一種乳酸乳球菌L.lactis HM6032的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，尤其涉及一種乳酸乳球菌L.1actis HM6032。
【背景技術(shù)】
[0002]以動(dòng)物或植物為原料開(kāi)發(fā)出的乳酸菌發(fā)酵食品品種繁多、營(yíng)養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者青睞。11年日本三得利株式會(huì)社健康化學(xué)研究所最近公布了一項(xiàng)研究成果，一種稱(chēng)作“Lac to bacillus pento sus S-PT 84”的植物乳桿菌對(duì)提高人體免疫力有良好的效果。這種乳酸菌主要來(lái)自芝麻、大豆、海帶的發(fā)酵物，具有耐酸堿、耐高溫等特點(diǎn)，而且能夠促使腸道內(nèi)的雙歧桿菌的數(shù)量增加，抑制腸道的有害細(xì)菌。
[0003]近年來(lái)中國(guó)對(duì)烘焙面包類(lèi)食品的消費(fèi)量逐年增加，對(duì)其品質(zhì)的要求也日益提高，出現(xiàn)了不少利用植物乳桿菌和嗜熱鏈球菌輔助酵母發(fā)酵，以提高面包營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種乳酸乳球菌L.1actis HM6032。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一株乳酸乳球菌Z.Jacii1S趟保藏編號(hào)為CGMCC N0.9533。
[0006]所述乳酸乳球菌L.1actis在微生態(tài)制劑、食品、保健品領(lǐng)域的用途。
[0007]所述用途為乳酸乳球菌L.1actis用于輔助酵母發(fā)酵的用途。
[0008]本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種微生態(tài)制劑，其特征在于:所述微生態(tài)制劑包含保藏號(hào)為CGMCC N0.9533的乳酸乳球菌L.1actis HM6032。
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種食品，其特征在于:所述食品添加劑含有保藏號(hào)為CGMCC N0.9533 的乳酸乳球菌 L.1actis HM6032。
[0010]所述食品是食品添加劑。
[0011]所述食品是面團(tuán)。
[0012]所述食品是面包。
[0013]本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種保健品，其特征在于:所述保健品含有保藏號(hào)為CGMCC N0.9533 的乳酸乳球菌 L.1actis HM6032。
[0014]本發(fā)明乳酸乳球菌的篩選方法是采集自然發(fā)酵的酸面團(tuán)，取Iml于9ml無(wú)菌生理鹽水中稀釋到10_3 —10_7，吸取0.2ml涂布于改良M17平板培養(yǎng)基上，37°C好氧培養(yǎng)24_48h。選擇革蘭氏陽(yáng)性、過(guò)氧化氫酶陰性的菌落進(jìn)一步分離純化，直到得到純菌株為止。將初篩得到的菌株進(jìn)行面包應(yīng)用實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)復(fù)篩得到菌株。
[0015]L.1actis HM6032 (乳酸乳球菌 Lactococcus Iactis /3攸是分離自自然發(fā)酵酸面團(tuán)樣品中的一株益生菌,本發(fā)明的乳酸乳球菌(Z.1actis HM6032)已經(jīng)保藏。
[0016]保藏信息如下:
菌株名稱(chēng):乳酸乳球菌Lactococcus lactis HM6032,
保藏日期:2014年8月20日， 保藏單位:中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，
保藏編號(hào):CGMCC N0.9533。
[0017]本發(fā)明根據(jù)中國(guó)消費(fèi)者的膳食結(jié)構(gòu)和飲食習(xí)慣，利用L.1actis HM6032乳球菌研制乳酸菌發(fā)酵面包，旨在提高面包的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，賦予面包不同的風(fēng)味和延期其貨架保存期，拓展乳球菌在食品特別是面包中的應(yīng)用范圍。
[0018]使用L.1actis -0?發(fā)酵制備的面包可改善面包風(fēng)味、改善面包表觀特征、延長(zhǎng)面包貨架期。L-1actis -0??作為一種益生菌，在食品(焙烤制品)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
[0019]微生態(tài)制劑(Porb1ties),也叫活菌制劑(Bigone)或生菌劑,是指運(yùn)用微生態(tài)學(xué)原理，利用對(duì)宿主有益無(wú)害的益生菌或益生菌的促生長(zhǎng)物質(zhì)，經(jīng)特殊工藝制成的制劑。目前微生態(tài)制劑已被應(yīng)用于飼料、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥保健和食品等各領(lǐng)域中。
[0020]由本發(fā)明的實(shí)施例可以看出，由Z.Jacii1S -0??菌粉發(fā)酵制備所得的面包酸感適中不刺激，發(fā)酵香氣濃厚宜人，麥香味濃厚，整體香氣清新；表面呈金黃色，色澤均勻一致，有光澤，面包為圓形，表面向外鼓凸，切面氣孔均勻細(xì)密，無(wú)大孔洞，內(nèi)質(zhì)潔白而富有彈性，組織蓬松之海綿狀，無(wú)生心；可以有效的延長(zhǎng)貨架期。
【附圖說(shuō)明】
[0021 ] 圖1是乳酸菌發(fā)酵面包生產(chǎn)工藝(1000重量份)。
[0022]圖2是空白組面包的外觀。
[0023]圖3是由L.1actis菌粉發(fā)酵制備所得的面包的外觀。
[0024]圖4是空白組面包經(jīng)過(guò)7天后的外觀。
[0025]圖5是由L.1actis 份菌粉發(fā)酵制備所得的面包經(jīng)過(guò)7天后的外觀。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類(lèi)似的標(biāo)號(hào)表示相同或類(lèi)似的元件或具有相同或類(lèi)似功能的元件。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0027]實(shí)施例1:乳酸乳球菌L.1actis皿^^納篩選鑒定
1、篩選
將純面團(tuán)放在空氣中自然發(fā)酵，采集自然發(fā)酵的酸面團(tuán)(30度發(fā)酵48h)，取Iml自然發(fā)酵的酸面團(tuán)于9ml無(wú)菌生理鹽水中稀釋到10_3 —10_7，吸取0.2ml涂布于改良M17平板培養(yǎng)基上，37°C好氧培養(yǎng)24-48h。選擇革蘭氏陽(yáng)性、過(guò)氧化氫酶陰性的菌落進(jìn)一步分離純化，直到得到純菌株為止。將初篩得到的菌株進(jìn)行面包應(yīng)用實(shí)驗(yàn)(見(jiàn)實(shí)施例2的步驟)，經(jīng)過(guò)復(fù)篩(具體標(biāo)準(zhǔn)為:測(cè)定應(yīng)用實(shí)驗(yàn)得到面包的乳酸含量比較高(提高10%以上)、風(fēng)味口感評(píng)價(jià)發(fā)酵風(fēng)味更加柔和，酸感不刺激、面包比容增加10%以上評(píng)價(jià)及保質(zhì)期實(shí)驗(yàn))得到菌株。
[0028]改良M17培養(yǎng)基配方:大豆蛋白胨1g,酵母浸粉2.5g,牛肉膏5g,葡萄糖5g,抗壞血酸鈉 0.5g，MgS04 0.25g，瓊脂 17g，蒸餾水 1000ml，調(diào)節(jié) ρΗ6.5±0.2。
[0029]2、鑒定
I) 16s rRNA 鑒定
以菌落為模板，16SrDNA通用引物8F1492擴(kuò)增此菌的16SrDNA，連接到T載體上克隆測(cè)序。測(cè)序長(zhǎng)度為1429bp，將結(jié)果與同屬及非同屬的乳酸菌進(jìn)行同源性比較.結(jié)果L.1actis趟微菌株與同屬的乳酸乳球菌同源性為85.5%以上，與不同屬的肉明串珠菌、漫游球菌、嗜鹽四聯(lián)球菌同源性分別為77.5%,82.8%,79.0%。故判定菌株Z.1actis HM6032為乳酸乳球菌。
[0030]2)微生物學(xué)特性
L.1actis趟況菌株為革蘭氏陽(yáng)性，發(fā)酵產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，兼性厭氧，10度生長(zhǎng)，45度不生長(zhǎng)，接觸酶陰性，氧化酶陰性
顯微鏡觀察形態(tài):呈球形，在液體培養(yǎng)基中成對(duì)和短鏈，不生芽孢，水中不運(yùn)動(dòng)；
根據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》(2001東秀珠蔡妙英版)判斷其屬于乳球菌屬。
[0031 ] 實(shí)施例2:乳酸乳球菌L.1actis ΗΜ603難食品中的應(yīng)用乳酸菌發(fā)酵面包生產(chǎn)工藝流程見(jiàn)圖1。為1000重量份的量。
[0032]1、含L.1actis趟況UifL酸菌面團(tuán)的制備:
將攪拌好的乳酸菌面團(tuán)(呈稀糊狀)置入37°C水浴恒溫培養(yǎng)3hl5min，得到乳酸菌發(fā)酵面團(tuán)。此時(shí)面團(tuán)的pH應(yīng)為6.05±0.05。乳酸菌面團(tuán)配方(面粉171g，全脂乳粉19g，葡萄糖2g,鹿糖 8g, AN 脂肪酶 0.03g, PiccantaseR 酶 0.03g, L.1actis /3攸凍干菌粉 0.1g (含L.1actis HM6032 6X 110 CFU)，去氯自來(lái)水 179g)
2、#摩面團(tuán)混合粉和含酵母菌的混合溶液的制備:
先將面粉和全脂乳粉加入攪拌器混勻，得到酵母面團(tuán)混合粉(面粉686g，全脂乳粉76g)；
將其它輔料(蔗糖、高粱酒、AN脂肪酶、PiccantaseR酶、活性干酵母)溶入345g去氯自來(lái)水中制成含酵母菌的混合溶液，含酵母菌的混合溶液配方(蔗糖38g，高粱酒(38度)1.5g，AN脂肪酶0.llg, PiccantaseR酶0.Hg,安琪干酵母9.5g,去氯自來(lái)水(4°C ) 345 g)。
[0033]3、含L.1actis趟況乳酸菌面團(tuán)和酵母菌面團(tuán)混合醒發(fā):
將步驟I所得乳酸菌發(fā)酵面團(tuán)和到步驟2所得酵母面團(tuán)混合粉(面粉和全脂乳粉)加入攪拌器，再將步驟2配好的含酵母菌的混合溶液緩慢加入攪拌器，180rpm攪拌20min。此時(shí)面團(tuán)應(yīng)為表面光滑細(xì)膩，可拉伸為透明薄膜，軟硬適中。
[0034]將面團(tuán)分割為50±0.5重量份，室溫(30°C左右)下整形裝盤(pán)，過(guò)程約lOmin。
[0035]然后進(jìn)行醒發(fā)，醒發(fā)溫度:35°C ±2°C相對(duì)濕度:70_80%，醒發(fā)時(shí)間為lh，醒發(fā)終點(diǎn) pH 為 5.90±0.05。
[0036]面團(tuán)醒發(fā)完成后表面刷全蛋液烘烤，面火:170°C，底火:190°C ;烘烤時(shí)間35min。
[0037]所制備得到的面包成品面包比容為3.40±0.16，pH為5.82±0.04，滴定酸度為
2.40±0.08。面包酸感適中不刺激，發(fā)酵香氣濃厚宜人，麥香味濃厚，整體香氣清新；
與空白組的面包(除了 L.1actis -0??菌粉沒(méi)有加外，其他成分和步驟、條件都相同)相比，結(jié)果見(jiàn)圖2和圖3。圖2是空白組面包的外觀；圖3是由Z.1actis _0^?菌粉發(fā)酵制備所得的面包的外觀?？梢钥闯觯緦?shí)施例由A菌粉發(fā)酵制備所得的面包表面呈金黃色，色澤均勻一致，有光澤，面包為圓形，表面向外鼓凸，切面氣孔均勻細(xì)密，無(wú)大孔洞，內(nèi)質(zhì)潔白而富有彈性，組織蓬松之海綿狀，無(wú)生心。
[0038]室溫下將由Z.1actis -0??菌粉發(fā)酵制備所得的面包與空白組的面包放于常溫(溫度28度，濕度55%)下，結(jié)果見(jiàn)圖4和圖5。圖4是空白組面包經(jīng)過(guò)7天后的外觀；圖5是由_0^?菌粉發(fā)酵制備所得的面包經(jīng)過(guò)7天后的外觀。從圖中可以看出，由L.1actis _0^?菌粉發(fā)酵制備所得的面包明顯延長(zhǎng)了貨架期，空白對(duì)照在上述條件下第3天開(kāi)始發(fā)現(xiàn)明顯可見(jiàn)菌斑，而添加本發(fā)明L.1actis -0??菌粉的面包在第7天才開(kāi)始出現(xiàn)明顯可見(jiàn)菌斑。
[0039]由此可以看出，由L.1actis -0??菌粉發(fā)酵制備所得的面包酸感適中不刺激，發(fā)酵香氣濃厚宜人，麥香味濃厚，整體香氣清新；表面呈金黃色，色澤均勻一致，有光澤，面包為圓形，表面向外鼓凸，切面氣孔均勻細(xì)密，無(wú)大孔洞，內(nèi)質(zhì)潔白而富有彈性，組織蓬松之海綿狀，無(wú)生心；可以有效的延長(zhǎng)貨架期。
[0040]盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一株乳酸乳球菌L.1actis保藏編號(hào)為CGMCC N0.9533。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種乳酸乳球菌 L.lactis HM6032 。所述乳酸乳球菌 L.lactis HM6032 （ Lactococcus lactis HM6032 ）是一種分離的全新的乳酸乳球菌，保藏編號(hào)為CGMCC No.9533。該菌株具有輔助酵母發(fā)酵的性質(zhì)，可用于微生態(tài)制劑、食品、保健品領(lǐng)域的用途領(lǐng)域。CGMCC No.953320140820
【IPC分類(lèi)】C12N1-20, C12R1-46
【公開(kāi)號(hào)】CN104531581
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410835715
【發(fā)明人】鄭傳森, 劉文美, 謝曉忠, 鄧宏輝
【申請(qǐng)人】廈門(mén)和美科盛生物技術(shù)有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日