用于檢測苯乙醇胺a的單克隆抗體及酶聯(lián)免疫方法與試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥殘留分析和免疫學技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能識別苯乙醇胺A的 單克隆抗體以及用于檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫方法（ELISA)與試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 苯乙醇胺A(phenylethanolamineA,PEAA)又稱克倫巴胺，是|3 -興奮劑的一種， 該藥結(jié)構(gòu)和生理功能上類似腎上腺素和去甲腎上腺素，通過與細胞膜上的0 _腎上腺素能 受體結(jié)合發(fā)揮作用。這類藥物能加強脂肪分解，抑制脂肪的合成，減少動物機體的脂肪，同 時也能促進蛋白質(zhì)的合成，減少蛋白的分解等作用而廣泛用于畜禽中，但其毒副作用較大， 如果用于食品動物，易在動物組織中殘留，可能通過動物食品而影響到人類的健康。為了保 障食品安全，《飼料和飼料添加劑管理條例》有關(guān)規(guī)定，禁止在動物飲水和飼料中使用苯乙 醇胺A。
[0003]目前苯乙醇胺A的檢測方法主要有質(zhì)譜法、液質(zhì)聯(lián)用等，這些儀器分析方法雖然 靈敏度高，但存在設(shè)備昂貴、不能大量用于基層等缺點。隨著免疫方法學的快速發(fā)展，苯乙 醇胺A的試劑盒和膠體金逐漸增多，必將使苯乙醇胺A的檢測飛速發(fā)展。
[0004]CN102735834A公開了一種檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒，所述試劑盒中含 有苯乙醇胺A的特異性抗體；并公開了以苯乙醇胺A與載體蛋白的偶聯(lián)物為免疫原得到的 鼠單克隆抗體，但是該單克隆抗體對苯乙醇胺A的檢測靈敏度不高，其最低檢測限（IC5tl)為 2. 4yg/L〇
[0005]CN103265440A公開了一種苯乙醇胺A半抗原，在水合肼、鈀碳和氮氣條件下將 苯乙醇胺A苯環(huán)上的硝基轉(zhuǎn)換成氨基，再重氮化法連接載體蛋白制備了幾種苯乙醇胺A的 多克隆抗體，最低檢測限（IC5tl)分別為0. 049、0. 22、0. 21、0. 48yg/L。盡管這些抗體檢測的 靈敏度較高，但半抗原制備方法復(fù)雜，使用的原料是危險性較大的水合肼，合成條件苛刻； 且制備的是無法連續(xù)生產(chǎn)的多克隆抗體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一個目的是提供一種靈敏度高、特異性強、能識別苯乙醇胺A的單克 隆抗體。
[0007] 本發(fā)明的第二個目的是利用該單克隆抗體，制備一種用于苯乙醇胺A檢測的酶聯(lián) 免疫試劑盒。
[0008] 本發(fā)明的第三個目的是利用該試劑盒，建立一種能用于苯乙醇胺A非診斷目的檢 測的酶聯(lián)免疫方法。
[0009] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0010] 一種能識別苯乙醇胺A殘留的單克隆抗體，它是由保藏號為CCTCCN0:C201498的 雜交瘤細胞株P(guān)EAA2D8所分泌的。
[0011] 上述雜交瘤細胞株P(guān)EAA2D8,保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，其保藏號 為CCTCCNO:C201498。
[0012] 制備所述的單克隆抗體所用的半抗原具有式（2)所示的結(jié)構(gòu)式：
【主權(quán)項】
1. 一種能識別苯乙醇胺A的單克隆抗體，它是由保藏號為CCTCCN0:C201498的雜交瘤 細胞株P(guān)EAA2D8所分泌的。
2. -株雜交瘤細胞株P(guān)EAA2D8,保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC N0:C201498,所述雜交瘤細胞株P(guān)EAA2D8分泌的單克隆抗體能識別苯乙醇胺A。
3. 權(quán)利要求1所述的單克隆抗體在制備檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用。
4. 包含權(quán)利要求1所述單克隆抗體的試劑盒。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，該試劑盒是用于檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒。
6. 權(quán)利要求4或5所述的試劑盒在苯乙醇胺A非診斷目的檢測中的應(yīng)用。
7. -種用于檢測動物性食品中苯乙醇胺A殘留的酶聯(lián)免疫方法，包括以下步驟： 1) 將結(jié)構(gòu)如式（1)所示的化合物與卵清白蛋白偶聯(lián)得到包被原； 2) 用保藏號為CCTCCN0:C201498的雜交瘤細胞株P(guān)EAA2D8制備單克隆抗體； 3) 用步驟（1)的包被原包被固相載體； 4) 將待測樣品提取后進行酶聯(lián)免疫檢測，
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種能識別苯乙醇胺A的特異性單克隆抗體，本發(fā)明還公開了一種用于檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫方法及試劑盒。本發(fā)明的單克隆抗體是由保藏號為CCTCC？NO:C201498的雜交瘤細胞株P(guān)EAA2D8所分泌的。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明建立的ELISA方法和試劑盒對苯乙醇胺A的最低檢測限(IC50)僅為0.63μg/L，對其它十余種β-興奮劑沒有交叉反應(yīng)，顯示出極高的檢測靈敏度和特異性，能檢測豬肉等動物性食品中苯乙醇胺A的痕量殘留，具有檢測誤差小、精密度高、效率高等優(yōu)點。CCTCC NO:C20149820140520
【IPC分類】C07K16-44, G01N33-543, C12N5-20, G01N33-577
【公開號】CN104558183
【申請?zhí)枴緾N201410830040
【發(fā)明人】袁宗輝, 王玉蓮, 趙蘭, 彭大鵬, 潘源虎, 陳冬梅, 陶燕飛, 劉振利
【申請人】華中農(nóng)業(yè)大學
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月26日