一種山羊角活性多肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于山羊角蛋白深加工技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種利用蛋白酶酶解山羊角蛋白制 備山羊角活性多肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 山羊角為?？苿游锴嘌颍╪aemorhedusgoralHardwicke)、北山羊（capiraibex Linnaeus)的角。其首載于《本草新編》，日其："?；钏姥?。山羊角主要成分為蛋白質(zhì)、磷 酸鈣及微量的磷脂類成分和不溶性無機鹽等。因山羊角主要成分與羚羊角類似，其功用近 似羚羊角，可作羚羊角的代用品。近年來，研宄發(fā)現(xiàn)山羊角具有明顯的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱、抗 驚厥和抗病毒作用，同時對心血管及平滑肌亦有作用。山羊角在內(nèi)蒙地區(qū)廣為存在，但大部 分山羊角因未得到充分利用被廢棄，造成資源的浪費，同時給環(huán)境帶來了嚴(yán)重的污染。
[0003] 目前，國內(nèi)外關(guān)于山羊角深入加工利用的報導(dǎo)并不多見，大多將山羊角作為羚羊 角的替代品添加于中藥制劑中具有鎮(zhèn)痛解熱作用，還有部分山羊角經(jīng)打磨拋光后作為擺 件、一些道具的原料等，而山羊角中豐富的蛋白資源并未得到充分的利用，造成角蛋白資源 的浪費。
[0004] 山羊角蛋白是一種硬化、不易溶解的蛋白質(zhì)，其中既含有酸性基（羧基-C00H)，又 含有堿性基（胺基--NH2、亞胺基=NH)，所以山羊角蛋白對酸、堿、鹽、氧化劑、還原劑、鹵素 等都有一定的不穩(wěn)定性。山羊角蛋白質(zhì)的大分子之間主要通過二硫鍵建立起穩(wěn)定的結(jié)合， 從而構(gòu)成不溶的蛋白質(zhì)。可見，制取山羊角蛋白溶液，使其溶解的關(guān)鍵是使分子鏈間的二硫 鍵斷裂。從現(xiàn)狀看，國內(nèi)外對山羊角蛋白的再生利用的研宄還處在初級階段，在高附加值應(yīng) 用研宄上，工藝還不夠成熟，角蛋白工業(yè)化應(yīng)用還有一定的距離。隨著人們變廢為寶觀念的 深入，開展了對各種廢棄資源回收利用的研宄，探索一條經(jīng)濟、高效、實用性強、應(yīng)用價值高 的山羊角蛋白利用途徑是對當(dāng)前山羊角蛋白提取及應(yīng)用的迫切需求。
[0005] 因此，尋求一種處理山羊角蛋白、提高其應(yīng)用價值進而達到變廢為寶、避免環(huán)境污 染是人們的一種客觀需要。為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種山羊角多肽的制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種山羊角多肽及其制備方法，其包括以下步 驟：
[0007] (1)山羊角清洗；（2)粉碎；（3)山羊角蛋白提?。?4)酶解；（5)超濾；（6)干燥。
[0008] 其中，步驟（1)中采用轉(zhuǎn)鼓清洗機對挑揀后山羊角進行清洗，山羊角與水的質(zhì)量 比為1 : 2,轉(zhuǎn)鼓清洗時間30min，重復(fù)清洗4遍；
[0009] 步驟（2)中清洗后山羊角晾曬后采用粉碎機粉碎；
[0010] 步驟（3)中采用雙氧水和氫氧化鈉溶液處理提取山羊角蛋白：稱取山羊角粉碎 粉，加入20倍（w/v)濃度為15% (v/v)的H202,80°C下攪拌處理lh至山羊角粉碎粉完全 溶解；趁熱過濾，將所得濾液在30°C_40°C下濃縮；向濃縮后濾液中加入山羊角粉20倍（w/ V) 1.Omol/L的氫氧化鈉溶液，45°C條件下攪拌處理3h得山羊角蛋白粗溶液；將山羊角粗溶 液進行過濾、透析（10000-15000分子量的透析袋）并濃縮后得山羊角蛋白溶液；采用冰醋 酸調(diào)節(jié)山羊角蛋白溶液pH值至角蛋白等電點pH= 4-5左右使角蛋白沉淀析出；采用離心 機以離心處理去除上層清液，低溫烘干得山羊角蛋白粉末。
[0011] 步驟（4)中酶解方式為加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，酸性蛋白酶的用量為山 羊角蛋白重量的1. 0%。-2. 0%。，優(yōu)選為1. 5%。。木瓜蛋白酶的用量為山羊角蛋白重量的 1. 0%。-2. 0%。，優(yōu)選為 1. 5%〇。
[0012] 步驟（6)中濃縮山羊角水解液相對密度為1.lg/ml-1. 3g/ml，采用的噴霧干燥條 件為進風(fēng)溫度為150°C-170°C，排風(fēng)溫度為65°C-85°C。
[0013] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點和有益效果：
[0014] (1)本發(fā)明中所得山羊角活性多肽含量達75%以上，產(chǎn)品呈淡黃色粉末，易于溶 解。
[0015] (2)本發(fā)明操作工藝簡單，原材料易于取材且價格低廉，制備過程中反應(yīng)條件易于 控制，生產(chǎn)成本相對低廉。實驗中選用的兩種酶制劑易于獲得且價格低廉，適合工業(yè)化生 產(chǎn)。
[0016] (3)本發(fā)明充分利用山羊角蛋白，提高其利用價值達到變廢為寶、保護環(huán)境的目 的，所得山羊角多肽可廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
【具體實施方式】
[0017] 下面詳細敘述本發(fā)明的實施例，需要說明的是，本實施例是敘述性的，不是限定性 的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。
[0018] 比較實施1
[0019] 分別采用不同的酶進行酶解，比較酶解后色澤、水解度及多肽含量等變化情況，步 驟如下：
[0020] (1)山羊角清洗；(2)粉碎；（3)采用雙氧水和氫氧化鈉溶液處理提取山羊角蛋白； ⑷酶解；（5)超濾；(6)噴霧干燥，即得。
[0021] 步驟（4)中采用的酶及對應(yīng)獲得的產(chǎn)品如表中所示：
[0022]
【主權(quán)項】
1. 一種山羊角活性多肽的制備方法，包括以下步驟：（1)山羊角清洗；（2)粉碎；（3)山 羊角蛋白提??；(4)酶解；（5)過濾；(6)濃縮干燥，即得；其特征在于，步驟（4)中所用的酶 為酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，所述的酸性蛋白 酶的用量為山羊角蛋白重量的1. 0%。-2. 0%。。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，所述的酸性蛋白 酶的用量為山羊角蛋白重量的1. 5%。。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，所述的木瓜蛋白 酶的用量為山羊角蛋白重量的1. 0%。-2. 0%。。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，所述的木瓜蛋白 酶的用量為山羊角蛋白重量的1. 5%。。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，步驟（3)中山羊角 蛋白提取方法為：采用雙氧水和氫氧化鈉溶液處理提取山羊角蛋白。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，稱取山羊角粉碎 粉，加入20倍（w/v)濃度為15% (v/v)的H202,80°C下攪拌處理lh至山羊角粉碎粉完全 溶解；趁熱過濾，將所得濾液在30°C _40°C下濃縮；向濃縮后濾液中加入山羊角粉20倍（w/ v) 1. Omol/L的氫氧化鈉溶液，45°C條件下攪拌處理3h得山羊角蛋白粗溶液；將山羊角粗溶 液進行過濾、透析（10000-15000分子量的透析袋）并濃縮后得山羊角蛋白溶液；采用冰醋 酸調(diào)節(jié)山羊角蛋白溶液pH值至角蛋白等電點pH = 4-5左右使角蛋白沉淀析出；采用離心 機以離心處理去除上層清液，低溫烘干得山羊角蛋白粉末。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊角活性多肽的制備方法，其特征在于，步驟（6)中濃縮液 相對密度為1. l〇g/ml-l. 30g/ml，采用的噴霧干燥條件為進風(fēng)溫度為150°C _170°C，排風(fēng)溫 度為65°C?85°C。
9. 一種山羊角活性多肽，其特征在于，該山羊角活性多肽是根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項 所述的方法制備得到的。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種山羊角活性多肽的制備方法，其包括以下步驟：(1)山羊角清洗；(2)粉碎；(3)山羊角蛋白提??；(4)酶解；(5)過濾；(6)濃縮干燥，即得；其中步驟(4)中所采用的酶解方式是加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶。所得產(chǎn)品呈淡黃色固體粉末，易于溶解，且溶解速度較快。經(jīng)取樣、分析測試后，多肽含量達75.00％以上，所得山羊角活性多肽可應(yīng)用于生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
【IPC分類】C07K14-47, C12P21-06, C07K1-34
【公開號】CN104531813
【申請?zhí)枴緾N201410699022
【發(fā)明人】林波, 于秀玲, 王欣, 孔新穎, 韓風(fēng)雨
【申請人】內(nèi)蒙古天奇生物科技有限公司, 內(nèi)蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司, 內(nèi)蒙古天奇藥業(yè)投資（集團）有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年11月23日