)筐子，它部分地浸在培養(yǎng)物中，使得筐子的內(nèi)部通過(guò)該過(guò)濾器與懸浮的培養(yǎng)物分隔開(kāi)。培養(yǎng)物的上清液通過(guò)該過(guò)濾器可以被連續(xù)地抽取，而把細(xì)胞保持在懸浮培養(yǎng)物中?？鹱釉趹腋∨囵B(yǎng)物中的旋轉(zhuǎn)減少了過(guò)濾材料的堵塞。
這些已知的使得細(xì)胞連續(xù)送回到懸浮培養(yǎng)物中的裝置在機(jī)械上很復(fù)雜，它們的運(yùn)行需要能量，並可能對(duì)懸浮培養(yǎng)物造成諸如細(xì)胞破裂這樣的不利影響。這些特點(diǎn)結(jié)合在一起，就降低了基于這些發(fā)酵罐的發(fā)酵方法經(jīng)濟(jì)上的可行性。
本發(fā)明的目的是要提供一個(gè)基本上克服了這些缺點(diǎn)的連續(xù)發(fā)酵罐容器。按照本發(fā)明，提供了一種容納細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物的連續(xù)發(fā)酵容器。這種容器具有用于攪動(dòng)裝在該容器第一部分的懸浮培養(yǎng)的裝置;在使用時(shí)形成靜止沉降區(qū)的該容器的第二部分，至少它底部的一部分與第一部分相連通;將培養(yǎng)介質(zhì)連續(xù)地輸送到該容器中去的一個(gè)入口裝置;以及從第二部分底部上面隔開(kāi)一定距離的地方將培養(yǎng)物上清液從容器的第二部分連續(xù)地抽取出來(lái)的一個(gè)出口。使用時(shí)，沉降在第二部分中的細(xì)胞被送回到被攪動(dòng)的懸浮培養(yǎng)物中，而具有較低細(xì)胞濃度的培養(yǎng)物上清液從第二部分中被抽出。
在本發(fā)明的發(fā)酵罐中，細(xì)胞的分離和細(xì)胞的回饋步驟是通過(guò)一個(gè)靜止沉降區(qū)構(gòu)造來(lái)完成的，進(jìn)入到靜止沉降區(qū)的懸浮培養(yǎng)物(補(bǔ)充從靜止沉降區(qū)取走的培養(yǎng)物上清液)從被攪拌的懸浮培養(yǎng)物進(jìn)入到低擾動(dòng)的區(qū)域。在這一區(qū)域里，細(xì)胞在重力影響下開(kāi)始向下沉降，並在靜止沉降區(qū)的底部回到攪動(dòng)的懸浮培養(yǎng)物中。這種沉降在靜止沉降區(qū)中引起一個(gè)細(xì)胞濃度的梯度，允許從靜止的沉降區(qū)底部上方一定距離的地方將培養(yǎng)物上清液取出，該地方的培養(yǎng)物上清液具有比攪動(dòng)的懸浮培養(yǎng)物低得多的細(xì)胞濃度。本發(fā)明發(fā)酵罐的細(xì)胞分離和回饋的部件沒(méi)有運(yùn)動(dòng)的部分，也不需要外加的能量。
靜止沉降區(qū)可以位于發(fā)酵罐中的任何地方或者可以構(gòu)成使用時(shí)盛有被攪動(dòng)懸浮培養(yǎng)物的容器部分的一個(gè)附件。但是，為了使靜止沉降區(qū)中的運(yùn)動(dòng)減至最小，最好靜止沉降區(qū)整個(gè)處于使用時(shí)裝有被攪動(dòng)懸浮培養(yǎng)物的發(fā)酵罐部分內(nèi)，這就大大地降低了在靜止沉降區(qū)中可能使不良對(duì)流增加的溫度梯度。
攪動(dòng)該懸浮培養(yǎng)物的裝置可以是保證細(xì)胞混合的任何一種適當(dāng)?shù)难b置。例如，這種合適的裝置是例如機(jī)械攪拌器。但是，在本發(fā)明的一個(gè)最佳形式中，是通過(guò)一個(gè)氣體入口注入氣體，最好是空氣來(lái)產(chǎn)生攪動(dòng)。發(fā)酵罐例如可以是一個(gè)“空氣提升”式發(fā)酵罐，在這種發(fā)酵罐里，像空氣這樣的氣體被注入到發(fā)酵罐一個(gè)向上延伸的、在已有技術(shù)中被稱為提升通道的部分，該提升通道在其頂部和底部分別與發(fā)酵罐另一個(gè)在已有技術(shù)中被稱為下降通道的朝上延伸部分的頂部和底部相連通?？諝馓嵘桨l(fā)酵罐一個(gè)已知的結(jié)構(gòu)包括有一個(gè)在發(fā)酵罐容器中將容器分隔成兩部分(提升通道和下降通道)的中間隔離器?？諝馓嵘桨l(fā)酵罐的另一個(gè)可供選擇的結(jié)構(gòu)包括有一個(gè)基本上與發(fā)酵罐容器同心的通風(fēng)管，將發(fā)酵罐分成提升通道(在通風(fēng)管內(nèi))和下降通道(通風(fēng)管與發(fā)酵罐側(cè)面之間的環(huán)形空間)。(提升通道同樣也可以是通風(fēng)管和發(fā)酵罐容器內(nèi)側(cè)之間的環(huán)形空間，而下降通道可以是在通風(fēng)管內(nèi))。將空氣這樣的氣體注入到提升通道的下部，引起提升通道中堆密度的下降，使提升通道中的液體向上流動(dòng)，于是取代了下降通道循環(huán)回到提升通道底部的內(nèi)容。以這樣一種方式，使流體流動(dòng)，混合培養(yǎng)物、並使細(xì)胞保持在懸浮液中。這樣一種發(fā)酵罐的優(yōu)點(diǎn)是不需要運(yùn)動(dòng)的部件，並產(chǎn)生培養(yǎng)物的氧合作用。在典型的情況下，提升通道的橫截面與下降通道的橫截面大體是一樣的。
在本發(fā)明一個(gè)最佳的實(shí)施例中，連續(xù)發(fā)酵罐容器是一個(gè)空氣提升式發(fā)酵罐，靜止沉降區(qū)由一個(gè)在下降通道和提升通道之間的隔離器所形成一個(gè)管道組成，這樣，通過(guò)由具有均勻溫度、混合很好的懸浮培養(yǎng)物包圍住這種靜止沉降而防止了不良對(duì)流。使用時(shí)，發(fā)酵罐中工作液體的液位最好使該沉降區(qū)的頂部被0.25到0.1倍發(fā)酵罐直徑深的工作液體復(fù)蓋住。
隔離器例如可以是一個(gè)大體上同心地放在基本上是園柱形發(fā)酵罐容器中的基本上是園柱形的通風(fēng)管，靜止沉降區(qū)可以包括一個(gè)至少在通風(fēng)管一部分內(nèi)外壁之間形成的環(huán)形空間。靜止沉降區(qū)在頂部最好是封閉的，並在底部與下降通道相通。在小容量、例如小于10升的空氣提升式發(fā)酵罐中，通風(fēng)管在沿其長(zhǎng)度方向上可以是雙壁的，形成一個(gè)頂部封閉、底部與懸浮培養(yǎng)物相通的環(huán)形沉降區(qū)，或者、特別是對(duì)更大的發(fā)酵罐，靜止沉降區(qū)可以由一個(gè)僅僅在通風(fēng)管上部?jī)?nèi)外壁之間的環(huán)形空間組成，在大發(fā)酵罐中，靜止沉降區(qū)必須有足夠大的橫截面積、使得向上流動(dòng)的流體速度小于細(xì)胞的沉降速度以達(dá)到良好的細(xì)胞分離作用。為了既能容納靜止沉降區(qū)所需要的橫截面積、仍能提供圍繞該容器循環(huán)的足夠橫截面積，發(fā)酵罐的上段可以上具有比下段更大的直徑，提升通道和下降通道在上段的橫截面積基本上是一樣的，並可以分別是發(fā)酵罐底段的提升通道和下降通道橫截面積的0.5至1.0倍之間。為了達(dá)到這一點(diǎn)，在上段中同心通風(fēng)管的內(nèi)徑相對(duì)于通風(fēng)管下部可以減小，發(fā)酵罐上下段可以用一個(gè)對(duì)發(fā)酵主軸具有0°到60°角的錐臺(tái)段連接起來(lái)。
隔離器可以采取通風(fēng)板的形式，由安裝在容器中的基本上垂直的板組成。靜止沉降區(qū)是由在該板上部或沿其長(zhǎng)度方向上形成的一個(gè)管道組成。
連續(xù)發(fā)酵罐可以用已知的連續(xù)輸送培養(yǎng)介質(zhì)和連續(xù)抽取培養(yǎng)物上清液的方式工作。連續(xù)發(fā)酵罐可以在0.02小時(shí)-1到0.08小時(shí)-1，最好是0.042小時(shí)-1左右的稀釋率(即流率與發(fā)酵罐容積的比值)下運(yùn)行。
這種發(fā)酵罐可以用于任何能在體外、在懸浮體培養(yǎng)物(包括微載體培養(yǎng)物)中生長(zhǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)，但是對(duì)于例如象雜交細(xì)胞體系這樣的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物特別有用。
已經(jīng)確定，動(dòng)物細(xì)胞在重力下將以0.9×10-5毫秒-1到4.0×10-5毫秒-1、通常是1.8×10-5毫秒-1左右的速率沉降。因此，為了在高的連續(xù)生產(chǎn)量和小尺寸的靜止沉降區(qū)取得合理的平衡，每立方米的發(fā)酵罐容積最好有0.1到1.5米2的靜止沉降區(qū)的橫截面積。通常，每立方米發(fā)酵罐容積采用0.65米2的橫截面積。
培養(yǎng)物中的動(dòng)物細(xì)胞會(huì)顯示出各種不同的粒子大小，代表了完全生長(zhǎng)的細(xì)胞、完全死掉的細(xì)胞和細(xì)胞碎片之間的差別，因而會(huì)以各種速率進(jìn)行沉降。為了提高在沉降區(qū)內(nèi)總的沉降速度，可以絮凝狀態(tài)來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，例如在培養(yǎng)介質(zhì)中增加0.01到0.3%(W/V)之間的聚半乳糖醛酸來(lái)獲得絮凝狀態(tài)。這種處理引起細(xì)胞和細(xì)胞碎片聚集成具有比單個(gè)細(xì)胞粒子更大的總顆粒尺寸的絮片，結(jié)果使沉降速度加快。這種現(xiàn)象能使沉降區(qū)的橫截面積降低，因而能使發(fā)酵罐上段的直徑也降低。
本發(fā)明將通過(guò)以下參照示意附圖的說(shuō)明來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明，在附圖中圖1是包括了一個(gè)中間隔離板的本發(fā)明空氣提升式發(fā)酵罐的軸向剖面圖。
圖2是包括了一個(gè)與發(fā)酵罐容器同心的通風(fēng)管的本發(fā)明空氣提升式發(fā)酵罐的軸向剖面圖。
圖3是包括了一個(gè)雙壁同心通風(fēng)管的本發(fā)明空氣提升式發(fā)酵罐的軸向剖面圖。
圖1顯示了一個(gè)裝配有將培養(yǎng)物上清液從懸浮培養(yǎng)物中分離出來(lái)的靜止沉降區(qū)的空氣提升式發(fā)酵罐。該空氣提升式發(fā)酵罐包括一個(gè)通常用標(biāo)號(hào)1表示的外容器，該外容器包括一個(gè)下園柱部分3和一個(gè)上園柱部分5，上園柱部分具有一個(gè)更大的直徑，並通過(guò)一個(gè)錐臺(tái)段7與下園柱部分3相連接，下園柱部分3有一個(gè)完成外容器1的底部15。在圖上一般用標(biāo)號(hào)9表示的一個(gè)隔離板是安裝在外容器1內(nèi)，將容器內(nèi)部分成一個(gè)提升通道，在圖上一般是用11表示的;和另一個(gè)下降通道，在圖上一般是用13表示。底板15在一個(gè)空氣入口17，它直接在提升通道11的下面，并大致在提升通道的中心。圖上用9表示的隔離板在外容器的上園柱段5和錐臺(tái)段7的范圍中形成一個(gè)靜止沉降區(qū)19。該靜止沉降區(qū)的軸向截面是矩形的;並且與提升通道和下降通道是密封的，除了在靜止沉降區(qū)19的底部有一個(gè)與下降通道相通的口子21。靜止沉降區(qū)19的頂部有一個(gè)用于抽取培養(yǎng)物上清液的出口23，發(fā)酵罐有一個(gè)輸送培養(yǎng)介質(zhì)的入口25，在外容器1的里面或周圍可以配備恒溫控制的加熱裝置，外容器可以是雙壁的以提供一個(gè)例如可以注入水的夾套。
使用時(shí)、細(xì)胞，最好是動(dòng)物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)物通過(guò)入口25加入到發(fā)酵罐里，使得用9a表示的隔離板9的頂部被深度相當(dāng)于外容器1下園柱段3直徑0.25到1.0倍的懸浮培養(yǎng)物蓋住。懸浮培養(yǎng)物由通過(guò)空氣進(jìn)口17進(jìn)入的加壓空氣維持湍流狀態(tài)?？諝庠谔嵘ǖ?1里上升，降低了在提升通道11中流體懸浮液的堆密度，引起流體沿圖1箭頭指示的方向作整體運(yùn)動(dòng)，空氣在提升通道11頂部的懸浮培養(yǎng)物中釋放。
通過(guò)入口25連續(xù)地輸送培養(yǎng)介質(zhì)，培養(yǎng)介質(zhì)包括營(yíng)養(yǎng)物以及有效培養(yǎng)細(xì)胞所必須的其它要素，此外還可以包括0.01到0.03%(W/V)的聚半乳糖醛酸，使用聚半乳糖醛酸促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞碎片的絮凝，它有助于將動(dòng)物細(xì)胞和碎片從產(chǎn)品流中有效地分離。培養(yǎng)物上清液通過(guò)出口23以基本上與通過(guò)入口25輸入培養(yǎng)介質(zhì)一樣的速率連續(xù)地被抽取，在從靜止沉降區(qū)19中取出培養(yǎng)物上清液時(shí)，懸浮培養(yǎng)物通過(guò)口子21從下降通道13的湍流環(huán)境中補(bǔ)充進(jìn)來(lái)。靜止沉降區(qū)19是一個(gè)無(wú)湍流的區(qū)域，在那里，具有比培養(yǎng)物上清液更大密度的細(xì)胞和細(xì)胞碎片在重力下向下沉降，取出培養(yǎng)物上清液的速率要使得在靜止沉降區(qū)19中的細(xì)胞向下運(yùn)動(dòng)，並最終通過(guò)口21回到下降通道13中。
在穩(wěn)定狀態(tài)的情況下，在靜止沉降區(qū)19中建立起一個(gè)細(xì)胞濃度的梯度，使能從出口23取出培養(yǎng)物上清液而從懸浮培養(yǎng)物中很少或不取走大量培養(yǎng)物。錐臺(tái)7對(duì)外發(fā)酵罐容器1軸的夾角在0°至60°之間，取決于具體工作條件所需要的靜止沉降區(qū)19的大小。在某些場(chǎng)合下，例如在低容積發(fā)酵罐中，外發(fā)酵罐容器1可以是單獨(dú)一個(gè)園柱形容器，而靜止沉降區(qū)是由一個(gè)雙層壁的隔離板形成的區(qū)域，在圖1所示的具體方案中，靜止沉降區(qū)19是由一個(gè)起減小該區(qū)擾動(dòng)的緩沖板27形成的，該緩沖板與發(fā)酵罐軸的夾角是在0°到60°之間，一般與相應(yīng)的錐臺(tái)段7相平行。該緩沖板可隨需要選擇，如果有的話，它可以從錐臺(tái)段7的一半延伸到全部的垂直距離之間。靜止沉降區(qū)19具有一個(gè)取決于發(fā)酵罐中培養(yǎng)的細(xì)胞的橫截面積。當(dāng)用哺乳動(dòng)物的細(xì)胞時(shí)，沉降區(qū)適合于每立方米發(fā)酵罐容積具有0.1到2.5米2之間的橫截面積，靜止沉降區(qū)19最好是每立方米發(fā)酵罐容積具有0.65米2的橫截面積。
參照?qǐng)D2，它畫(huà)了本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，從圖上可清楚地知道，圖2所示的空氣提升式發(fā)酵罐具有一些與圖1空氣提升式發(fā)酵罐共同的特征，這些特征這里不再描述了，不同之處在于利用了一個(gè)在發(fā)酵罐外容器中同心安置的一個(gè)通風(fēng)管29，通風(fēng)管29里面起提升通道的作用，而通風(fēng)管29外側(cè)面與發(fā)酵罐容器內(nèi)側(cè)之間的環(huán)形空間起下降通道的作用。在這個(gè)方案中，通風(fēng)管29包括有一個(gè)下園柱段31和一個(gè)上園柱段33，二個(gè)園柱段由一個(gè)錐臺(tái)段35連接。提升通道向上直徑減小，使在發(fā)酵罐的上端有一個(gè)更大的橫截面面積用作靜止沉降區(qū)。靜止沉降區(qū)37是由在通風(fēng)管29上端部和一個(gè)與之成整體的套筒38之間形成一個(gè)環(huán)形空間組成。一般，圖2所示空氣提升式發(fā)酵罐的運(yùn)行以及它的各個(gè)部件與對(duì)圖1所作的描述是一樣的，象在圖1的方案中一樣，靜止沉降區(qū)37的底部有一緩沖板39，用于防止渦流，在圖2的實(shí)施方案中，緩沖板39是錐臺(tái)形的，在圖1例子中提到的最佳尺寸也適于圖2空氣提升式發(fā)酵罐的部件。
參照附圖3，它是一個(gè)空氣提升式發(fā)酵罐，具有特別適合于低容積使用的結(jié)構(gòu)形狀。圖3所示的空氣提升式發(fā)酵罐包括有一個(gè)園柱形的外容器41和一個(gè)同心安置在該外容器41中的通風(fēng)管43，通風(fēng)管43有雙層壁，在雙層壁之間形成的環(huán)形空間構(gòu)成一個(gè)環(huán)形靜止沉降區(qū)45。圖3發(fā)酵罐的運(yùn)行和一般尺寸與上面對(duì)圖1所描述的一樣。
以下的例子說(shuō)明了用本發(fā)明的發(fā)酵罐來(lái)連續(xù)生產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)物。
例1改進(jìn)現(xiàn)有的一個(gè)5.5升(總?cè)莘e)的空氣提升式發(fā)酵罐，使它能以連續(xù)的方式、在回饋生物體的情況下用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞懸浮液。
發(fā)酵罐是通過(guò)建造一個(gè)雙壁型通風(fēng)管來(lái)改進(jìn)的，通風(fēng)管的壁如圖3所示是平行的，發(fā)酵罐裝有兩條收獲輸送管路，第一條收獲輸送管路從培養(yǎng)物的主要容積處引出到發(fā)酵罐外，使得在沒(méi)有回饋生物體的情況下連續(xù)地收取培養(yǎng)物，第二條收獲輸送管路從通風(fēng)管的頂部到發(fā)酵罐的外面(圖3)，使得在回饋生物體到培養(yǎng)物主要容積中去的情況下連續(xù)地收采培養(yǎng)物。
在上述發(fā)酵罐中培養(yǎng)分泌IgM抗體的NB1復(fù)化細(xì)胞。培養(yǎng)介質(zhì)是補(bǔ)充牛胎血清的Dulbecco修正的Eagle介質(zhì)，監(jiān)測(cè)和自動(dòng)控制溶介的氧氣壓力，PH值和溫度。用一個(gè)改進(jìn)的Fuch的Rosenthal計(jì)數(shù)室進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，而細(xì)胞的存活性可由對(duì)錐蟲(chóng)蘭染色的排斥來(lái)估計(jì)。抗體用IgM特異酶結(jié)合的免疫吸附劑檢驗(yàn)法檢驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)條件和結(jié)果總結(jié)在表1上，在沒(méi)有生物體回饋下活細(xì)胞的群體密度是1.3×106細(xì)胞數(shù)/毫升，而抗體濃度是30.4毫克/升，在有生物體回饋的情況下，89%的活細(xì)胞從流出物中被除去，結(jié)果使培養(yǎng)物中的活生物體增加4倍、達(dá)到5.3×106細(xì)胞數(shù)/毫升。抗體的總輸出量在沒(méi)有生物體回饋時(shí)是63毫克/天、在有生物體回饋時(shí)是323毫克/天。
例2在第二個(gè)例子中，一個(gè)30升(總?cè)莘e)的空氣提升式發(fā)酵罐被改進(jìn)成在有生物體回饋下以連續(xù)方式使用。除了對(duì)兩個(gè)不同構(gòu)形的通風(fēng)管進(jìn)行試驗(yàn)外，改進(jìn)與例1對(duì)5升發(fā)酵罐所描述的相同。通風(fēng)管的第一種構(gòu)形如圖3所示、是一個(gè)具有平行壁的通風(fēng)管，在第二種構(gòu)形里，為了減少在通風(fēng)管兩個(gè)壁之間的液柱中的擾動(dòng)，通風(fēng)管朝它的下方略微收縮。
細(xì)胞系，介質(zhì)和實(shí)驗(yàn)步驟與例1所述相同，結(jié)果總結(jié)在表2中。在沒(méi)有生物體回饋的情況下，得到1.6×106細(xì)胞數(shù)/毫升的活細(xì)胞群體密度，在生物體回饋的條件下，對(duì)平行壁通風(fēng)管，活細(xì)胞群體密度是6.0×106細(xì)胞數(shù)/毫升，對(duì)收縮口徑的通風(fēng)管、是3.5×106細(xì)胞數(shù)/毫升?？贵w生產(chǎn)量在沒(méi)有生物體回饋時(shí)是325毫克/天，在在有回饋操作時(shí)是630毫克/天。
應(yīng)當(dāng)明白，上面僅僅是以舉例的方式來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，可以在本發(fā)明的范圍和精神之內(nèi)作出各種具體的改進(jìn)。
權(quán)利要求
1.一種容納細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物的連續(xù)式發(fā)酵罐容器，該容器包括有攪動(dòng)容納在該容器第一部分中的懸浮培養(yǎng)物的裝置；一個(gè)使用時(shí)形成一靜止沉降區(qū)的該容器的第二部分，第二部分至少有一部分的底部與第一部分相連通；一個(gè)用于連續(xù)地將培養(yǎng)介質(zhì)輸送到該容器中的進(jìn)口裝置；和一個(gè)離第二部分底部上面一定距離處將培養(yǎng)物上清液從容器第二部分連續(xù)抽取的出口裝置，使用時(shí)，沉降在第二部分中的細(xì)胞回到被攪動(dòng)的懸浮培養(yǎng)物中，而具有比懸浮培養(yǎng)物更低細(xì)胞濃度的培養(yǎng)物上清液從該第二部分被抽取。
2.如權(quán)利要求
1所述的連續(xù)式發(fā)酵罐，其特征在于，該靜止沉降區(qū)整個(gè)地位于使用時(shí)容納被攪動(dòng)懸浮培養(yǎng)物的發(fā)酵罐部分之中。
3.如權(quán)利要求
1或2所述的連續(xù)式發(fā)酵罐，其特征在于，發(fā)酵罐中的工作流體的液位使得該靜止沉降區(qū)的頂部被0.25至1.0倍發(fā)酵罐直徑的懸浮培養(yǎng)物所蓋住。
4.由以上任一權(quán)利要求
所述的連續(xù)式發(fā)酵罐，其特征在于，連續(xù)式發(fā)酵罐容器是一個(gè)空氣提升式發(fā)酵罐。
5.如權(quán)利要求
3所述的連續(xù)式發(fā)酵罐，其特征在于，靜止沉降區(qū)由在下降通道和上升通道之間的隔離器形成的一個(gè)管道組成。
6.如權(quán)利要求
5所述的連續(xù)式發(fā)酵罐，其特征在于，隔離器由一個(gè)基本上是園柱形的通風(fēng)管組成，它大體被同心地安置在一個(gè)基本上是園柱形的發(fā)酵罐容器內(nèi)。
7.如權(quán)利要求
6所述的連續(xù)式發(fā)酵罐容器，其特征在于，靜止沉降區(qū)是由至少一部分通風(fēng)管內(nèi)外壁之間形成的環(huán)形空間組成。
8.如權(quán)利要求
5所述的連續(xù)式發(fā)酵罐容器，其特征在于，隔離器是由一個(gè)安裝在該容器中的基本是垂直的板組成。
9.一個(gè)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物的方法，包括在按照前面任一權(quán)利要求
的連續(xù)式發(fā)酵罐容器中培養(yǎng)細(xì)胞。
10.按權(quán)利要求
9所述的方法，其特征在于，細(xì)胞是雜化細(xì)胞。
專利摘要
一種象空氣提升式發(fā)酵罐這樣的容納細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物的連續(xù)式發(fā)酵罐容器，該容器包括有攪動(dòng)容納在該容器第一部分中的懸浮培養(yǎng)物的裝置；一個(gè)使用時(shí)形成靜止沉降區(qū)的該容器的第二部分，第二部分至少有一部分底部與第一部分相連通；一個(gè)用于將培養(yǎng)介質(zhì)連續(xù)地輸送到該容器中的進(jìn)口裝置；和一個(gè)離第二部分底部上面一定距離處將培養(yǎng)物上清液從容器第二部分連續(xù)抽取的出口裝置，使用時(shí)，沉降在第二部分中的細(xì)胞被送回到被攪動(dòng)的懸浮培養(yǎng)物中，而具有比懸浮培養(yǎng)物更低細(xì)胞濃度的培養(yǎng)物上清液從該第二部分被抽取。
文檔編號(hào)C12N5/02GK86104814SQ86104814
公開(kāi)日1987年2月25日 申請(qǐng)日期1986年6月20日
發(fā)明者約翰·羅伯特·伯奇, 羅伯特·查爾斯·博拉斯頓 申請(qǐng)人:細(xì)胞技術(shù)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan