用于甾醇制備甾醇酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶4用于留醇制備留醇酯的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物留醇是廣泛存在于生物體組織內(nèi)的一類重要的天然有機(jī)化合物，性激素、腎上腺皮質(zhì)激素、留醇、膽汁酸、強(qiáng)心苷、留體皂苷、留體生物堿等均屬于此類。植物油是植物甾醇含量較為豐富的食品之一，其中玉米油中的植物留醇含量較高。性狀為白色粉末，也可有酯狀溶于油脂。具有防止冠心動脈粥樣硬化、促進(jìn)膽固醇的降解代謝等藥用和保健價(jià)值；合成維生素D3等留類藥物重要中間體；生發(fā)、養(yǎng)發(fā)和皮膚營養(yǎng)劑；化紡工業(yè)中的分散劑、柔軟劑、抗氧劑等。植物留醇是植物中的一種活性成分，在結(jié)構(gòu)上與動物性留醇如膽留醇相似，廣泛存在于各種植物油、堅(jiān)果和植物種子中。它是油脂中不皂化物的主要成分。
[0003]現(xiàn)已提出的用游離酶法水解脫除非水化磷脂，但在實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)磷脂酶對反應(yīng)環(huán)境敏感，易變性失活，反應(yīng)條件不易控制。從現(xiàn)有的信息看，將磷脂酶進(jìn)行固定化，可提高它的穩(wěn)定性和利用效率。目前對磁性復(fù)合載體固定化酶的研究很受關(guān)注，但用于制取甾醇酯中還未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)報(bào)道。
[0004]磁性復(fù)合載體固定化酶具有較強(qiáng)的磁場響應(yīng)性，從而可以借助外部磁場從反應(yīng)體系中快速簡便地富集、分離、回收固定化酶，隨時(shí)控制酶催化反應(yīng)，提高酶的使用效率。另夕卜,它還可有效地提高酶的活力，改善酶的穩(wěn)定性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明是磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2用于制取留醇酯的方法。
[0006]取一定量的卵磷脂和相應(yīng)的豆留醇，加入適量的水，再加入脂質(zhì)?；D(zhuǎn)移酶，使反應(yīng)在一定植物留醇、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、水的添加量及酶的添加量的條件下反應(yīng)一段時(shí)間后，測定生成留醇酯的含量。
[0007]本發(fā)明的有益點(diǎn):磁性復(fù)合載體進(jìn)行磷脂酶^的固定化，賦予了固定化酶較強(qiáng)的磁響應(yīng)性，從而可借助外部磁場從反應(yīng)體系中快速簡便回收固定化酶，提高固定化酶的使用效率。另外，還可以改善酶的穩(wěn)定性。磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶更易回收，回收率很高，從而，提高了酶的重復(fù)利用性，降低了生產(chǎn)成本。
[0008]本發(fā)明的步驟如下:
步驟一:取一定量的卵磷脂和相應(yīng)的豆留醇，加入適量的水，再加入脂質(zhì)?；D(zhuǎn)移酶，使反應(yīng)在溫度為60~90°C，一定植物甾醇、反應(yīng)時(shí)間、水的添加量及酶的添加量的條件下反應(yīng)一段時(shí)間后，測定生成留醇酯的含量；
步驟二:選擇植物甾醇添加量為0.5-2.5g，過程同步驟一，確定反應(yīng)中植物甾醇的添加量；
步驟三:選擇磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2的添加量為0.5-1.0g，過程同步驟一，確定磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶4的添加量； 步驟四:選擇水的添加量分別為磁性復(fù)合載體磷脂酶弋添加量的0~2%，過程同步驟一，確定反應(yīng)攪拌中水的添加量；
步驟五:選擇反應(yīng)時(shí)間分別為l~8h，過程同步驟一，確定反應(yīng)時(shí)間。
[0009]本發(fā)明的關(guān)鍵是磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2在留醇制備留醇酯的過程中其條件的確定，包括磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2W添加量、植物留醇、水、反應(yīng)溫度、和時(shí)間。按照最佳工藝參數(shù)試驗(yàn)，得到留醇酯，磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶回收率很高；重復(fù)使用后酶活力仍保留很高，證明了磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2用于留醇酯的制備中是很有實(shí)用價(jià)值的。
[0010]【具體實(shí)施方式】:
【具體實(shí)施方式】一:
本發(fā)明的目的是固定化磷脂酶A2用于留醇制取留醇酯的一種方法。本實(shí)施方式的步驟如下:
步驟一:取一定量的卵磷脂和相應(yīng)的豆留醇，加入適量的水，再加入脂質(zhì)?；D(zhuǎn)移酶，使反應(yīng)在溫度為60~90°C，一定植物甾醇、反應(yīng)時(shí)間、水的添加量及酶的添加量的條件下反應(yīng)一段時(shí)間后，測定生成留醇酯的含量；
步驟二:選擇植物甾醇添加量為0.5-2.5g，過程同步驟一，確定反應(yīng)中植物甾醇的添加量；
步驟三:選擇磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2的添加量為0.5-1.0g，過程同步驟一，確定磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶4的添加量；
步驟四:選擇水的添加量分別為磁性復(fù)合載體磷脂酶弋添加量的0~2%，過程同步驟一，確定反應(yīng)過程中水的添加量；
步驟五:選擇反應(yīng)時(shí)間分別為l~8h，過程同步驟一，確定反應(yīng)時(shí)間。
[0011]具體實(shí)施方法二:本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟一中將反應(yīng)溫度控制在65~85°C，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
[0012]具體實(shí)施方法三:本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟二中選擇植物甾醇添加量為0.8-2.0g，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
[0013]具體實(shí)施方法四:本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟三中選擇磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2的添加量為0.6-0.Sg，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
[0014]具體實(shí)施方法五:本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟四中選擇水的添加量分別為磁性復(fù)合載體進(jìn)行磷脂酶4添加量的0.5-1.5%，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
[0015]具體實(shí)施方法六:本實(shí)施方法與具體實(shí)施方法一不同點(diǎn)在于步驟五中選擇反應(yīng)時(shí)間分別為2~7h，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2用于甾醇制備甾醇酯的方法，其特征如下: 步驟一:取一定量的卵磷脂和相應(yīng)的豆留醇，加入適量的水，再加入脂質(zhì)?；D(zhuǎn)移酶，使反應(yīng)在溫度為60~90°C，一定植物甾醇、反應(yīng)時(shí)間、水的添加量及酶的添加量的條件下反應(yīng)一段時(shí)間后，測定生成留醇酯的含量； 步驟二:選擇植物甾醇添加量為0.5-2.5g，過程同步驟一，確定反應(yīng)中植物甾醇的添加量； 步驟三:選擇磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2的添加量為0.5-1.0g，過程同步驟一，確定磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶4的添加量； 步驟四:選擇水的添加量分別為磁性復(fù)合載體進(jìn)行磷脂酶^添加量的0~2%，過程同步驟一，確定反應(yīng)攪拌中水的添加量； 步驟五:選擇反應(yīng)時(shí)間分別為l~8h，過程同步驟一，確定反應(yīng)時(shí)間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用固定化磷脂酶A2制備留醇酯的方法，其特征在于步驟一中將反應(yīng)溫度控制在65~85°C，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用固定化磷脂酶A2制備留醇酯的方法，其特征在于步驟二中選擇植物留醇添加量為0.8-2.0g，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用固定化磷脂酶A2制備留醇酯的方法，其特征在于選擇磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2的添加量為0.6-0.Sg，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用固定化磷脂酶A2制備留醇酯的方法，其特征在于步驟四中選擇水的添加量分別為磁性復(fù)合載體進(jìn)行磷脂酶4添加量的0.5-1.5%，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用固定化磷脂酶A2制備留醇酯的方法，其特征在于步驟五中選擇反應(yīng)時(shí)間選擇反應(yīng)時(shí)間分別為2~7h，其它組成和步驟與具體實(shí)施方法一相同。
【專利摘要】本發(fā)明涉及磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2用于甾醇制備甾醇酯的方法。磁性復(fù)合載體進(jìn)行磷脂酶A2的固定化，賦予了固定化酶較強(qiáng)的磁響應(yīng)性，從而可借助外部磁場從反應(yīng)體系中快速簡便回收固定化酶，提高酶的使用效率。另外，還可以有效改善酶的穩(wěn)定性。本發(fā)明的關(guān)鍵是磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2在甾醇制備甾醇酯的過程中其條件的確定，磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2的添加量為0.7g、植物甾醇為1.5g、水為0.007g、反應(yīng)溫度為75℃、時(shí)間為4.5h。按照最佳工藝參數(shù)試驗(yàn)，得到甾醇酯13.5g，磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶回收率很高,重復(fù)使用10次后酶活力仍保留很高，證明了磁性復(fù)合載體固定化磷脂酶A2用于甾醇酯的制備中是很有實(shí)用價(jià)值的。
【IPC分類】C12P33-02
【公開號】CN104561214
【申請?zhí)枴緾N201510022576
【發(fā)明人】于殿宇, 趙貴興, 葛洪如, 江連洲, 王立琦, 齊曉芬, 李相昕, 李俊
【申請人】東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月17日