一種優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖及其提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提 取方法，本發(fā)明還提供一種優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法提取的人體共生乳酸 桿菌肽聚糖在作為粘膜免疫系統(tǒng)的疫苗佐劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 粘膜免疫系統(tǒng)是指廣泛分布于呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌 腺體處的淋巴組織，是執(zhí)行局部特異性免疫功能的主要場(chǎng)所，是人類(lèi)抵抗外源性病原侵襲 的第一道免疫防線(xiàn)。針對(duì)粘膜免疫系統(tǒng)開(kāi)發(fā)疫苗已經(jīng)成為發(fā)展的必然趨勢(shì)。近年來(lái)，隨著 人體共生菌生理功能的深入挖掘，菌體及各組分在粘膜免疫系統(tǒng)中的重要功能已成為研宄 熱點(diǎn)。尤其是人體共生乳酸桿菌的肽聚糖，已被證實(shí)具備艾滋病疫苗佐劑的發(fā)展?jié)摿Α?br>[0003]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法，其特征在于，具體按照以下步驟實(shí) 施： 步驟1、人體共生乳酸桿菌的培養(yǎng)和擴(kuò)增； 步驟2、肽聚糖的分離與純化。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法，其特征在于，所 述步驟1人體共生乳酸桿菌的培養(yǎng)和擴(kuò)增具體為：取人體共生乳酸桿菌在MRS平板上劃線(xiàn) 培養(yǎng)32h-40h，挑取單克隆菌落，接種于5mL的MRS中，37°C靜置培養(yǎng)24-36h ;取培養(yǎng)好的菌 液，按照體積比為1:80-1:120的比例接種于37. 5mL MRS培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)32h-40h使其 生長(zhǎng)到達(dá)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期，得到菌泥。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法，其特征在于，所 述步驟2中肽聚糖的分離與純化具體為： 步驟2. 1、收集離心清洗的菌泥，按固液比（g/mL) 1:8-1:12加入質(zhì)量濃度10%的三氯 乙酸搖勾，其中，離心條件為8000g，15min ; 步驟2. 2、55°C -65°C水浴振蕩處理6h-10h，立即冷卻，于8000g，15min條件下離心； 步驟2. 3、沉淀用甲醇脫水以除去三氯乙酸；殘?jiān)儆帽撝? 步驟2. 4、所得殘?jiān)垂桃罕龋╣/mL)為1:4-1:6加入過(guò)濾除菌的混合酶液； 步驟2. 5、置于35°C _40°C的空氣搖床培養(yǎng)箱中振蕩酶解45h-50h ;于18000g，30min條 件下離心； 步驟2. 6、殘?jiān)脽o(wú)菌水清洗5次；凍干即得乳酸桿菌完整細(xì)胞壁肽聚糖。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法，其特征在于，所 述過(guò)濾除菌的混合酶液為0. lmol/L磷酸緩沖液pH7. 4,含有胰蛋白酶及中性蛋白酶，使每 種酶的酶活達(dá)到250U/mL。
5. -種由權(quán)利要求1-4任一權(quán)利要求所述的優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方 法提取的人體共生乳酸桿菌肽聚糖。
6. -種由權(quán)利要求1-4任一權(quán)利要求所述的優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方 法提取的人體共生乳酸桿菌肽聚糖在作為粘膜免疫系統(tǒng)的疫苗佐劑的應(yīng)用。
7. -種由權(quán)利要求5所述的優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法提取的人體共 生乳酸桿菌肽聚糖在作為粘膜免疫系統(tǒng)的疫苗佐劑的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法，包括人體共生乳酸桿菌的培養(yǎng)與擴(kuò)增，肽聚糖的分離與純化，本發(fā)明還公開(kāi)了一種采用優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法提取的人體共生乳酸桿菌肽聚糖；本發(fā)明還公開(kāi)了一種優(yōu)化的人體共生乳酸桿菌肽聚糖提取方法提取的人體共生乳酸桿菌肽聚糖在作為粘膜免疫系統(tǒng)的疫苗佐劑的應(yīng)用。本發(fā)明縮短了肽聚糖分離純化的周期，且該方法可用于肽聚糖的產(chǎn)業(yè)化制備；經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，通過(guò)該方法分離純化的肽聚糖具有良好的免疫增強(qiáng)效果，尤其可作為粘膜免疫系統(tǒng)疫苗佐劑使用。
【IPC分類(lèi)】C12R1-225, C12P19-04, A61K39-39
【公開(kāi)號(hào)】CN104531801
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410748867
【發(fā)明人】張華堂, 王超, 宋杰, 劉曉亮
【申請(qǐng)人】重慶市科學(xué)技術(shù)研究院
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月8日