一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是目前世界上最有效和臨床用量最大的抗凝血藥物，它是由豬或牛的腸粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類(lèi)物質(zhì)，多糖類(lèi)物質(zhì)往往與蛋白，核酸物質(zhì)等以復(fù)合物的形式存在于生物大分子中，而這些蛋白與核酸在260nm處有最大吸收，從而影響了肝素鈉的產(chǎn)品質(zhì)量。因此，為了降低肝素鈉260nm的吸光值，必須要將這些雜質(zhì)去除。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供了一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下顯著特點(diǎn)和積極效果:本發(fā)明使用熱乙醇沉淀將蛋白質(zhì)、核酸等雜質(zhì)帶入到廢乙醇中，降低了肝素鈉中間體的260nm吸光度，方法簡(jiǎn)單，操作方便，采用本發(fā)明方法得到的肝素鈉中間體性質(zhì)穩(wěn)定，260nm吸光度< 0.1。
[0004]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，包括如下步驟:
(1)取肝素鈉粗品酶解后的溶液，按18~25g/L比例加入氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值9.5-11.5，邊攪邊加入95%的乙醇沉淀，沉淀度數(shù)為40~45% (20°C)
(2)將上層廢乙醇抽到乙醇回收罐，下層沉淀加純化水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值10~12，按2~4%比例加入雙氧水氧化8~10小時(shí)。
[0005](3)氧化結(jié)束后，按15~20g/L比例加入氯化鈉溶解，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為
5.0-6.0，邊攪邊加入95%熱乙醇沉淀，乙醇沉淀度數(shù)45~50%( 20°C )，沉淀溫度為40~45°C，沉淀時(shí)間10~12小時(shí)。
[0006](4)將上層廢乙醇抽到乙醇回收罐。下層沉淀，取樣檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0007](I)取肝素鈉粗品酶解后的溶液500L，加入10 kg氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值9.5-11.5，邊攪邊加入400L的95%的乙醇沉淀10小時(shí)。
[0008](2)將上層廢乙醇抽到乙醇回收罐，下層沉淀加純化水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值10~12，加入雙氧水15L氧化8小時(shí)。
[0009](3)氧化結(jié)束后，加入氯化鈉10 kg溶解，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為5.0-6.0，邊攪邊加入560L的95%熱乙醇沉淀，沉淀溫度為45°C，沉淀時(shí)間10小時(shí)。
[0010](4)將上層廢乙醇抽到乙醇回收罐。下層沉淀，取樣檢測(cè)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于包括如下步驟: 取肝素鈉粗品酶解后的溶液，加入氯化鈉適量，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值，邊攪邊加入95%的乙醇沉淀； 將上層廢乙醇抽到乙醇回收罐，下層沉淀加純化水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值，加入雙氧水氧化； 氧化結(jié)束后，加入氯化鈉適量，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值，邊攪邊加入95%熱乙醇沉淀； 將上層廢乙醇抽到乙醇回收罐； 下層沉淀，取樣檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(I)所述的氯化鈉使用量為18~25g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(I)所述的溶液PH值為9.5-11.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(I)所述的乙醇沉淀度數(shù)為40~45% (20°C)，沉淀時(shí)間10~12小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(2)所述的pH值為10~12。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(2)所述的氧化條件為:雙氧水用量為溶液體積的2~4%，氧化時(shí)間8~10小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(3)所述的氯化鈉用量為15~20g/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(3)所述的pH值為5.0~6.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，其特征在于:步驟(3)所述的沉淀?xiàng)l件為:乙醇沉淀度數(shù)45~50%(20°C )，沉淀溫度為40~45°C，沉淀時(shí)間10~12小時(shí)。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種降低肝素鈉260nm吸光度的方法，肝素鈉粗品酶解后的溶液經(jīng)過(guò)一步沉淀，氧化后用熱乙醇沉淀，能有效去除產(chǎn)品中含量極低的核酸，蛋白等雜質(zhì)，降低產(chǎn)品260nm吸光度。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，效果明顯，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類(lèi)】C08B37-10
【公開(kāi)號(hào)】CN104530261
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410813615
【發(fā)明人】劉冠男, 王洪見(jiàn), 夏襯來(lái)
【申請(qǐng)人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月24日