一種氧雜脂肪酸的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分子生物學領(lǐng)域，尤其是涉及一種氧雜脂肪酸。
[0002]發(fā)明背景
A放射性碘標記的脂肪酸模擬-4 -硫雜此前報道(Gildehaus等，核醫(yī)學38:124 P,1997，摘要)。一般從美國專利是已知的。sup.18 F-標記的脂肪酸。第4323547號(通過引用并入本文)作為有用的PET心肌代謝的研究。最近，sup.18 F-標記的6 -硫雜脂肪酸(14F6THA)已被合成和評價(DeGrado，醫(yī)學檢驗鹵素化合物Rad1pharm 24:989-995，1991;DeGrado等人，J 32:1888-1896核醫(yī)學，1991年，每個完全作為參考編入本說明書)。-4 -硫雜-6 -硫雜脂肪酸類似物跟蹤棕櫚酸酯的總氧化，在肝臟中。長鏈脂肪酸的氧化，可能會發(fā)生在線粒體或過氧化物酶體。使用肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的特異性抑制離體大鼠肝臟的調(diào)查建議，sup.18 F-標記的4 -硫雜脂肪酸被困在肝臟組織中的這兩個細胞器。線粒體代謝功能需要一個更具體的探針。

【發(fā)明內(nèi)容】

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，攝取的影響。sup.18 F-標記的3 -氧雜脂肪酸與線粒體在肝臟中的脂肪酸氧化。因此，本發(fā)明體現(xiàn)在sup.18 F-標記的脂肪酸鏈的C3位具有氧雜取代。最優(yōu)選的是，本發(fā)明體現(xiàn)在一個sup.18 F]氟-3 -氧雜脂肪酸，具有8至20個碳原子的鏈長。
[0003]sup.18 F-標記的3 -氧雜脂肪酸本發(fā)明特別實用作為示蹤劑正電子發(fā)射斷層掃描(PET)在哺乳動物肝臟肝細胞線粒體β-氧化。在這方面，長鏈脂肪酸的β_氧化的是，對肝臟的ATP的主要來源。長鏈的總分布容積。sup.18 F-標記的3 -氧雜脂肪酸與線粒體β _氧化率。
[0004]甲-3 -氧雜脂肪酸類似物本發(fā)明可以單獨使用或結(jié)合其他代謝或灌注示蹤劑。例如，同時使用3 -氧雜脂肪酸和所公開的類型更完全地在共同未決的美國專利申請輯-4-硫雜脂肪酸類似物時，可以完成在同一個主題的PET顯像。第09/543,899申請甚至到目前為止，特此在本申請的名稱相同的發(fā)明者，并有權(quán)“F.sup.18標記噻脂肪酸和制作，并使用相同的方法”的全部內(nèi)容，是明確包含在本說明書的參考文獻。同時使用3 -氧雜4 -硫雜脂肪酸示蹤劑的PET顯像可能提供具體信息。脂肪酸氧化在線粒體和過氧化物酶體。
[0005]PET測量肝臟β -氧化率應在許多疾病狀態(tài)，包括酒精性脂肪性肝炎，非酒精性脂肪肝，肥胖癥和2型糖尿病的肝臟的代謝功能提供重要的信息。特別令人感興趣的是抑制脂肪酸氧化的可能性，在脂肪肝疾病中的復合脂質(zhì)的積累是一個因素。3 -氧雜脂肪酸積累肝細胞線粒體的特異性可允許的疾病，影響肝線粒體的鑒別診斷。方式獲得本發(fā)明的進一步理解，從下面的非限制性實施例。示例
在下面的例子中使用的化學品均為分析純。干乙腈獲得商業(yè)(皮爾斯，伊利諾伊州羅克福德，)。增刊H-NMR譜記錄的一個瓦里安統(tǒng)一的500兆赫光譜使用⑶Cl.sub.3溶劑(Me.sub.4娃,0.00 PPM)ο r.sub.f值是指上進行娃膠層析,用指出的溶劑體系的薄層層析(TLC)0常規(guī)柱色譜法用硅膠(100-200目)在常壓下進行，溶劑體系。
[0006]叔丁基15 -羥基-3 -氧雜十五烷酸(I)
12-四氫卩比喃氧基-Ι-dododecanol的合成1，12 -十二燒二醇,如前面所述(十四行詩，等次，立體異構(gòu)體和類似物的14 -甲基-1 -十八碳烯，桃潛葉蛾的性信息素，桃潛葉蛾，L.高?；瘜W生態(tài)學報13:547-555，1987，引入本文作為參考)。
[0007]由于該醇(5毫摩爾)與溴乙酸叔丁酯(20毫摩爾)和硫酸氫四丁基銨(5毫摩爾)在20毫升50%氫氧化鈉和15ml CHCl.sub.2的4小時，在室溫下進行反應。該溶液用乙醚萃取兩次，將有機相干燥(MgS0.sub.4)，并在減壓下蒸發(fā)。該反應中，叔丁基的商品15 -四氫吡喃氧基-3 -氧雜十五烷酸，分離液相色譜法(己烷/乙酸乙酯3:1)，R.sub.f = 0.7。此產(chǎn)物直接反應，在甲醇中與催化量的對甲苯磺酸，在室溫下進行2小時。用碳酸氫鈉溶液中和后，將溶劑蒸發(fā)。中加入乙醚(20ml)，飽和食鹽水(20ml)中，將有機層干燥(MgS0.sub.4),并在減壓下蒸發(fā)。利用液相色譜法(己燒/乙酸乙酯3:1), R.sub.f = 0.2的商品I (3.3毫摩爾，66%)，為無色油狀物分離。增刊H-NMR 1.2-1.65 (米，20H，CH.sub.2)的，
1.48 (9H (叔丁基)CH.sub.3),3.50 (2H，T，C (4) H.sub.2),3.64 (T，2H，C (15)Η.sub.2)，3.94 (S，3H，C ()H.sub.2)，。叔丁基15-甲苯磺酰氧基-3 -氧雜十五烷酸(2)
在二氯甲烷中的產(chǎn)品I 3毫摩爾(10毫升)溶液中加入甲苯磺酰氯(5毫摩爾)和吡啶(5毫摩爾)，并將該溶液在室溫下攪拌20小時。乙醚(20ml)和稀鹽酸溶液，將有機層依次用水和鹽水洗滌，干燥(MgS0.sub.4)，并在減壓下蒸發(fā)。的商品2分離產(chǎn)率為90%，為油狀物，用柱色譜(己烷/乙酸乙酯3:1)。在丙酮中的產(chǎn)品2至2毫摩爾的溶液中加入溴化鋰(7毫摩爾)，并將該溶液在室溫下攪拌4小時。乙醚(20ml)和稀鹽酸溶液，將有機層依次用水和鹽水洗滌，干燥(MgS0.sub.4)，并在減壓下蒸發(fā)。的商品3分離，收率85%，為油狀物，用柱色譜(己烷/乙酸乙酯4:1)。該溶液在室溫下攪拌4小時。中加入乙醚(20ml)和水(20ml)，將有機相干燥(MgS0.sub.4)，并在減壓下蒸發(fā)。通過柱色譜法(己烷/乙酸乙酯3:1)分離所得到的氟代酯。薄層色譜法(己烷/乙酸乙酯3:1) R.sub.f = 0.7。的甲基酯是直接水解在20ml乙醇/ 0.2N的K0H(1:1)在室溫攪拌過夜。蒸發(fā)后的乙醇，乙醚(30ml)中的大多數(shù)和稀鹽酸中加入。洗滌有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS0.sub.4)，并在減壓下蒸發(fā)。的商品4，收率60%，從己烷中結(jié)晶。熔點=38.degree0增刊H-NMR 1.2-1.65 (米，20H，CH.sub.2)的，3.50 (T，2H，C ( ) H.sub.2),3.94 (3H，C (2 C。 ) H.sub.2),4.44 (dt的，2H，C (15) H.sub.2 J.sub.HF = 47.5 赫茲，J.sub.HH = 6.2 赫茲)。15 -溴甲基 _3-氧雜-十五烷酸(5) 3至1.3毫摩爾的甲醇(20ml)中的溶液中加入催化量的對甲苯磺酸，并將該溶液在回流下攪拌5小時。中加入乙醚(20ml)和水(20ml)，將有機層依次用水和鹽水洗滌，干燥(MgS0.sub.4)，并在減壓下蒸發(fā)。的商品5(1毫摩爾，77%)，為油狀物用柱色譜法(己烷/乙酸乙酯9:1 - > 3:1)分離。薄層色譜法(己烷/乙酸乙酯3:1)R.sub.f = 0.6。F-18標記的FTP和FOP的前體化合物的產(chǎn)品5。向該溶液中加入2毫升玻璃小瓶 2.2.2 KRYPT0FIX (10 毫克)，乙腈(0.5 毫升)，9% K.sub.2 C0.sub.3 水溶液和 20ml。[sup.18 F]氟離子,通過質(zhì)子轟擊H.sub.2.sup.18 O O 95% (原子)),然后,加入的招加熱塊放置在容器中，在85 EC，并將溶劑下蒸發(fā)的氦氣或氮氣流。將殘余物進一步通過共沸蒸餾干燥，與的乙腈(2.times.0.3毫升)。的前體(about.2毫克)的乙腈(0.5毫升)溶液中加入A液，密封小瓶，并返回到加熱塊。反應時間為15分鐘。簡要地，將小瓶放置在冰-水中冷卻。摻入[sup.18 F]氟化物監(jiān)測通過無線電薄層色譜法(己烷/乙酸乙酯3:1)。
R.sub.f值分別為0.0和0.7。sup.18 F]氟化物[sup.18 F]氟酯分別。
[0008]隨后水解得到的[sup.18 F]氟代酯在同一容器中進行，通過加入0.2毫升0.2NKOH，繼續(xù)加熱至90°C。 C.為4分鐘。將混合物冷卻，酸化，濃醋酸(25ml)中，過濾，并適用于制備性HPLC柱(表I)。一個串聯(lián)的UV檢測器(波長210 nm)，用于監(jiān)測洗脫的未標記的材料。[sup.18 F]氟代脂肪酸餾分收集，蒸發(fā)至干，配制成等滲的氯化鈉溶液(長鏈脂肪酸類似物，1%至2%白蛋白存在的話)，并通過0.22毫米過濾器過濾(新型Millex-GS)。
[0009]表I半制備型反相高效液相色譜的容量因子(K =)的脂肪酸類似物(用NucleosilC-18C10米)，250倍，10毫米，流速=4.3毫升/分，流動相為甲醇/ H。O / AcOH中sub.2X:Y:0.5,X + Y = 99.5)流動相化合物(％甲醇)k’個15 -溴-3 -氧雜十五烷酸85 4.215 -氟-3 -氧雜-十五烷酸(F0P) 85 3.1生物研究
實驗是在活老鼠的生物分布和離體大鼠肝臟的模型長鏈3 -氧雜類似物(15 -[sup.18 F]氟-3 -氧雜十五燒酸=F0P)。灌流液中的Krebs-Hensleit緩沖液，白蛋白,1% 0.15 mM的棕櫚酸，和5mM葡萄糖。SD大鼠(200-225克)禁食過夜。門靜脈插管灌注在8毫升/分鐘。肝臟游離的動物從尸體放在兩個NAL (Tl)閃爍探測器之間。毒氣灌流液，其中95%的氧氣(常氧)或35%的氧氣(缺氧)的混合氣體。含有剩余部分的氣體是氮氣和二氧化碳為(5%)。示蹤劑的大丸劑給藥，或作為一個脈沖滴注20分鐘。脈沖輸液允許絕對定量。sup.18 F吸收率的肝臟。吸收和清除率是衡量肝時間活動曲線二室模型擬合。分布的兩個隔室的體積估計從擬合的速率常數(shù)。9，10 β-氧化率。sup.3 H]棕櫚酸酯靜脈污水樣本的收集和滴定水分離測定。研究結(jié)果顯示良好的相關(guān)性，β_氧化率分布卷室 2 (V2) (R = 0.95)和總配送量在肝臟(FOP V_T0TAL = Vl + V2)相關(guān)(r = 0.96)。(毫升/克肝臟V_T0TAL)與棕櫚酸氧化的情節(jié)(毫升/分鐘/ g干)給出的線性擬合方程為y = -2.35 +13.7 X。截距是從零(P = 0.09)無統(tǒng)計學意義。在大鼠體內(nèi)的分布FOP測量15注射后30分鐘表現(xiàn)出較高的肝組織的吸收，血液，心臟，腎臟和其他組織的放射性水平相對較低。因此，攝取的FOP出現(xiàn)具體的肝臟中的脂肪酸的線粒體代謝。
[0010]PET成像研究進行了健康男性和女性受試者和患者與非酒精性脂肪性肝炎(NASH)0 NASH患者顯示FOP —致的攝取減少，線粒體代謝功能障礙。
[0011]雖然本發(fā)明已結(jié)合目前被認為是最實用和優(yōu)選的實施例中描述的，但應理解，本發(fā)明不局限于所公開的實施例，而是相反，意在覆蓋各種包括在所附的權(quán)利要求書的精神和范圍之內(nèi)的修改和等同布置。
【主權(quán)項】
1.一種氧雜脂肪酸的鏈長度的碳原子數(shù)為8 20的具有肝組織中的脂肪酸的線粒體代謝的特定吸收。
2.權(quán)利要求1的方法，一種氧雜脂肪酸飽，這是至少部分不飽和的脂肪酸示蹤劑。
3.權(quán)利要求1的方法，一種氧雜脂肪酸飽，其中包括一個十五烷酸的脂肪酸部分。
4.權(quán)利要求1的方法，一種氧雜脂肪酸飽，其特征在于，所述[sup.18 F]上面的末端碳原子取代的氟原子。
5.權(quán)利要求1的方法，一種氧雜脂肪酸飽，該方法包括給哺乳動物施用一個放射性標記有效量的F-標記的sup.18氧雜取代的脂肪酸示蹤劑，根據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求2-6中任一項的放射性標記的哺乳動物的肝臟組織。
【專利摘要】<b>本發(fā)明一種</b>氧雜脂肪酸飽，脂肪酸的氧取代產(chǎn)生特定的肝組織中的脂肪酸的線粒體代謝示蹤劑。最優(yōu)選地，本發(fā)明體現(xiàn)在一個sup.18F]氟-3-氧雜脂肪酸，具有8至20個碳原子之間的鏈長。sup.18F-標記的3-氧雜脂肪酸本發(fā)明發(fā)現(xiàn)特別實用哺乳動物肝組織的放射性標記的目的，正電子發(fā)射斷層掃描。
【IPC分類】A61K101-02, A61K51-00, C07C59-01
【公開號】CN104557513
【申請?zhí)枴緾N201310486952
【發(fā)明人】李唐
【申請人】上海滿益科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月17日