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      一種hla-dqbi常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法

      文檔序號(hào):8246923閱讀:333來(lái)源:國(guó)知局
      一種hla-dqbi常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明涉及到基因剔除研宄的新用途,特別是一種HLA-DQBI基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法。
      【背景技術(shù)】
      [0002]基因剔除提出技術(shù)既可以細(xì)胞水平上進(jìn)行,從而建立新的細(xì)胞系,也可以在整體水平行以建立基因剔除動(dòng)物,通過(guò)觀察個(gè)體的表型變化,推測(cè)基因在體內(nèi)的可能功能,HLA-DQBI基因剔除動(dòng)物模型,不僅為變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴(kuò)張型心肌病、多發(fā)性硬化癥、孕婦反復(fù)流產(chǎn)、慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關(guān)疾病闡明發(fā)病機(jī)制、同時(shí)也為相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制的闡明提供了良好的途徑。為闡明以上疾病的發(fā)病機(jī)制和對(duì)以上疾病的基因治療和發(fā)展特異性藥物療法提供一定基礎(chǔ),也有報(bào)道指出有些疾病與種族遺傳有關(guān),進(jìn)而闡明疾病臨床表型多樣性的本質(zhì),為臨床個(gè)體化治療提供一定依據(jù),同時(shí)也為我國(guó)群體多態(tài)性研宄、人類學(xué)研宄、疾病相關(guān)性研宄等提供有價(jià)值的科學(xué)遺傳依據(jù)。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0003]為了克服以上技術(shù)缺陷,本發(fā)明提供一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除動(dòng)物模型的建立方法。
      [0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為,一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法,包括以下步驟:
      [0005](I)通過(guò)對(duì)129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定;
      [0006](2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對(duì)提取的DNA進(jìn)行測(cè)序和篩選,確定實(shí)驗(yàn)小鼠;
      [0007](3)采用Neo Cassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除;
      [0008](4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
      [0009]所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養(yǎng)于下述SPF環(huán)境中,室內(nèi)溫度控制在22°C?26°C,濕度50%?65%,光照控制12h明/12h暗;小鼠籠盒、墊料、飲用水均經(jīng)高溫高壓滅菌處理;飼料為經(jīng)印Co輻照滅菌的全營(yíng)養(yǎng)飼料。飼養(yǎng)過(guò)程中,每天進(jìn)入動(dòng)物房I次,觀察小鼠生長(zhǎng)情況并記錄小鼠的質(zhì)量變化情況;每周更換兩次墊料并補(bǔ)充食物和水。采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖,連續(xù)生產(chǎn)3-4胎,子鼠3周后離乳,離乳后種鼠亦同籠交配,H2-ebl基因剔除小鼠采用純合子交配繁殖。
      [0010]所述常規(guī)基因剔除是通過(guò)基因打靶,把需要剔除的基因的幾個(gè)重要的外顯子或者功能區(qū)域用Neo Cassette替換掉,這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物。此類基因剔除鼠一般用于研宄某個(gè)基因在對(duì)小鼠全身生理病理的影響,而且這個(gè)基因沒(méi)有胚胎致死性。
      [0011]本發(fā)明所帶來(lái)的的有益效果是:本發(fā)明在研宄疾病發(fā)病機(jī)制中主要是應(yīng)用基因剔除技術(shù),HLA-DQBl位于人類白細(xì)胞抗原(human lymphocyte antigen,HLA) II類基因DQ座位點(diǎn),屬于經(jīng)典的HLAII類基因范疇,具基因多態(tài)性,與抗原處理和提呈有關(guān)。研宄發(fā)現(xiàn),HLA-DQBl與變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴(kuò)張型心肌病、多發(fā)性硬化癥、孕婦反復(fù)流產(chǎn)、慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關(guān),具體機(jī)制仍未闡明,因而構(gòu)建HLA-DQB1,不僅為闡明AR發(fā)病機(jī)制、同時(shí)也為相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制的闡明提供了良好的途徑。
      【具體實(shí)施方式】
      [0012]—種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法,包括以下步驟:
      [0013](I)通過(guò)對(duì)129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定;
      [0014](2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對(duì)提取的DNA進(jìn)行測(cè)序和篩選,確定實(shí)驗(yàn)小鼠;
      [0015](3)采用Neo Cassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除;
      [0016](4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
      [0017]所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養(yǎng)于下述SPF環(huán)境中,室內(nèi)溫度控制在22°C?26°C,濕度50%?65%,光照控制12h明/12h暗;小鼠籠盒、墊料、飲用水均經(jīng)高溫高壓滅菌處理;飼料為經(jīng)印Co輻照滅菌的全營(yíng)養(yǎng)飼料。飼養(yǎng)過(guò)程中,每天進(jìn)入動(dòng)物房I次,觀察小鼠生長(zhǎng)情況并記錄小鼠的質(zhì)量變化情況;每周更換兩次墊料并補(bǔ)充食物和水。采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖,連續(xù)生產(chǎn)3-4胎,子鼠3周后離乳,離乳后種鼠亦同籠交配,H2-ebl基因剔除小鼠采用純合子交配繁殖。
      [0018]所述常規(guī)基因剔除是通過(guò)基因打靶,把需要剔除的基因的幾個(gè)重要的外顯子或者功能區(qū)域用Neo Cassette替換掉,這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物。此類基因剔除鼠一般用于研宄某個(gè)基因在對(duì)小鼠全身生理病理的影響,而且這個(gè)基因沒(méi)有胚胎致死性。
      [0019]本發(fā)明在研宄疾病發(fā)病機(jī)制中主要是應(yīng)用基因剔除技術(shù),HLA-DQBl位于人類白細(xì)胞抗原(human lymphocyte antigen,HLA) II類基因DQ座位點(diǎn),屬于經(jīng)典的HLA II類基因范疇,具基因多態(tài)性,與抗原處理和提呈有關(guān)。研宄發(fā)現(xiàn),HLA-DQBl與變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴(kuò)張型心肌病、多發(fā)性硬化癥、孕婦反復(fù)流產(chǎn)、慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關(guān),具體機(jī)制仍未闡明,因而構(gòu)建HLA-DQBl,不僅為闡明AR發(fā)病機(jī)制、同時(shí)也為相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制的闡明提供了良好的途徑。
      [0020]本發(fā)明不局限于上述實(shí)施方式,任何人應(yīng)得知在本發(fā)明啟示下做出的結(jié)構(gòu)變化所得出的相同或相近的技術(shù)方案,均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
      [0021]本發(fā)明未詳細(xì)描述的技術(shù)、形狀、構(gòu)造部分均為公知技術(shù)。
      【主權(quán)項(xiàng)】
      1.一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法,其特征在于,包括以下步驟: (1)通過(guò)對(duì)129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定; (2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對(duì)提取的DNA進(jìn)行測(cè)序和篩選,確定實(shí)驗(yàn)小鼠; (3)采用NeoCassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除; (4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
      2.如權(quán)利要求1所述的HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法,其特征在于,所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養(yǎng)于下述SPF環(huán)境中,室內(nèi)溫度控制在22°C?26°C,濕度50%?65%,光照控制12h明/12h暗;小鼠籠盒、墊料、飲用水均經(jīng)高溫高壓滅菌處理;飼料為經(jīng)印Co輻照滅菌的全營(yíng)養(yǎng)飼料;飼養(yǎng)過(guò)程中,每天進(jìn)入動(dòng)物房I次,觀察小鼠生長(zhǎng)情況并記錄小鼠的質(zhì)量變化情況;每周更換兩次墊料并補(bǔ)充食物和水;采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖,連續(xù)生產(chǎn)3-4胎,子鼠3周后離乳,離乳后種鼠亦同籠交配。
      3.如權(quán)利要求1所述的HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法,其特征在于,所述常規(guī)基因剔除是通過(guò)基因打靶,把需要剔除的基因的幾個(gè)重要的外顯子或者功能區(qū)域用Neo Cassette替換掉,這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物。
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實(shí)驗(yàn)小鼠模型的建立方法,包括以下步驟:(1)通過(guò)對(duì)129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定;(2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對(duì)提取的DNA進(jìn)行測(cè)序和篩選,確定實(shí)驗(yàn)小鼠;(3)采用Neo?Cassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除;(4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。本發(fā)明所帶來(lái)的有益效果是:不僅為闡明AR發(fā)病機(jī)制、同時(shí)也為相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制的闡明提供了良好的途徑。
      【IPC分類】A01K67-027, C12N15-873
      【公開號(hào)】CN104561100
      【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410811894
      【發(fā)明人】張華 , 李林格, 呂靚
      【申請(qǐng)人】張華 , 李林格, 呂靚
      【公開日】2015年4月29日
      【申請(qǐng)日】2014年12月24日
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